重组2型腺病毒相关病毒体外基因转导人胚肾293细胞与人颌下腺细胞的研究

目的研究重组2型腺病毒相关病毒(recombinant adeno-associated virus serotype2,rAAV2)介导的β-半乳糖苷酶基因和人红细胞生成素(human erythropoietin,hEPO)基因在人胚肾293(human embryonic cell293,HEK293)细胞与人颌下腺细胞(human submandibular gland,HSG)的体外表达,为进一步的涎腺基因转导提供研究基础。方法用感染复数(multiplicity of infection,MOI)为105的携带β-半乳糖苷酶基因的腺病毒相关病毒(rAAV2LacZ)转导HEK293细胞和HSG细胞,组织化学方法检测β-半乳糖苷酶基因表达,计数转导效率。用MOI分别为103、104和105的携带hEPO基因的腺病毒相关病毒(rAAV2hEPO)转导HEK293细胞和HSG细胞,ELISA法测定hEPO含量。结果rAAV2介导的β-半乳糖苷酶基因转导HEK293与HSG后组织化学染色显示转导率分别为68·2%和66·3%。rAAV2介导的hEPO基因转导HEK293细胞与HSG细胞后,随MOI值增加和时间的延长,hEPO的浓度增高。MOI=105,转导后72h时,HEK293细胞培养基中的hEPO浓度达到482·54mU/ml,HSG细胞培养基中的hEPO浓度为458·22mU/ml。结论rAAV2载体在体外可以有效转导涎腺细胞,可以进一步应用于动物体内实验。