共聚物-1直接免疫MPTP模型小鼠保护多巴胺能神经元

目的探讨共聚物-1(copolymer-1,Cop-1)直接免疫对小剂量1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)持续注射C57BL/6J小鼠黑质多巴胺(dopamine,DA)神经元保护作用的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠分为MPTP模型组、造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组、Cop-1免疫组和正常对照组。MPTP模型组动物仅接受MPTP注射,造模后Cop-1免疫组在MPTP连续注射7d后接受Cop-1免疫;造模时Cop-1免疫组在第1次MPTP注射后立即接受Cop-1免疫;造模前Cop-1免疫组在接受Cop-1免疫7d后开始注射MPTP,Cop-1免疫组仅接受Cop-1抗原免疫,正常对照组动物仅接受0.9%氯化钠注射液注射。MPTP连续注射24d后处死动物,取脑、脾。脑切片酪氨酸羟化酶免疫组化定量分析黑质DA神经元数;高效液相色谱法(high performance liquidchrom atography,HPLC)分析纹状体DA及其代谢产物含量;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察脾病理学变化;分离造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组和Cop-1免疫组动物脾脏并进行Cop-1致敏淋巴细胞培养。结果与正常对照组相比,MPTP模型组、造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组动物脾脏HE染色未见明显差异。与Cop-1免疫组相比,造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组均出现大量Cop-1致敏淋巴细胞。黑质DA神经元定量分析显示,与正常对照组比较,持续低剂量MPTP注射使模型对照组黑质DA神经元减少了65.13%,造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组黑质DA神经元分别减少了31.68%、27.55%和28.29%,各组DA神经元数明显高于模型对照组(P=0.000,P=0.000,P=0.000)。HPLC法测定纹状体内DA及其代谢产物含量结果显示,与正常对照组相比,模型组DA及其代谢产物含量明显减少。造模后Cop-1免疫组、造模时Cop-1免疫组、造模前Cop-1免疫组类似,但均明显高于模型组。结论在C57BL/6J小鼠慢性MPTP模型中,持续低剂量MPTP注射对小鼠的免疫器官脾的破坏不明显,Cop-1直接免疫可有效对抗MPTP毒性,保护黑质-纹状体系统的DA神经元。

尼古丁抑制6-羟基多巴胺损伤诱导的纹状体炎症反应

目的 探讨尼古丁对6羟丛多巴胺（6OHDA）损伤诱导的纹状体炎症反应的抑制作用。方法雄性SD大鼠分别接受尼古丁（0．2mg／kg或2．0mg／kg）或生理盐水腹膜腔内注射。注射7d后，尼古丁高剂量治疗组、低剂量治疗组和模型对照组大鼠右侧纹状体内分别接受6-OHDA 20ug注射。免疫组织化学定量分析黑质多巴胺能神经元和纹状体CD3、CD4、CD8阳性淋巴细胞数。免疫荧光定量分析纹状体小胶质细胞对6-OHDA损伤的反应。结果6-OHDA注射4周后，模型对照组注射侧黑质酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞为相应对照侧的25．27％；而在尼古丁低剂量和高剂带组注射侧分别为相应对照侧的64．97％和67．24％。各组各时间点6-OHDA注射侧纹状体有明显的T淋巴细胞浸润，其中约80％为CD8阳性T淋巴细胞。尼古丁治疗组浸润的T淋巴细胞数较模型对照组明显减少，而CD3和CD4阳性细胞占总T淋巴细胞的比例在各组和各时间点基本一致，尼古丁治疗组和模型对照组比较，差异无统计学意义。纹状体小胶质细胞特异标记物IBA1免疫荧光定带结果显示，尼古丁处理可显著抑制6OHDA损伤诱导的小胶质细胞激活。结论尼古丁可抑制6OHDA损伤诱导的炎症反应，而尼古丁对炎症反应的抑制作用可能是其保护多巴胺能神经元的机制之一。