自身免疫性肝炎与原发性胆汁性肝硬化重叠综合征的临床与病理学研究

目的探讨自身免疫性肝炎与原发性胆汁性肝硬化重叠综合征(AIH-PBCOS)的临床病理学特征。方法对17例临床资料完整、行肝穿刺检查的AIH-PBCOS病例进行临床资料、生化检查和血清自身抗体指标分析,并与117例自身免疫性肝炎和85例原发性胆汁性肝硬化作比较,采用HE染色、网状纤维和胶原纤维染色,结合CK19免疫组织化学染色,探讨其病理学特点,应用免疫组化方法观察肝组织内CD3、CD4、CD8、CD20、CD25、CD57和CD68阳性细胞数量、比例和分布状况。结果该组AIH-PBCOS病例占总的自身免疫性肝病(自身免疫性肝炎+原发性胆汁性肝硬化)的8·4%,男女比例为1∶8·5,平均发病年龄39·3岁,其中血清ANA与抗M2抗体双阳性病例占52·9%(9/17),所有病例血清ALT、AST、TBIL、ALP、γ-Glo、IgG和IgM均较明显升高。病理学观察见汇管区与肝腺泡内以单个核细胞为主的较多炎细胞浸润,其中易见浆细胞的聚积性浸润。可见不同时期小胆管损伤或细胆管反应性增生并侵蚀肝界板。肝组织内CD3+、CD4+、CD8+、CD20+、CD25+、CD57+及CD68+细胞数增加,其中CD3+、CD8+及CD68+细胞比例偏高,尤以损伤小胆管及肝细胞周围为著。结论中国自身免疫性肝病患者群中存在少数(本组病例8·4%)AIH-PBCOS,该重叠综合征具有自身免疫性肝炎与原发性胆汁性肝硬化双重病理特征性改变,细胞免疫为主的免疫性损伤可能是其主要的免疫病理损伤机制。

乙型和丙型肝炎病毒与转录因子ATF-2的调节

乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的感染，不仅引起急、慢性病毒性肝炎，而且与肝纤维化、肝细胞癌（HCC)的发生密切相关．虽然HBV和HCV感染与HCC之间的关系已经得到确定，但是要阐明其具体的分子生物学机制还有许多工作要做．由于肝炎病毒可以影响细胞信号转导，引起细胞的病变及恶性转化。

细胞色素CYPⅡE1与肝脏疾病关系的研究进展

在肝细胞微粒体内有1个氧化还原酶系统，由多种水解酶和结合酶组成。这个酶系统在生理情况下，可以促进生理活性物质的灭活和排泄，另一方面也可以促进药物代谢，所以又叫药酶，细胞色素P450是药酶中的一种多功能氧化还原酶，他可以使药物的烃基及芳香基羟化，使硝基及偶氮化合物还原成氨基，因他的一氧化碳结合物的吸收光谱高峰在450nm处，故叫P450，P450是肝药酶中最重要的酶系，参与各种外源物(如药物、化学毒物、致癌物等)和内源物(如类固醇激素、维生素D、胆酸等)在体内代谢过程，P450中现已知有70多种药物代谢酶分别催化不同物质的生物转化。

乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP7的克隆

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病 X蛋白(HBxAg)反式激活基因差异表达的 cDNA,克隆 HBxAg反式激活相关靶基因.方法:以 HBxAg 表达质粒 pcDNA3.1(-)-X 转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取 mRNA 并逆转录为 cDNA,经 RsaI 酶切后,将实验组 cDNA 分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组 cDNA 进行两次杂交消减及两次抑制性 PCR,将产物与 T/A 载体连接,构建 cDNA 消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆 PCR 扩增后进行测序及同源性分析,发现其中之一为未知基因片段,与 GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性.通过序列同源性搜索比对,电子拼接成功,根据基因起始密码子的 Kozak 规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,初步确定新型基因序列.从转染了 pcDNA3.1(-)的 HepG2细胞提取总RNA,以 RT-PCR 技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序加以证实.结果:发现新基因,命名为 XTP7,在 GenBank 中注册,注册号为 AF490256.XTP7基因的编码序列全长为588个核苷酸(nt),编码产物由196个氨基酸残基(aa)组成.结论:应用 SSH 成功筛选与克隆 HBxAg 反式激活新型靶基因 XTP7,为进一步阐明 HBxAg 反式调节作用及其在 HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法.

乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP8的克隆

目的:应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒 X 蛋白(HBxAg)反式激活基因差异表达的 cDNA,克隆 HBxAg 反式激活相关靶基因.方法:以 HBxAg 表达质粒 pcDNA3.1(-)-X 转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取 mRNA 并逆转录为 cDNA,经 RsaI 酶切后,将实验组 cDNA 分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组 cDNA 进行两次消减杂交及两次抑制性 PCR,将产物与 T/A 载体连接,构建 cDNA 消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆 PCR 扩增后进行测序及同源性分析,发现其中之一为未知基因片段,与GenBank 中注册的已知功能基因序列没有同源性.通过序列同源性搜索比对,电子拼接成功,根据基因起始密码子的Kozak 规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,初步确定新型基因序列.从转染了 pcDNA3.1(-)的 HepG2细胞提取总 RNA,以 RT-PCR 技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序加以证实.结果:发现新基因,命名为 XTP8,在 GenBank 中注册,注册号为 AF490257.XTP8基因的编码序列全长为1590个核苷酸(nt),编码产物由530个氨基酸残基(aa)组成.结论:应用抑制性消减杂交技术成功筛选与克隆 HBxAg 反式激活新型靶基因 XTP8,为进一步阐明 HBxAg 反式调节作用及其在 HBV 感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法.

人La自身抗原蛋白与肝炎病毒的关系

0 引言 乙型和丙型肝炎呈全球分布,目前全世界有1.7亿人感染丙型肝炎病毒(HCV),3.5亿人感染乙型肝炎病毒(HBV),其中相当一部分感染者发展为慢性肝炎,少数还发展成肝硬化甚至肝癌,对人类健康造成极大危害,至今缺乏有效的控制.

温阳健脾法对慢传输型便秘模型大鼠结肠神经递质影响的研究

目的观察温阳健脾法对慢传输型便秘模型大鼠结肠神经递质5-HP、SP、VIP、NO、Ach表达的影响。方法运用泻药法复制便秘大鼠动物模型,观察大鼠的粪便粒数、重量和形态,并测定肠道运输功能以确定造模成功。采用温阳健脾的中药配方颗粒治疗,并与西药莫沙比利对照,免疫组化法观察肠神经递质5-HP、SP、VIP、NO、Ach的表达。结果温阳健脾法可增加便秘大鼠5-HP、SP、VIP、Ach表达,降低NO表达。结论大鼠便秘的发生可能与肠神经递质表达有关,中药温阳健脾法可以改变相关表达。

应用抑制性消减杂交技术筛选HBV DNA聚合酶中RNase H的反式调节基因

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建HBV DNA聚合酶(DNA P)末端蛋白反式激活基因. 方法:以RNase H表达质粒pcDNA3.1(-)-RNase H转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI 酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库, 并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析. 结果:文库扩增后得到38个白色克隆,经菌落PCR分析, 得到36个200-1 000 bp插入片段.对所得片段测序,并进行同源性分析,显示33种已知基因编码蛋白和3种未知功能基因序列,可能是RNase H反式激活靶基因, 结论:成功构建HBV RNase H反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.

网状纤维染色-渡边改良法的应用体会

网状纤维染色在病理诊断中的应用非常广泛,网状纤维的形态分布、增多或减少、断裂或崩解等病理变化在病理诊断上具有重要意义,特别是对协助肿瘤诊断和鉴别诊断有较大的帮助,如在肝中,网状纤维的变化灵敏的反映肝细胞的脱失、增生、结节性病变、肿瘤以及纤维化程度,已为病理诊断上不可缺少的一种特殊染色方法。

细胞因子在严重急性呼吸综合征中的作用初步探讨

目的：观察严重急性呼吸综合征(SARS)肺损伤的病理学特点，并对细胞因子在SARS中的作用进行初步的探讨。方法：对5例SARS死亡病例进行尸体解剖，HE染色，观察SARS肺组织的病理改变：采用免疫组织化学SP法检测肺组织Fas、Fas配体(FasL)、转化生长因子β1(TGF-β1)、核转录因子-κB(NF-κBp65)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子(VCAM-1)的活性。结果：肺部病变主要表现为弥漫性的肺间质炎症及肺泡损伤，肺泡上皮细胞凋亡脱落及肺透明膜形成，肺间隔明显增宽，以淋巴细胞和单核细胞为主的炎细胞浸润。5例肺组织Fas、FasL、TGF-β1、NF-κBp65、iNOS、ICAM-1、VCAM-1的检测均为阳性，阳性信号分别表达于肺泡上皮细胞、巨噬细胞及淋巴细胞的胞浆及胞核内。结论：SARS患者的肺组织表现为急性肺损伤，细胞因子Fas、FasL、TGF-β1、NF-κBp65、iNOS、ICAM-1、VCAM-1在SARS患者肺组织的损伤中起重要的作用。

乙型和丙型肝炎病毒蛋白对胱冬肽酶基因表达的调节作用

细胞凋亡(apoptosis)又称细胞程序化死亡(programmed cell death，PCD)，是细胞死亡形式之一，他以细胞DNA发生特异性的降解，形态上表现为核固缩、胞膜发泡和凋亡小体形成为特征,PCD由天门冬氨酸(Asp)特异性半胱氨酸(Cys)蛋白酶(Caspartate-specific cysteinyl proteinase)，即胱冬肽酶(Caspase或Casp)家族介导．活化的胱冬肽酶触发酶级联效应，引起染色体DNA的降解及细胞解体．胱冬肽酶家族是PCD过程的关键元件，他的激活与超常表达均引起细胞凋亡，因此又称死亡蛋白酶，他们通过与众多蛋白质因子的相互作用调控PCD。

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对转录因子ATF-1的调节

0 引言。乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的感染，不仅引起急、慢性病毒性肝炎，而且与肝纤维化、肝细胞癌(HCC)的发生密切相关．虽然HBV和HCV感染与HCC之间的关系已经得到确定，但是具体的分子生物学机制还不十分清楚．由于肝炎病毒可以影响肝细胞信号转导，引起细胞的病变及恶性转化，而激活转录因子-1(activating transcription factor-1，ATF-1)是重要的细胞信号转导途经中的转录因子，因此深入研究二者的相互关系对肝炎病毒的发病机制研究有进一步的帮助．

富含脯氨酸的酪氨酸激酶-2与肝炎病毒关系的研究进展

富含脯氨酸的酪氨酸激酶-2(proline-rich tyrosine kinase 2，Pyk-2)是一种属于局灶黏附激酶(FAK)家族的细胞质中的酪氨酸激。Pyk-2在多种组织中表达丰富，包括大脑、肺、肠、肾、脾和血管平滑肌细胞．Pyk-2能被多种细胞外刺激物激活，例如G蛋白耦合受体(Gprotein-coupled receptor，GPCR)激动剂，蛋白激酶C(PKC)的活化，细胞内钙离子浓度的升高，紫外线(UV)辐射和细胞外摩尔渗透压浓度。

TATA盒结合蛋白与肝炎病毒的关系

病毒性肝炎流行范围非常广泛，就我国而言，其发病率之高，危害性之大，堪称传染病之魁首．以乙型肝炎为例，全球约有3．5亿慢性病毒携带者，其中至少20—30％患有不同程度的肝脏损害．我国人群中乙型肝炎病毒(HBV)的感染率高达60％，其中约1．2亿为HBsAg携带者．此外，慢性HBV和丙型肝炎病毒(HCV)

乙型肝炎病毒DNA聚合酶中核糖核酸酶RNase H反式调节基因DNAPTP4的克隆化研究

目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病毒(HBV)核糖核酸酶RNaseH蛋白反式激活基因差异表达的cDNA,克隆RNaseH反式激活相关靶基因。方法以RNaseH表达质粒pcDNA31(-)RNaseH转染HepG2细胞,以空载体pcDNA31(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析,其未知基因片段通过Kozak规则和多聚腺苷酸信号序列,初步确定。以逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序加以证实。结果该新基因被命名为DNAPTP4,在GenBank中注册,注册号为AY450392。DNAPTP4基因的编码序列全长为828个核苷酸(nt),编码产物由276个氨基酸残基(aa)组成。结论应用SSH技术成功筛选与克隆RNaseH反式激活新型靶基因DNAPTP4,为进一步阐明RNaseH反式调节作用及其在HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法。

乙型肝炎患者肝组织中IL—18的表达

目的：探讨急、慢性乙型肝炎患者肝组织中IL－18的表达状况。方法：采用免疫组织化学以抗IL－18单克隆抗体对102例肝穿急、慢性乙型肝炎病毒性肝炎石蜡包埋组织中的IL－18进行了检测，部分病例采用原位杂交证实。结果：IL－18在Kupffer细胞、巨噬细胞及肝细胞胸浆表面，其中肝细胞与Kupffer细胞的表达相关。HBsAg及IL－18免疫组化双标记检测显示Kupffer细胞仅有IL－18的表达，部分肝细胞胸浆中有HBsAg和IL－18的双表达。Kupffer和肝细胞胞浆交信号证实了免疫组化结果的可信性。在急性乙型肝炎和慢性肝炎轻度以及慢性肝炎中、重度和慢性肝炎轻度无论是Kupffer还是肝细胞中IL－18的表达程度都有显著性差异（P＜0.05），但在急性和慢性肝炎中、重度之间无显著性差别（P＞0.05）。结论：乙型肝炎患者肝组织中IL－18的表达程度与肝组织炎症、组织损作程度及不同病理类型有关。

严重急性呼吸综合征3例尸检病理分析

目的 探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者的病变的病理形态特点及与临床表现的相关性。方法 对3例SARS死亡病例进行尸体解剖,光镜观察各脏器的病理变化,并与临床表现进行联系。结果 肉眼突出的病理改变为双肺的弥漫性出血,镜下为肺泡的急性渗出性、出血性和纤维素性炎症,肺泡毛细血管充血,一些毛细血管内微血栓形成。肺泡壁增厚,单个核细胞浸润,肺泡上皮损伤脱落,肺泡腔内渗出物伴透明膜形成。部分肺泡腔内有纤维素样物质及红细胞,少数肺内支气管动脉内血栓栓塞。淋巴结及脾脏等出血坏死,淋巴细胞衰减。其他实质脏器如肝、心、肾、胰腺等呈非特异性改变,如水样变性,脂肪变性、间质细胞增生等以及3例老年患者此次入院前存在的基础病变。结论 SARS具有其病理形态特点,患者的肺部严重病变及免疫器官的损伤引起相应的临床表现并导致患者死亡。

节段性脐血管变薄致分娩中脐带血管自发破裂致死产一例

患者女，27岁。孕4产0，因“孕37周＋4，先兆临产”入院。患者孕期平顺，唐氏综合征筛查低危，排畸检查B超未见胎儿异常，口服糖耐量试验正常。2015年3月13日晚8时因下腹阵痛半日急诊入中日友好医院产科。入院时宫颈消退70％，宫口容一指、软、居中，S-3。入院后行胎心监护示反应型，宫缩30 s／（3～5）min。宫口开2 cm后入待产室，行入室胎心监护，宫缩规律，胎心反应型。后每间隔30 min听诊胎心均正常。3月14日凌晨3时50分患者诉排便感，查宫口开全，胎头此时已拨露，上产床，听诊未及胎心。凌晨3时55分自然破水，羊水清。凌晨4时4分会阴侧切下新生儿娩出，重度失血外观，无生命迹象，Apgar评分0分。后羊水呈血性，量约400 mL。凌晨4时10分胎盘胎膜自然娩出，见脐带根部与胎盘连接处有一血管破口，纵行，长约0.5 cm，破口处仍有血液渗出。新生儿经抢救后仍无生命迹象。胎盘、脐带送病理。