Dickkopf-1基因在头颈部鳞状细胞癌中的表达及对细胞系表型变化的影响

目的通过数据库分析Dickkopf-1(DKK1)基因在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达和临床意义,DKK1对头颈部鳞癌细胞表型的影响。方法使用GEPIA分析DKK1在HNSCC中的表达及其与患者生存率间的关系,并通过qRT-PCR对DKK1在HNSCC细胞系中的表达进行验证。使用LinkedOmics数据库分析DKK1表达与HNSCC临床病理特征关系。使用siRNA转染下调HNSCC细胞系CAL-27细胞中DKK1表达并通过流式细胞术、细胞划痕实验和细胞侵袭实验评估DKK1对头颈部鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果DKK1在HNSCC中显著高表达;qRT-PCR体外验证DKK1在HNSCC细胞系中表达均升高,其中在SCC-4、SCC-9、SCC-25、CAL-27中表达显著升高。DKK1表达水平与HNSCC患者T分期和病理分期呈显著正相关,与HNSCC患者总生存率呈显著负相关。下调DKK1表达后,CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。结论DKK1与HNSCC的发生发展及预后密切相关,可能成为HNSCC新的生物学标志物和潜在治疗靶点。

低浓度硝酸盐对人血管内皮细胞缺氧复氧损伤保护作用的实验研究

目的以血管内皮细胞缺氧复氧损伤模型作为缺血再灌注损伤的体外研究模型,探究硝酸盐对血管内皮缺血再灌注损伤的保护作用及可能机制。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立人血管内皮细胞缺氧复氧损伤模型,缺氧时间为3 h,复氧时间为2 h。以CCK-8法验证不同浓度的硝酸钠对血管内皮细胞活性的影响,确定适宜浓度。以10μmol/L作为硝酸钠保护血管内皮细胞缺氧复氧损伤的适宜浓度,以Annexin V-PE/7AAD染色流式细胞法验证细胞凋亡水平的变化,以实时定量PCR和免疫印迹法验证Sialin蛋白及其编码基因SLC17A5的表达水平变化。结果 CCK-8实验证实了在较低浓度的硝酸钠作用下,缺氧复氧损伤后血管内皮细胞活性较对照组(未加硝酸盐组)有显著升高(P<0.05),以10μmol/L作用最为明显。极低浓度(1μmol/L)及较高浓度(50μmol/L,100μmol/L)硝酸钠作用下,细胞活性较对照组无明显差异。10μmol/L硝酸钠作用下,缺氧复氧损伤后血管内皮细胞细胞凋亡水平显著下降(P<0.05),Sialin蛋白及其编码基因SLC17A5的表达水平均有明显升高(P<0.05)。结论低浓度的硝酸盐能够提高血管内皮细胞缺氧复氧损伤后细胞活性,降低其凋亡水平,提示硝酸盐对组织瓣缺血再灌注损伤可能具有保护作用,该作用可能与硝酸盐转运蛋白Sialin有关。