临床免疫学教学的几点体会

临床免疫学课程的教学应体现免疫学的前沿性和应用性与临床医学的实践性相结合的特点,起到桥梁课程的作用,为医学生各门临床课程的学习打下良好的基础。

医学院校专职教师兼任学系教学秘书工作的思考

高效能的教学管理工作是维持高校正常教学工作运行的保障,学系教学秘书是基层教学管理服务人员,在整个教学日常工作运行中起着重要的纽带和桥梁作用。针对医学院校由专职教师兼任学系教学秘书的情况,总结了学系教学秘书承担的基本职责和工作特点,分析了专职教师兼任教学秘书对于教学改革工作的推进作用以及存在的问题,并初步探讨了问题的解决方案,为教学管理及教学质量的提高提供改革思路。

利用网络构建免疫学教学新模式

当互联网已成为交流沟通、获取信息的重要方式时,网络教学形式也在各种教育机构兴起和发展,从而大大推动了高等院校专业知识的传播。对于免疫学这一前沿学科,探讨符合其学科特点的架构和策略的免疫学网络教学模式,是免疫学教育教学改革的重要内容。

《医学免疫学》网络课程的建设与思考

医学免疫学是一门重要的医学交叉学科,知识相对抽象,理论性强,更新速度快。传统的课堂式教学表达力有限,易导致枯燥乏味。网络课程具有异步性、资源富集性、共享性、协作性及互动性等特点,是课堂教学的有力辅助和扩展。从启发学生主动思考、促进师生交流、帮助学生形成个性化的知识体系出发,围绕《医学免疫学》网络课程平台搭建、内容搜集及编排、课程框架设计等方面进行了深入的探讨,可为充分利用网络教学平台的资源优势提供参考。

2016年基础及临床免疫学进展

2016年基础免疫学研究进展包括进一步阐明了不同蛋白成分在不同效应T细胞和效应B细胞中所起的作用,如肌动蛋白细胞骨架中涉及的细胞因子和蛋白质。通过对家族性噬血细胞综合征的研究进一步阐明了细胞毒性细胞中颗粒物质形成和分泌的规律。确定了甲羟戊酸激酶缺乏导致的炎症反应的患者中异戊烯化的作用。同时也回顾了临床免疫研究进展,以及全基因组测序新方法和新报道的与免疫缺陷相关基因,如T细胞活化连接蛋白基因(LAT); B细胞淋巴瘤/白血病相关基因11B (BCL11B);具有RGD序列、富含亮氨酸重复序列、原肌球蛋白调节蛋白结构域、富含脯氨酸结构域的蛋白(RLTPR);膜突蛋白; JAK激酶1 (JAK1)。在原发性免疫缺陷进行造血干细胞移植和基因治疗方面取得相对意义上的成功;证实了自体病毒特异性细胞毒性T细胞使用的有效性。正在探索新的药物用法,例如吡格列酮在慢性肉芽肿患者中对增强呼吸爆发方面所起的作用。在HIV感染疫苗研究方面的持续进展为抗高突变率病毒免疫应答提供思路。

中药本草九代对小鼠血清生物学活性及T、B细胞增殖、分化的影响

小鼠腹腔注射本草九代后，血清补体溶血活性增强，溶血效价由１／８升高到１／３２；血清对免疫复合物形成的抑制作用增强，抑制率由１９３％上升到４２３％；血清对免疫复合物的溶解能力增强，溶解率由９１％上升到２５１％。此外，本草九代还能增强小鼠免疫功能，实验组小鼠Ｔ淋巴细胞转化率和抗体形成细胞数。

巴斯德毕赤酵母表达系统及其分泌型蛋白表达的研究进展

巴斯德毕赤酵母表达系统可使用强效的醇氧化酶 1(AOX1)启动子 ,在甲醇诱导下实现外源基因的高效表达。外源基因整合入酵母的染色体基因组后 ,通过营养缺陷型基因或抗性基因进行阳性转化子的筛选。将外源基因阅读框架与信号肽相融合即可得到被修饰的分泌型外源目的蛋白。现已有多种方法可进一步提高外源目的蛋白的表达量。

用FPLC系统提纯可溶型Ⅱ型胶原蛋白

目的采用 FPL C系统提取纯化可溶型 型胶原蛋白 (C )。方法采用鸡剑突软骨 ,经胃蛋白酶消化离心 ,再使用 FPL C系统进行 DEAE Sepharose FF高效液相离子交换层析和脱盐柱脱盐 ,得到纯化的 C 。结果自提的 C 纯品与C 标准品电泳结果带型一致。结论本法提纯蛋白效率高 ,重复性好 ,快速简便。

肺移植术后早期移植气管的病理学改变及γδT细胞变化的研究

目的:建立同种同型小鼠原位气管移植模型,模拟并观察肺移植手术早期移植气管的病理学改变和固有γδT细胞的动态变化。方法:雄性C57BL/6小鼠(n=45),随机分为对照组(n=15)和实验组(n=30),各组又随机分为1天、3天、5天三个亚组。对实验组小鼠建立原位气管移植模型,术后第1,3,5天对两组小鼠行肺功能检查、肺泡灌洗液行总细胞计数及分类、移植气管组织病理学检查,使用流式细胞技术检测气管引流淋巴结中γδT细胞的比例,并采用实时荧光定量PCR技术检测移植气管组织中IL-17A基因表达水平。结果:与对照组比较,实验组术后第3,5天的肺总阻力明显增高(P<0.05);实验组肺泡灌洗液中总细胞计数均显著增加(P<0.05),且以巨噬细胞和中性粒细胞为主;实验组术后气管黏膜下层水肿;实验组术后第1,3天小鼠气管引流淋巴结中γδT细胞占CD3+T细胞的比例明显高于对照组[1天:(2.66±0.19)vs.(1.82±0.13)%;3天:(2.33±0.07)vs.(1.82±0.16)%];与对照组相比,实验组中所有亚组IL-17A mRNA的表达量明显增加(P<0.05)。结论:同种同型小鼠气管移植手术创伤,可激活γδT细胞等固有免疫细胞,其中γδT细胞可能通过分泌IL-17A进一步募集巨噬细胞和中性粒细胞,加剧移植术后的炎性反应,导致移植气管黏膜下层水肿。

血吸虫虫卵肉芽肿的形成机制及免疫调节

血吸虫虫卵肉芽肿的形成机制及免疫调节胡永秀薛燕萍１（首都医科大学免疫学系，北京１０００５４）世界卫生组织的统计资料表明，热带和亚热带地区约有２亿人患血吸虫病。血吸虫病对这些地区人民的健康造成了严重威胁（Ｈｕｎｔｅｒ等，１９９３）。寄生在静脉系统的血吸...

重组杆状病毒表达的EIAV Env蛋白与含有env基因重组痘苗病毒的联合免疫

目的:构建新型的马传染性贫血病毒(EIAV)的候选疫苗。方法:利用BAC-To-BAC杆状病毒表达系统,将中国马传贫驴白细胞弱毒疲苗(EIAV DLV)及其亲本株(EIAV LN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后,得到的重组病毒用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。以本实验室构建的含有EIAV Env基因的重组痘苗病毒,单独或与重组杆状病毒表达的EIAV Env蛋白联合免疫小鼠。结果:构建的重组杆状病毒能正确表达全长Env蛋白。与单独免疫组相比,联合免疫组免疫应答显著增强,其中中和抗体的滴度提高5～9倍。结论:含有EIAV Env基因的重组痘苗病毒与Env蛋白抗原联合免疫,能够诱导高滴度的中和抗体。

胶原诱导的关节炎大鼠关节中浸润的T细胞TCR Vβ克隆型分析

目的:研究胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠关节中局部浸润的T细胞TCRVβ克隆型。方法:用II型胶原(CII)诱导Lewis大鼠发生关节炎后,经流式细胞术分析大鼠外周血CD4+和CD8+细胞的变化。提取CIA大鼠关节组织的总RNA,通过RT-PCR/SSCP方法分析大鼠两后肢足关节中TCRVβ克隆型的一致率。将CIA大鼠脾淋巴细胞转移至同系正常大鼠,观察发病情况。结果:从注射CII的第30天起,大鼠后爪出现红、肿等症状。流式细胞术分析显示,与正常大鼠相比较,CIA大鼠外周血CD8+T细胞的降低有显著性意义(P<0.01),CD4+T/CD8+T的比值大于2(P<0.01),提示CIA大鼠体内存在T淋巴细胞亚群的比例失调。CIA大鼠两后肢足关节中聚集的TCRVβ克隆型的一致率,以TCRVβ5.2和8.2最高,分别为78.89%和72.23%。脾淋巴细胞转移试验显示,受者发病的大鼠关节中,出现与供者CIA大鼠一致的TCRVβ克隆型条带,表明关节局部聚集的TCRVβ克隆型与关节炎(RA)的发病有关。结论:CIA大鼠关节局部存在以TCRVβ5.2和8.2为主的致病性的T细胞TCRVβ克隆型,可将其作为治疗CIA的靶物质,进行实验动物RA治疗的研究。

结核杆菌热休克蛋白肽段对胶原诱导性关节炎保护作用的研究

目的:研究结核杆菌HSP65肽段(P256-270)和结核杆菌HSP70肽段(P111-125)对类风湿关节炎动物模型——胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的保护性作用。方法:结核杆菌HSP肽段滴鼻免疫大鼠,观察其对CIA的防治效果,观察指标包括关节炎指数评分、关节病理学分析、酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测脾脏淋巴细胞分泌细胞因子(IL-4、IFN-γ)水平、流式细胞术分析外周血T淋巴细胞亚群及酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清中抗CⅡ抗体水平。结果:分别经结核杆菌HSP65和HSP70肽段滴鼻免疫的实验组大鼠,与阳性对照组比较,关节炎指数明显下降(P<0·05),病理变化减轻,抑制性细胞因子IL-4水平升高(分别为P<0·05和P<0·01),而炎性细胞因子IFN-γ水平降低(P<0·01),CD4+/CD8+T细胞比值降低(P<0·05),血清中抗CⅡ抗体水平也降低(分别为P<0·05和P<0·01)。结论:应用结核杆菌HSP65肽段或HSP70肽段能减轻CIA大鼠的症状和体征,其作用机制与调节T细胞的功能有关,此研究可为探讨人类RA新的免疫治疗方法提供依据。

雷帕霉素和地塞米松对小鼠树突状细胞分化成熟的调控

目的:观察雷帕霉素(rapamycin,Rap)和地塞米松(dexamethasone,Dex)对培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)分化发育的影响。方法:(1)用GMCSF+IL4定向诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞分化为DC,分别加入Rap或Dex,然后用脂多糖(LPS)刺激。在倒置显微镜和扫描电镜下,动态观察DC形态学上的变化。(2)通过流式细胞术(荧光抗体双标记法)测定CD11c+细胞的比例及CD86和MHCⅡ类分子表达的变化。(3)通过单向混合淋巴细胞反应(MLR)观察,Rap和Dex处理的DC刺激BALB/c小鼠同种异基因T细胞增殖的情况。结果:(1)经Rap和Dex处理后,DC在形态学上呈现稳定不成熟状态。(2)Rap处理的细胞表面CD11c和MHCⅡ类分子的表达仅有轻度降低,而CD86的表达明显降低。Dex处理的细胞表面CD11c的表达与Dex的剂量呈负相关,CD86和MHCⅡ类分子的表达均明显降低。两种药物处理的DC均可抵抗LPS的促成熟作用。(3)MLR的结果显示,Rap和Dex处理的DC刺激同种异基因BALB/c小鼠T细胞增殖的能力均较低。结论:Rap和Dex均可使DC处于稳定的不成熟状态。与Dex相比,Rap对骨髓造血干细胞向DC分化的过程影响较小,而且在抑制DC表面协同刺激分子CD86表达的同时,对MHCⅡ类分子的表达影响较小。

大鼠TCR Vβ8.2基因真核表达质粒的构建及表达

目的:构建含大鼠TCRVβ8.2基因的重组真核表达质粒,并检测其在体内外的表达。方法:以RTPCR法分离Lewis大鼠脾淋巴细胞中的TCRVβ8.2基因片段,插入到真核表达载体pTARGET中,构建重组表达载体pTARGETTCRVβ8.2,并转化E.coliJM109,经蓝白斑筛选阳性菌落,进行菌落PCR和测序鉴定。将重组质粒以肌注法免疫BALB/c小鼠,采集注射部位股四头肌处的肌肉,用RTPCR及免疫组化染色法检测TCRVβ8.2基因在注射部位的转录和表达。通过脂质体介导,将重组质粒导入COS7细胞中进行瞬时表达,用免疫细胞化学染色法检测靶基因在真核细胞内的表达。结果:测序鉴定证实,TCRVβ8.2基因已被正确插入到pTARGET载体中,并检测到在肌肉组织和COS7细胞内重组蛋白的表达。结论:成功地构建重组真核表达质粒pTARGETTCRVβ8.2,并在体内体外均可检测到其转录和表达,为进一步进行TCRVβDNA疫苗的研究奠定了基础。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及其相关因素分析

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药现状,加强临床 MRSA 的监控。方法回顾性分析临床46株 MRSA 耐药性,并用 PCR 法对 MRSA 进行β-内酰胺类耐药相关基因mecA、氨基糖甙类耐药相关基因 aac(6′)/aph(2″)、红霉素类耐药基因 emr 和耐消毒剂基因 qac(A/B)检测。结果 46株 MRSA 表现多重耐药和高度耐药性,并检测出相关的耐药基因。结论在临床工作中加强 MRSA 的监测、合理使用抗生素、严格消毒隔离制度是控制 MRSA 医院感染的关键。

鉴别诊断临床急性肺炎病原体感染的血清标志物研究

目的检测急性肺炎患者血清相关生物标志物含量,为建立一种快速鉴别诊断临床急性支原体肺炎、病毒性肺炎、细菌性肺炎的免疫胶体金检测法提供实验依据。方法以临床病原学诊断明确的急性支原体肺炎,病毒性肺炎,细菌性肺炎患者和正常人血清为检测样品,采用血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)/杀菌渗透增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒检测上述血清中相关生物标志物含量。结果 (1)正常人群血清78份,急性支原体肺炎患者血清46份,病毒性肺炎和细菌性肺炎患者血清42份,其中病毒感者患者血清35份,细菌感染患者血清7份;(2)正常人群血清PDGF最大值<6 000 pg/m L;血清BPI最大值<80 ng/m L;(3)以血清PDGF值6 000 pg/m L作为鉴别诊断急性支原体感染的基线值,支原体感染患者阳性检出率为93.47%(43/46);病毒和细菌感染患者出现支原体感染的假阳性率为7.14%(3/42);(4)以血清BPI值80 ng/m L作为鉴别诊断急性细菌感染的基线值,细菌感染患者阳性检出率为85.71%(6/7);病毒感染患者出现细菌感染的假阳性率为3.22%(1/31)。结论以血清PDGF6 000 pg/m L和BPI 80 ng/m L作为鉴别诊断不同病原体感染的基线值,对临床急性支原体肺炎、病毒性肺炎、细菌性肺炎鉴别诊断具有一定意义。

胶原诱导性关节炎的评定与T细胞受体-热休克蛋白70 DNA疫苗的保护作用

目的:纯化制备含有编码T细胞受体(TCR)Vβ5.2/8.2基因片段与结核杆菌热休克蛋白(HSP)70的一段保守序列P111-125的嵌合DNA疫苗,观察其对胶原诱导性关节炎的保护性作用。方法:实验于2006-07/2007-02在首都医科大学免疫学系实验室完成。①实验分组:36只Lewis大鼠随机分为6组,即正常对照组、胶原诱导性关节炎对照组、空质粒组、pTARGET-TCRVβ5.2-HSP70重组质粒治疗组、pTARGET-TCRVβ8.2-HSP70重组质粒治疗组及pTARGET-TCRVβ5.2-HSP70和pTARGET-TCRVβ8.2-HSP70重组质粒联合治疗组,每组6只。②实验方法:大量纯化制备重组DNA疫苗pTARGET-TCRVβ5.2-HSP70、pTARGET-TCRVβ8.2-HSP70和空质粒pTARGET,观察重组DNA疫苗对胶原诱导性关节炎的保护效果,包括关节炎指数评分、Eli-spot法测定脾细胞分泌的干扰素γ和白细胞介素4的水平、ELISA法测定血清中抗Ⅱ型胶原抗体的水平;光镜下观察大鼠后肢足关节的病理学变化。结果:36只Lewis大鼠均进入结果分析。重组DNA疫苗pTARGET-TCRVβ5.2-HSP70和pTARGET-TCRVβ8.2-HSP70对胶原诱导性关节炎有较好的保护性作用,与胶原诱导性关节炎对照组相比,关节炎指数(P<0.05)下降,炎性细胞因子干扰素γ水平(P<0.05)和抗Ⅱ型胶原抗体水平(P<0.01)降低,抑制性细胞因子白细胞介素4水平(P<0.05)升高,病理学改变较轻。且两种重组质粒联合治疗的效果要比单种质粒好。结论:重组DNA疫苗pTARGET-TCRVβ5.2-HSP70和pTARGET-TCRVβ8.2-HSP70能明显减轻胶原诱导性关节炎大鼠的关节炎症状和病理改变,二者联合应用效果更佳。

类风湿关节炎小鼠关节聚集的T细胞克隆型变化的分析

目的 :通过对类风湿性关节炎 (RA)小鼠模型发病不同时期的四肢足关节聚集的T细胞克隆型的分析 ,了解T细胞克隆型与RA病变的关系。方法 :用RT PCR/SSCP法 ,对一种自发性RA小鼠模型 (SKG小鼠 )发病初期与后期四肢足关节聚集的T细胞克隆型进行比较分析。结果 :在发病后期 ,四肢足关节中一致的Vβ2和Vβ8.2T细胞克隆型均明显升高 (分别为 72 .3%和 6 0 .2 % )。结论 :TCR为Vβ2和Vβ8.2的T细胞克隆 。