利用SPR检测26肽与β_1-肾上腺素受体自身抗体的相互作用

目的探讨根据β_1肾上腺素受体细胞外第二环(β_1-adrenergic receptor,β_1-AR-EC_Ⅱ)的氨基酸序列合成的26肽与β_1-肾上腺素受体β_1-AR-EC_Ⅱ的单克隆抗体(β_1-adrenergic receptor autoantibodies,β_1-AA)的相互作用。方法根据人β_1-肾上腺素受体细胞外第二环(β_1-AR-EC_Ⅱ)的氨基酸序列合成26肽;采用杂交瘤细胞融合的方法获得针对β_1-AR-EC_Ⅱ的单克隆抗体(β_1-AA);利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)检测该合成的26肽与β_1-AA的亲和力;利用乳鼠心肌细胞跳动频率实验验证该合成26肽对β_1-AA的中和作用。结果提取的β_1-AA可以使乳鼠心肌细胞跳动频率增加(P<0.05),提示该β_1-AA具有生物学活性;合成26肽与β_1-AA结合的亲和力(K_D)为4.44μmol/L,属于中等强度结合;较β_1-AA组相比,26肽处理后可明显降低心肌细胞跳动频率(P<0.05)。结论该合成26肽与β_1-肾上腺素受体自身抗体之间存在相互作用,并且可以拮抗β_1-AA引起的乳鼠心肌细胞跳动频率的增加。

血管紧张素Ⅱ-1型受体自身抗体生命早期暴露对子代大鼠脂代谢的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ-1型受体自身抗体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor autoantibody, AT_(1)-AA)生命早期(胎儿期和哺乳期)暴露对子代大鼠脂代谢的影响。方法将32只体重150~170 g、AT_(1)-AA阴性的健康雌性未孕无特定病原体级Sprague Dawley大鼠随机分为免疫组和对照组, 各16只。免疫组多次皮下注射人血管紧张素Ⅱ-1型受体细胞外第二环功能表位肽段与弗氏免疫佐剂的等体积混合物, 进行主动免疫建立AT_(1)-AA阳性雌性大鼠模型;对照组皮下注射与免疫组等量的生理盐水与弗氏免疫佐剂的等体积混合物。每次免疫前大鼠尾采集血液样本检测2组大鼠血清AT_(1)-AA水平, 免疫组血清AT_(1)-AA阳性且水平增长进入平台期即AT_(1)-AA阳性雌性大鼠模型建立成功。免疫8周后, 2组雌性大鼠分别与健康的AT_(1)-AA阴性雄性大鼠交配受孕。采集母代大鼠和子代大鼠孕18 d(G18)、生后21 d(P21)及子代大鼠断乳后正常喂养至12周龄(W12)的血液样本;整个实验期间不对子代大鼠进行主动免疫。采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清AT_(1)-AA水平(吸光度A405), 免疫组与对照组大鼠A405值的比值≥2.1为AT_(1)-AA阳性;采用全自动生化分析仪测定母代大鼠和子代大鼠的血脂水平;并对子代大鼠及与其母代大鼠的血清AT_(1)-AA水平、总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白-胆固醇[间接反映高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)]、低密度脂蛋白-胆固醇和游离脂肪酸水平进行相关性分析。采用两独立样本t检验、线性回归分析、方差分析对数据进行统计学分析。结果 (1)免疫组母代大鼠在G18和P21的血清AT_(1)-AA水平分别为1.170±0.190和0.988±0.283, 均高于同期对照组母代大鼠(分别为0.114±0.016和0.084±0.006, t值分别为14.64和9.57, P值均<0.001)。(2)免疫组子代大鼠在G18、P21的血清AT_(1)-AA水平(子代大鼠G18:0.948±0.220、子代雄性大鼠P21:0.758±0.273、子代雌性大鼠P21:0.774±0.274), 均显著高于同期对照组子代大鼠(子代大鼠G18:0.105±0.010、子代雄性大鼠P21:0.080±0.002、子代雌性大鼠P21:0.084±0.005, t值分别为10.10、7.46、7.55, P值均<0.001), 且均与其同期母代大鼠血清AT_(1)-AA水平呈正相关(子代大鼠G18:R=0.78, P=0.038;子代雄性大鼠P21:R=0.82, P=0.006;子代雌性大鼠P21:R=0.82, P=0.007);而在W12的血清AT_(1)-AA水平与同期对照组子代大鼠比较, 差异均无统计学意义(P值均>0.05)。(3)免疫组母代大鼠在G18的血清TC水平[(2.36±0.32)mmol/L]显著高于同期对照组母代大鼠[(1.95±0.24)mmol/L, t=2.70, P=0.019], 在P21的血清TC、HDL水平[分别为(2.82±0.50)和(1.94±0.33)mmol/L]均显著高于同期对照组母代大鼠[分别为(2.18±0.26)和(1.57±0.23)mmol/L, t值分别为3.41和2.80, P值分别为0.004和0.013]。(4)与同期对照组子代大鼠比较, 免疫组子代大鼠在G18、W12脂代谢均无显著变化(P值均>0.05)。免疫组子代雄性和雌性大鼠在P21的血清TC、HDL水平[子代雄性大鼠TC:(2.38±0.52)mmol/L、HDL:(1.44±0.32)mmol/L, 子代雌性大鼠TC:(2.50±0.72)mmol/L、HDL:(1.41±0.33)mmol/L], 均显著高于同期对照组子代雄性和雌性大鼠[子代雄性大鼠TC:(1.83±0.30)mmol/L、HDL:(1.07±0.18)mmol/L, 子代雌性大鼠TC:(1.70±0.26)mmol/L、HDL:(1.00±0.14)mmol/L, t值分别为2.73、2.98、3.16和3.41, P值分别为0.015、0.009、0.006和0.004]。(5)免疫组子代雄性和雌性大鼠在P21的血清TC、HDL水平与其同期母代大鼠的血清TC、HDL水平之间均无相关性(R值均<0.5, P值均>0.05);免疫组子代雄性和雌性大鼠在P21的血清HDL水平与其自身血清TC水平均呈正相关(子代雄性大鼠R=0.98, 子代雌性大鼠R=0.97, P值均<0.001), 且与其自身血清AT_(1)-AA水平均呈正相关(子代雄性大鼠R=0.74, P=0.023;子代雌性大鼠R=0.91, P=0.001);免疫组子代雄性和雌性大鼠在P21的血清TC水平与其自身血清AT_(1)-AA水平均呈正相关(子代雄性大鼠R=0.72, P=0.030;子代雌性大鼠R=0.90, P=0.001)。结论 AT_(1)-AA的生命早期暴露可能导致子代大鼠TC和HDL的异常表达。

饮食限制延缓衰老的研究进展

目前随着经济发展及生活水平的不断提高,中国老龄化情况日益严重,各种衰老相关疾病的发病率也呈直线上升。因此,寻找有效的延缓衰老方法、预防老年病的发生越来越受到人们的关注。近几年研究表明,饮食限制(DR)可以有效地延长哺乳动物的寿命,同时延缓老年病的发生。在避免营养不良的前提下对饮食摄入进行限制,现今已成为抗衰老领域的一大热门方向。本文就DR在延缓衰老中的作用及其可能机制的研究进展作一综述。