阿尔茨海默病研究路上的斗士--记首都医科大学宣武医院盛树力教授

在我国阿尔茨海默病的研究领域中，有一位赫赫有名的研究者，他治学严谨、精益求精，是同行们眼里德高望重的科学家；他教书育人、言传身教，是年轻人心中和蔼可亲的老前辈，他就是年近八旬高龄的盛树力教授。

构建医院新型科研实验技术平台

科学研究是医院创新和持续发展的主要动力,先进的实验技术平台对医院科研水平的提升起关键的基础性作用。实验技术平台的不断升级和更新保证了医院竞争优势的持续性。本文以首都医科大学宣武医院实验技术平台为例,阐述了我院近7年来实验技术平台的建设、管理和取得的初步成绩,从而说明21世纪激烈竞争环境下,建设新型实验技术平台的重要性和必要性。

医学研究生培养中的实验室安全教育

医学是一门实验科学,作为医学院校的研究生培养,很大一部分内容需要利用医学实验室进行科学研究,最终完成研究生课题。可以说,作为一名好医生,必须要学会使用实验室来解决临床中发现的问题,在不断的研究和探索中提高自己对疾病的认识。但是大多数医学生仅仅在本科期间,跟着老师在学校的教学实验室中做过一些有限的科学实验,

医院科研管理在转化医学中的作用

转化医学提倡实验室与临床研究的对接，其目的是将实验室研究成果转化为临床应用，以提高医院诊疗水平。通过说明目前影响医院实现高质量医学转化存在的问题，阐述了为促进本院医学转化所采取的若干科研管理措施及其产生的积极效果，认为科研管理在医学转化中起着不可或缺的桥梁作用。

β淀粉样肽42及神经生长因子在实验性糖尿病脑病小鼠海马内表达的变化研究

目的本研究通过观察β淀粉样肽(amyloidβpeptide,Aβ)42及神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在实验性糖尿病(diabetes mellitus,DM)脑病小鼠海马表达的长时程变化,探讨DM脑病发病的相关机制。方法 64只雄性昆明小鼠采用数字表法随机分为对照组(C组,n=32)和DM组(n=32)。小鼠禁食12 h后,按200 mg/kg腹腔注射新鲜配制的链脲佐菌素,3 d后尾部测非禁食血糖,大于15 mmol/L者为DM模型复制成功。分别在造模后1、4、8及12周应用免疫组织化学染色方法观察C组与DM组小鼠海马CA1区Aβ42及NGF阳性细胞的变化。结果 1)C组小鼠海马CA1区Aβ42阳性细胞数量少,染色浅;而造模后1、4、8及12周DM组小鼠海马CA1区Aβ42阳性细胞数量较C组增多,染色深。细胞计数结果显示,造模后1周,DM组小鼠海马CA1区Aβ42阳性细胞数量14.10±3.60比C组13.20±3.08略有增加,但差异没有统计学意义(P>0.05)。造模后4、8及12周,DM组小鼠海马CA1区Aβ42阳性细胞数量(16.10±3.67,16.20±2.86,17.50±3.10)比C组(11.70±2.54,12.00±2.67,10.80±2.92)明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。2)C组小鼠海马CA1区NGF阳性细胞数量较多,染色深;造模后1、4、8及12周DM组小鼠海马CA1区NGF阳性细胞染色较C组稍浅。细胞计数结果显示,1、4、8及12周DM组小鼠海马CA1区NGF阳性细胞数量相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 M中期(4周)小鼠海马内Aβ42表达明显增加,并持续至实验终点(DM 12周)。DM小鼠海马内NGF表达在本研究中没有明显变化。Aβ42参与DM小鼠海马神经元的变性过程,在DM脑病的发病机制中发挥重要作用。

胰岛素样生长因子在急性颅脑创伤后作用机制的实验研究进展

颅脑创伤（traumatic brain injury, TBI）已成为严重威胁人类健康的疾病之一。我国的TBI发病率为（100～200）／10万人，其中重型TBI患者占18％～20％，其死亡率占30％～50％。至今我国TBI所致的死亡率仍处于居高不下的态势，伤残人数也在不断增加，这对人类的健康和生命安全构成巨大威胁，对社会劳动力和人口质量造成相当严重的影响。TBI可由直接或间接暴力所致，脑组织创伤又可分为原发性创伤和继发性创伤。

衰老作为神经退行性疾病危险因素的科学现状分析

衰老被定义为一个复杂的相互关联的网络,由渐进的功能有害表型偏差(相对于年轻人的表型)构成,这些偏差是生物衰老的基础,导致个体的适应性、生理和心理功能以及恢复力下降[1]。中国第七次全国人口普查数据显示,2020年,中国65岁及以上总人口约1.91亿,占总人口的13.5%[2]。预计到2050年,中国65岁及以上人口将达到总人口数的35%[3]。随着人口老龄化程度的不断加剧,神经退行性疾病的发病率也逐年增加,衰老是大多数神经退行性疾病的主要危险因素[4]。

衰老和原发性神经系统肿瘤

原发性神经系统肿瘤在老年患者中发病率和死亡率最高,其治疗也面临严峻挑战。越来越多的证据表明,延缓衰老与降低原发性神经系统肿瘤发病直接相关。衰老与原发性神经系统肿瘤有共同的生物学特征,包括慢性炎症、细胞衰老、干细胞耗竭、基因稳定性降低、表观遗传学改变、代谢障碍、端粒稳定性破坏、免疫功能下降、细胞内通讯改变、蛋白稳态障碍、巨自噬失活和肠道微生物失调。

内质网应激通路相关分子GRP78及CHOP在糖尿病脑病小鼠海马表达的变化

目的本研究通过观察内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER Stress)通路相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein78,GRP78)及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)在糖尿病脑病小鼠海马CA1区表达的变化,探讨ER Stress在糖尿病脑病发生发展中的作用。方法 60只雄性昆明小鼠随机分为正常组(n=25)和糖尿病(diabetes mellitus,DM)组(n=35)。小鼠禁食12h后,按200mg/kg腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ),3d后尾部非禁食血糖>15mmol/L者为DM模型复制成功。分别在STZ注射后1、4、8周应用免疫组织化学染色方法观察正常组与DM组小鼠海马CA1区GRP78及CHOP阳性细胞形态和数量的变化,并应用图像分析软件计数GRP78及CHOP阳性细胞。结果 ①GRP78免疫组织化学染色结果显示,注射STZ后1、4、8周DM组小鼠海马CA1区GRP78阳性细胞形态和数量与正常组相似。②CHOP免疫组织化学染色结果显示,注射STZ后1、4、8周正常组小鼠海马CA1区CHOP阳性细胞数量较少,染色浅;DM组小鼠海马CA1区CHOP阳性细胞数量较多,染色深。③注射STZ后1、4、8周,DM组小鼠海马CA1区GRP78阳性细胞数量(12.00±3.60,10.50±3.11,13.75±3.01)与正常组(10.33±2.34,8.88±1.89,7.00±3.20)相比差异无统计学意义(P=0.29,P=0.23,P=0.06);注射STZ后1、4、8周,DM组小鼠海马CA1区CHOP阳性细胞数量(45.12±10.27,32.88±6.58,20.19±3.54)比正常组(19.19±6.80,15.44±5.35,13.94±5.00)明显增加,经统计学分析差异均有统计学意义(P分别为0.000,0.000和0.009)。结论 ER Stress相关分子CHOP在DM小鼠海马CA1区表达比正常小鼠增加,说明糖尿病脑病小鼠海马组织内发生了ER Stress。ER Stress可能在糖尿病脑病神经元变性中发挥重要作用。

大鼠心肌超微结构的增龄性变化及其相关机制

目的观察从幼年到老年不同月龄大鼠心肌结构的变化,探讨影响心肌结构改变的机制。方法选用1、3、6、12、18、24月龄雄性SD大鼠。在电镜下观察大鼠心肌超微结构;用免疫组织化学方法检测心肌转化生长因子β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;用生化方法检测血清丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)活性。结果大鼠从12月龄至24月龄,随增龄心肌细胞出现排列紊乱、分离,心肌细胞间结缔组织增多,线粒体数量增多但结构紊乱,线粒体嵴减少,线粒体肿胀,空泡增多等改变;同时,心肌TGF-β1表达增多,MMP-9表达减少。此外,随年龄增加至24月龄,大鼠血浆MDA含量增多,SOD活性减弱,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性增高。结论衰老大鼠心肌细胞器形态出现改变,以线粒体数量和结构的改变最为明显;其机制可能与TGF-β1的增加和MMP-9的减少有关,同时可能与过氧化物质大量堆积有关。

经颅和经脊髓重复磁刺激对脊髓半横断大鼠运动功能的作用

目的观察经颅和经脊髓重复磁刺激对脊髓半横断大鼠运动功能的影响。方法建立T10大鼠脊髓半横断模型,脊髓半横断大鼠于术后4 d分别给予经颅和经脊髓重复磁刺激治疗,刺激强度为最大输出强度的35%,刺激频率5 Hz,每序列5 s,间歇2 min,连续10个序列,每天1次,每周5 d,连续2周。各组大鼠治疗前和治疗后进行BBB评分和水平梯子实验评价运动功能;术后38 d取患侧下肢胫前肌行降钙素基因相关肽免疫组织化学染色。结果经颅磁刺激组大鼠手术17 d后各时间点BBB评分和水平梯子实验步态正确率高于术后3 d和脊髓损伤组(P<0.05);经脊髓磁刺激组大鼠手术10 d后各时间点BBB评分和步态正确率高于术后3 d和脊髓损伤组(P<0.05),术后10 d步态正确率高于经颅磁刺激组(P<0.05)。经颅和经脊髓磁刺激组大鼠胫前肌运动终板降钙素基因相关肽表达显著高于脊髓损伤组(P<0.001)。结论早期经颅和经脊髓磁刺激可促进脊髓半横断大鼠运动功能改善,并改变远端肌肉的可塑性,经脊髓磁刺激可加速脊髓半横断大鼠运动功能恢复。

液相色谱法测定小鼠脑组织中ATP、ADP及AMP含量

目的建立小鼠脑组织中腺苷酸含量测定的高效液相色谱(high performance liquid chromatogram,HPLC)-可变波长检测法。方法应用酸沉淀蛋白、Agilent1200高效液相色谱系统、Supelco Discovery C18(150 mm×4.6 mm,5μm)反相色谱柱及相同填充材料的预柱,对小鼠脑组织样品中腺苷酸进行分离分析,波长为254 nm,流动相为30 mmol/L K2HPO4-KH2PO4(含5%甲醇),pH5.85,流速为1.0 mL/min,进样体积为20μL,柱温为30℃。结果腺苷酸ATP、ADP及AMP在10～100 mg/L范围,线性关系良好,线性方程为ATP:A=28.924C+14.144,γ=0.999 90;ADP:A=31.504C-12.608,γ=0.999 92;AMP:A=46.539C-5.255,γ=0.999 95。平均回收率为95.3%～103.2%;日内和日间相对标准差(RSD)分别为1.14%～1.75%、2.45%～3.97%。结论高效液相色谱-可变波长检测法可以简便、准确、有效地测定急性重复低氧小鼠脑组织中ATP、ADP和AMP的含量。

参乌胶囊及其有效成分二苯乙烯苷对老年大鼠海马神经元突触体素表达的影响

目的观察由首都医科大学宣武医院药物研究室自行研制的抗老年性痴呆中药新药参乌胶囊(Shen-wu capsule,SW)及其有效成分何首乌二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对于老年大鼠海马神经元突触结构和突触体素表达的影响,阐明其防治神经元退行性变的机制。方法选用老年SD大鼠,从21月龄始,分别灌胃给予SW(0.8 g/kg、1.6 g/kg)和TSG(0.03 g/kg、0.06 g/kg)至24月龄。以6月龄大鼠为青年对照,未给药24月龄大鼠为老年对照。应用通道式水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,用电子显微镜观察脑海马神经元突触超微结构,用免疫组织化学染色检测海马神经元突触体素(synaptophysin,SYP)的表达。结果与6月龄青年对照组大鼠相比,24月龄老年大鼠通道式水迷宫试验错误次数明显增多(P<0.01);给予SW和TSG的老年大鼠在高剂量组可见水迷宫错误反应次数显著减少,与老年对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。电子显微镜结果显示,24月龄老年大鼠神经元突触数量明显减少;而给予TSG大剂量灌胃组突触数量增多,并可见类似于突触球的结构。免疫组织化学染色结果可见24月龄大鼠SYP染色明显变浅,累积光密度值低(P<0.01);而灌胃给予SW和大剂量TSG组大鼠SYP表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论参乌胶囊及其有效成分二苯乙烯苷对于老年大鼠的神经元突触靶位具有较好的疗效,本结果为其在临床用于延缓衰老、改善认知功能提供了实验基础。

一氧化氮在大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤中对神经生长因子和脑源性神经营养因子表达的影响

目的采用大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,研究大鼠脑缺血再灌注后不同时间点脑缺血半暗带区神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的变化,以及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-argininic methyl ester,L-NAME)对脑缺血大鼠再灌注后NGF和BDNF表达的影响,探讨脑缺血损伤的深层机制。方法将42只健康雄性Sprague-Dawley大鼠采用数字表法随机分为7组:假手术(Sham)组;MCAO再灌注0 h(MCAO 0 h)组;MCAO再灌注6 h(MCAO 6 h)组;MCAO再灌注12 h(MCAO 12 h)组;MCAO再灌注24 h(MCAO 24 h)组;MCAO再灌注72 h(MCAO 72 h)组以及MCAO 24 h+L-NAME组(于MCAO前30 min腹腔注射L-NAME,剂量为1 mg/kg)。每组6只大鼠。采用改良线栓法制备大鼠MCAO再灌注模型,于缺血90 min后拔出线栓进行再灌注。免疫荧光染色法检测再灌注大鼠脑组织缺血半暗带区NGF和BDNF的表达。免疫荧光双标染色法将NO所致的组织损伤标志物3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)分别与BDNF和NGF共定位。结果MCAO组大鼠再灌注后0、6 h,脑缺血半暗带区域几乎未见NGF和BDNF阳性细胞。再灌注12 h,可见NGF和BDNF阳性细胞。再灌注24 h,半暗带区NGF和BDNF阳性细胞数较再灌注12 h组进一步增多(P<0.05)。至再灌注72 h,半暗带区NGF和BDNF阳性染细胞数较再灌注24 h组减少(P<0.05)。MCAO再灌注24 h组大鼠缺血半暗带区,3-NT分别与NGF和BDNF免疫荧光染色共定位。Sham组大鼠未见3-NT和NGF双标阳性细胞,MCAO再灌注24 h组大鼠半暗带区可见大量3-NT和NGF双标阳性细胞。给予L-NAME后,半暗带区3-NT和NGF双标阳性细胞数目比MCAO 24 h组明显减少(P<0.05)。Sham组大鼠未见3-NT和BDNF双标阳性细胞,MCAO再灌注24 h组大鼠半暗带区可见大量3-NT和BDNF双标阳性细胞。给予L-NAME后,缺血大鼠半暗带区3-NT和BDNF双标阳性细胞数目比MCAO 24 h组明显减少(P<0.05)。结论脑缺血再灌注可引起大鼠脑组织缺血半暗带区NGF和BDNF表达上调,最初的上调出现在再灌注12 h左右,随再灌注时间延长,NGF和BDNF表达进一步增加,至再灌注24 h达到高峰,随后在再灌注72 h下降。L-NAME通过抑制NOS活性,减少NO的产生,减少3-NT形成,进而引起NGF和BDNF表达下降,说明脑缺血再灌注过程中,NO促进NGF和BDNF的表达。

过氧化氢和帕金森病患者血清促进α-突触核蛋白向线粒体与细胞核转运

目的研究氧化应激和帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者血清对α-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-Syn)向线粒体以及细胞核转运的影响。方法将MES23.5多巴胺能神经细胞在含5%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养,然后分别用过氧化氢(H2O2)以及PD和正常人血清处理,免疫荧光标记法观察不同处理对α-Syn向线粒体以及细胞核的转运以及对线粒体及细胞核的影响。比色法测定血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、脂质氧化(malondialdehyde,MDA)和总抗氧化能力(totalanti-oxidation competence,T-AOC),观察血清的氧化应激水平。结果 H2O2和PD血清促进α-Syn向线粒体转运与细胞核转运,并造成线粒体皱缩、崩解,PD血清处理同时引起类似凋亡的核碎裂现象。PD血清的SOD、MDA和T-AOC高于对照血清。结论氧化应激和PD血清均可促进α-Syn向线粒体与细胞核转运,PD血清促进α-Syn向线粒体与细胞核转运可能与其氧化应激水平增高有关。

犬骨髓源血管内皮祖细胞体外扩增效能的动态研究

目的:应用离体培养法培养骨髓来源的血管内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)并动态观察扩增效能。方法:2004-04/12在首都医科大学宣武医院外科实验室完成。使用条件培养基和纤维连接蛋白培养骨髓单个核细胞,相差显微镜观察形态变化,测量生长曲线观察增殖能力,检测摄取Dil-ac-LDL的功能,不同时间点行flk-1,CD133和Ⅷ因子的免疫细胞化学检测和CD34,VEG-FR-2及CD133的流式细胞仪检测以定性并观察扩增效率。结果:集落样生长的贴壁细胞平均10d汇合,每毫升骨髓可获得大约(1.3±0.3)×106个细胞,外观鹅卵石样,能摄取Dil-ac-LDL,flk-1,CD133和Ⅷ因子,免疫细胞化学染色均呈阳性,流式细胞仪示VEGFR-2和CD133双阳性细胞扩增达33倍。结论:离体扩增培养法可成功地从骨髓中扩增EPCs,扩增效率能够满足组织工程血管对种子细胞的需要,也为骨髓单个核细胞移植治疗组织缺血提供了间接证据。

大鼠海马突触体素及胆碱乙酰转移酶的增龄变化

目的观察不同月龄（1、3、6、12、18、24月龄）大鼠脑海马区突触体素（SYP）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）表达的变化,探讨其与学习记忆功能之间的关系。方法采用免疫组织化学染色方法,观察SYP和ChAT在增龄大鼠海马中的表达水平。结果1-6月龄SYP免疫反应阳性产物逐渐增加,6-18月龄缓慢减少,进入24月龄明显减少,与其他各组相比具有非常显著性差异（P〈0.01）。ChAT免疫反应阳性神经元在1月龄时比较少,3-6月龄时最多,以后明显减少,进入24月龄后,偶见阳性细胞。结论SYP和ChAT在大鼠海马中的表达存在随龄变化,特别是老年期表达量显著降低,可能是导致学习记忆障碍的重要机制之一。

阿尔茨海默病与3型糖尿病

阿尔茨海默病（Alzheimersdisease，AD）是最常见的神经系统退行性疾病。流行病学调查结果显示，2010年全世界痴呆患者约为3560万，并以每20年翻1倍的速度增长，预计2030年将达到6570万，2050年达到1．154亿。痴呆患者中AD的比例为50％～75％。近年来研究发现，胰岛素抵抗和2型糖尿病可能与AD的高发病率具有相关性。有学者认为，AD是一种神经内分泌紊乱疾病，甚至称之为3型糖尿病。目前，AD公认的病理机制包括口淀粉样肽沉积、