成年大鼠非胰岛内Nestin阳性细胞的体外分离、培养及分化

目的 :建立成年大鼠胰腺非胰岛内 Nestin阳性细胞的体外分离培养及分化的方法。方法 :采用胰管内注入胶原酶消化法分离 3只成年大鼠胰腺组织 ,并经含 10 %胎牛血清 RPMI16 4 0液 (p H7.6 )体外培养 ,36 h后弃去悬浮细胞及胰岛 ,改用无 10 %胎牛血清 RPMI16 4 0液 (p H7.4 )加 b FGF、EGF及 N2 添加剂培养 ,18～ 2 2 d后收集新生类胰岛样细胞团并传代培养。挑选新分离的胰岛和新生类胰岛样细胞团每次各 4 0个 ,共 3次 ,采用1 31 放射免疫法测定分离的胰岛及新生类胰岛样细胞团的胰岛素分泌量 ,并计算葡萄糖刺激指数 (SI) ;免疫荧光细胞化学法检查贴壁细胞及传代后的新生类胰岛样细胞团 Nestin阳性细胞的表达。结果 :胰管内注入胶原酶消化法可获得功能、形态良好的胰岛 ;分离后胰腺组织在 p H7.6的 10 %胎牛血清 RPMI16 4 0液培养条件下 ,36 h内胰岛细胞不贴壁 ,贴壁细胞中大多数表达 Nestin阳性细胞 ,无胰岛素和胰高血糖素表达 ,但 Nestin表达不一 ,培养 18～ 2 2 d可见新生类胰岛样细胞团出现 ,新生类胰岛样细胞团传代后仍可见 Nestin阳性细胞。新分离的 4 0个胰岛在含糖 3.3、 16 .7m mol· L- 1培养液中胰岛素分泌量为 (6 3.6± 4 .0 )、 (2 0 2 .2± 14 .8) m IU· L- 1 ;而新生的4