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敲除组蛋白甲基转移酶PR结构域锌指蛋白9抑制牙周膜干细胞成骨向分化
1
作者
张建鹏
杨昊清
+1 位作者
严妍
侯本祥
《中华口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期841-846,共6页
目的研究组蛋白甲基转移酶PR结构域锌指蛋白9(PR domain zinc finger protein 9,PRDM9)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cell,PDLSC)成骨向分化的影响.方法将与PRDM9序列互补的短发夹RNA亚克隆到含有绿荧光蛋白的慢病毒载体中...
目的研究组蛋白甲基转移酶PR结构域锌指蛋白9(PR domain zinc finger protein 9,PRDM9)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cell,PDLSC)成骨向分化的影响.方法将与PRDM9序列互补的短发夹RNA亚克隆到含有绿荧光蛋白的慢病毒载体中,利用重组慢病毒敲除PDLSC中的PRDM9基因,形成敲除组(简称PRDMsh组),转染空载体sh RNA作为对照组;应用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测PRDM9基因的敲除效率;通过碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性测定、茜素红染色和钙离子定量分析检测敲除组PRDM9sh与对照组细胞成骨能力的差异;通过实时定量RT-PCR及蛋白免疫印迹实验检测敲除组PRDM9sh和对照组成骨分化指标骨钙蛋白在mRNA水平及蛋白水平的表达差异;通过裸鼠皮下移植物HE染色比较敲除组PRDM9sh及对照组体内成骨能力,计算新成骨组织面积百分比并进行统计学分析.结果实时定量RT-PCR结果显示,敲除组PRDM9sh中PRDM9基因的相对表达量(0.460±0.017)显著低于对照组(1.000±0.107)(P<0.05);成骨诱导5d后,敲除组PRDM9sh的ALP活性(0.762±0.063)显著低于对照组(1.225±0.058)(P<0.01);成骨诱导2、3周后,茜素红染色结果显示,与对照组相比敲除组PRDM9sh染色明显变浅;成骨诱导2、3周后,敲除组PRDM9sh钙离子含量[分别为(0.071±0.004)、(0.075±0.001)]较对照组[分别为(0.282±0.006)、(0.485±0.004)]显著降低(P<0.01);RT-PCR结果显示成骨2周时,敲除组PRDM9sh骨钙蛋白mRNA水平的相对表达量(1.059±0.148)显著低于对照组(2.542±0.190)(P<0.01);蛋白质印迹法结果显示成骨诱导1、2周时,敲除组PRDM9sh骨钙蛋白的蛋白水平表达明显弱于对照组;裸鼠皮下移植物HE染色及计算新成骨组织面积百分比结果显示敲除组PRDM9sh新成骨组织面积百分比[(3.8±2.41)%]较对照组[(24.54±7.06)%]显著降低(P<0.05).结论敲除PRDM9基因可以抑制牙周膜干细胞的体内外成骨分化功能.
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关键词
甲基转移酶类
牙周膜
间充质干细胞
PR结构域锌指蛋白9
成骨分化
原文传递
题名
敲除组蛋白甲基转移酶PR结构域锌指蛋白9抑制牙周膜干细胞成骨向分化
1
作者
张建鹏
杨昊清
严妍
侯本祥
机构
首都医科大学
口腔医学
院牙体牙髓科
首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生与口腔组织功能重建北京市重点实验室
出处
《中华口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期841-846,共6页
基金
北京市教育委员会科技发展计划一般项目(KM201810025026)。
文摘
目的研究组蛋白甲基转移酶PR结构域锌指蛋白9(PR domain zinc finger protein 9,PRDM9)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cell,PDLSC)成骨向分化的影响.方法将与PRDM9序列互补的短发夹RNA亚克隆到含有绿荧光蛋白的慢病毒载体中,利用重组慢病毒敲除PDLSC中的PRDM9基因,形成敲除组(简称PRDMsh组),转染空载体sh RNA作为对照组;应用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测PRDM9基因的敲除效率;通过碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性测定、茜素红染色和钙离子定量分析检测敲除组PRDM9sh与对照组细胞成骨能力的差异;通过实时定量RT-PCR及蛋白免疫印迹实验检测敲除组PRDM9sh和对照组成骨分化指标骨钙蛋白在mRNA水平及蛋白水平的表达差异;通过裸鼠皮下移植物HE染色比较敲除组PRDM9sh及对照组体内成骨能力,计算新成骨组织面积百分比并进行统计学分析.结果实时定量RT-PCR结果显示,敲除组PRDM9sh中PRDM9基因的相对表达量(0.460±0.017)显著低于对照组(1.000±0.107)(P<0.05);成骨诱导5d后,敲除组PRDM9sh的ALP活性(0.762±0.063)显著低于对照组(1.225±0.058)(P<0.01);成骨诱导2、3周后,茜素红染色结果显示,与对照组相比敲除组PRDM9sh染色明显变浅;成骨诱导2、3周后,敲除组PRDM9sh钙离子含量[分别为(0.071±0.004)、(0.075±0.001)]较对照组[分别为(0.282±0.006)、(0.485±0.004)]显著降低(P<0.01);RT-PCR结果显示成骨2周时,敲除组PRDM9sh骨钙蛋白mRNA水平的相对表达量(1.059±0.148)显著低于对照组(2.542±0.190)(P<0.01);蛋白质印迹法结果显示成骨诱导1、2周时,敲除组PRDM9sh骨钙蛋白的蛋白水平表达明显弱于对照组;裸鼠皮下移植物HE染色及计算新成骨组织面积百分比结果显示敲除组PRDM9sh新成骨组织面积百分比[(3.8±2.41)%]较对照组[(24.54±7.06)%]显著降低(P<0.05).结论敲除PRDM9基因可以抑制牙周膜干细胞的体内外成骨分化功能.
关键词
甲基转移酶类
牙周膜
间充质干细胞
PR结构域锌指蛋白9
成骨分化
Keywords
Methyltransferase
Periodontal ligament
Mesenchymal stem cells
PR domain zinc finger protein 9
Osteogenesis differentiation
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
敲除组蛋白甲基转移酶PR结构域锌指蛋白9抑制牙周膜干细胞成骨向分化
张建鹏
杨昊清
严妍
侯本祥
《中华口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
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参考文献
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