G1抑制胶质瘤细胞增殖的初步研究

目的 研究探讨G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)的特异性激动剂G1对胶质瘤细胞增殖的作用.方法 筛选收集TCGA数据库和GEO数据库中胶质瘤患者的基因表达谱数据,运用SPSS软件对胶质瘤发生率的性别差异进行二项式检验分析;免疫印迹(Western blot,WB)法检测不同胶质瘤细胞中GPER的内源性表达情况;CCK-8法检测G1刺激胶质瘤细胞后对细胞增殖的影响;结果 女性胶质瘤的发生率显著性的低于男性;胶质瘤细胞中有内源性GPER的表达;G1以剂量依赖及时间依赖的方式抑制胶质瘤细胞增殖;G1抑制胶质瘤细胞增殖的效应可以被G15(GPER特异性拮抗剂)显著性抑制(P<0.01).结论 G1可以经GPER介导抑制胶质瘤细胞的增殖.

接头蛋白NHERF2的结构和功能

钠／氢交换调节因子2（Na^＋／H^＋exchangerregulatoryfactor2，NHERF2）是由337个氨基酸组成的多功能连接蛋白。NHERF2通过其PDZ—I、PDZ—II和ERM结合结构域与多种蛋白质结合，对Cl^-、Na^＋／Pi等离子转运进行调节，影响PI，K／Akt、Erk等生长信号途径及对细胞迁移进行调控。参与调节与电解质及液体运输失调相关的疾病、氯离子通道功能障碍相关疾病以及肿瘤等疾病的形成过程。文章通过对其分子结构、调控的细胞功能及其与疾病发生、发展的关系进行综述，从而为研究相关疾病的防治提供新线索。

GPER与PDZ蛋白SAP90相互作用的研究

目的探索并鉴定G蛋白偶联雌激素受体（G protein-coupled estrogen receptor，GPER）与PDZ蛋白SAP90（突触后致密物质-95，PSD-95）的相互作用以及该相互作用的分子机理，为进一步研究GPER的功能提供线索；方法对GPER与SAP90的相互作用及其特异性．应用GST融合蛋白沉降和免疫共沉淀实验等多种方法予以鉴定：结果①GSTpulldown检测结果显示GPER．CT与SAP90的PDZ1-2结构域存在相互作用；真核细胞中瞬时表达的GPER完整蛋白与SAP90蛋白的PDZ1-2结构域存在相互作用；②免疫共沉淀结果显示，在细胞内完整的GPER与SAP90蛋白质分子也存在相互作用。结论GPER与SAP90之间存在相互作用．该相互作用是通过GPER的羧基端与SAP90的PDZ1-2结构域结合而实现的。

蛋白质组学方法鉴定小鼠Barnes迷宫空间记忆相关蛋白

目的：通过Barnes Maze （ Barnes迷宫， BM）对小鼠进行空间记忆训练，随后用蛋白质组学方法鉴定BM空间记忆相关的海马蛋白并分析蛋白功能及参与的生物学过程。方法将小鼠分为实验组和对照组。应用BM对实验组小鼠进行空间记忆训练，蛋白质组学方法鉴定两组小鼠中表达水平不同的海马蛋白，分析空间记忆相关的蛋白及其功能。结果实验组小鼠学习训练后学习记忆能力明显强于对照组，到达目标孔的时间明显缩短[对照组：（116．0＆#177;5．5） s，实验组：（42．0＆#177;3．6） s； P＜0．05]。蛋白质组学分析结果表明9种海马蛋白的表达水平在记忆形成过程中显著下调，下调的蛋白按功能可分为4类：①细胞骨架；②能量代谢；③神经发育；④物质运输。结论这9种学习记忆相关蛋白可能通过调节细胞骨架、能量代谢、神经发育和物质运输等生物学过程进而影响了学习记忆能力。

CAL对β2肾上腺素受体再循环的影响

目的 探索囊性纤维化跨膜电导调节相关配体（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator-associated ligand, CAL）在β2肾上腺素受体（β2-adrenergic receptors, β2AR）内化后的运输过程中的作用.方法 免疫共沉淀实验检测β2AR内化后与CAL的相互作用是否发生改变;细胞免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜监测,初步观察CAL对β2AR内化后运输状况的影响.结果 因激动剂刺激而内化的β2AR与CAL的相互作用并未增强或减弱;CAL可使内化的β2AR不能及时返回细胞膜而滞留于细胞质内,并且二者持续共定位.结论 CAL减缓了因激动剂刺激而内化的β2AR及时再循环返回细胞膜的过程.

PDGFRβ与β2-syntrophin蛋白相互作用的初步研究

目的探索并鉴定β型血小板源性生长因子受体(platelet-derived growth facter recepterβ,PDGFRβ)与PDZ蛋白β2-syntrophin新的结合作用以及该相互作用的分子基础,为进一步研究PDGFRβ相关信号转导通路的调节提供线索。方法制备GST-PDGFRβ羧基端的融合蛋白,通过GST pull-down技术,检测PDGFRβ-CT与β2-syntrophin的PDZ结构域及完整的β2-syntrophin蛋白的相互作用。结果成功构建了重组质粒pGEX-PDGFRβ-CT。在大肠埃希菌中成功表达融合蛋白后,通过体外蛋白质结合实验证实了PDGFRβ-CT与β2-syntrophin的PDZ结构域和兔脑组织中内源性的β2-syntrophin蛋白可以相互作用。结论PDGFRβ-CT与β2-syntrophin之间存在相互作用,该相互作用是由PDGFRβ的羧基末端与β2-syntrophin的PDZ结构域结合而实现的,此结果为研究PDGFRβ介导的下游信号转导通路以及细胞特定调控受体功能的机制奠定了基础。

MAGI3促进E-cadherin翻译修饰并影响β-catenin亚细胞定位

目的：研究MAGI3对细胞黏附连接关键蛋白E-cadherin翻译后修饰及其对β-catenin在细胞内分布的影响，为探讨MAGI3通过调控细胞黏附连接影响肿瘤侵袭、转移的可能机制提供线索。方法首先采用Western印迹方法检测过表达MAGI3后E-cadherin蛋白表达条带的迁移变化，研究其翻译后修饰的变化；然后应用RT-PCR方法检测E-cadherin的表达在mRNA水平的变化，研究MAGI3对其转录水平的影响；进一步利用核质膜分离实验检测MAGI3对β-catenin胞内定位的影响。结果过表达MAGI3使E-cadherin蛋白翻译后修饰发生变化（ P＜0.05），但在mRNA水平没有明显变化。同时，过表达MAGI3后分布到细胞质膜上的β-catenin明显增多（P＜0.05）。结论 MAGI3可能通过促进E-cadherin的翻译后修饰，并促进β-catenin在细胞膜上的分布。

TRAF6对乳腺癌细胞中NHERF1蛋白稳定性影响的研究

目的研究钠氢交换调控因子1（Na＋／H＋exchanger regulatory factor．1，NHERF1）的蛋白降解机制。方法采用蛋白酶体抑制剂MGl32处理乳腺癌细胞并检测NHERF1的蛋白和mRNA表达水平；过表达多种泛素连接酶并筛选特异性下调NHERF1蛋白表达水平的泛素连接酶；在乳腺癌细胞中梯度过表达TRAF6（TNF r-eceptorassociated factor6），检测TRAF6对NHERF1的蛋白和mRNA表达水平的影响；采用免疫荧光、免疫共沉淀和GST-pulldown实验验证NHERF1和TRAF6的相互作用。结果NHERF1蛋白的稳定性受泛素．蛋白酶体途径调控；TRAF6不影响NHERF1mRNA的表达水平，但可以通过其泛素连接酶活性下调NHERF1的蛋白表达水平；NHERF1与TRAF6两者之间存在相互作用。结论泛素连接酶TRAF6参与了NHERF1的泛素蛋白酶体途径降解。

ALCAM在不同肿瘤中的表达及其作用

活化白细胞黏附分子(activated leukocyte cell adhesion molecule,ALCAM),最早发现于转移性黑色素瘤细胞系,随之发现ALCAM在活化的T细胞、活化的单核细胞、上皮细胞和成纤维细胞等中均有表达。近年发现,ALCAM在胰腺癌、结肠癌、子宫颈癌、前列腺癌、卵巢癌和口腔鳞状细胞癌等多种肿瘤中的表达量较正常组织升高,与癌症进展有关,且参与肿瘤的浸润和转移,可被视作潜在的肿瘤细胞标志物。