蛋白质组学技术在神经变性疾病研究中的应用

蛋白质是生命活动的载体和生理功能的执行者，对蛋白质复杂多样的结构、功能和相互作用的深入研究，将在分子、细胞和生物体等多个层次上全面揭示生命现象的本质。而蛋白质组学技术可以一次完成大量蛋白质的高通量分析．具有其他研究手段无法比拟的优势，是当今生命与生物技术中最活跃、最前沿、应用最广泛的研究领域之一。自2003年正式启动国际“人类蛋白质组计划”以来．我国政府对蛋白质的研究和发展十分重视，不断加大投入，并将“功能基因组和蛋白质组”研究纳入国家“十一五”科学技术发展规划，成为生物和医药领域4项重大研究项目之一．这必将推动我国蛋白质研究的深入发展，同时有助于了解疾病的发病机制和发现具有应用前景的生物学标志物。随着我国人口老龄化进程的加速，帕金森病和阿尔茨海默病等中枢神经系统疾病的患病率逐年上升，但目前在诊断方面尚无可靠的生物学标志物，而主要依靠医师的临床经验．其漏诊率和误诊率均较高。因此，应用先进的蛋白质组学技术，尽快开发出具有早期预警、早期诊断价值的生物学标志物将是今后中枢神经系统疾病研究的前沿课题。我们将本期专题定为“蛋白质组学研究”，旨在使临床医师更为深入地了解蛋白质组学的相关技术及其在中枢神经系统疾病研究中的应用前景，也希望使大家知道这项实验室中的前沿技术已距临床很近．在不久的将来会成为我们诊断各种神经系统疾病的先进技术。

美国神经病学学会公布的最新帕金森病循证医学指南

2006年4月，Neurology杂志发表了美国神经病学学会关于帕金森病诊断和治疗指南的系列文章，其内容包括：（1）新发帕金森病的诊断和预后。（2）合并症状波动和异动症的帕金森病患者的治疗。（3）帕金森病患者的神经保护治疗和其他辅助治疗。（4）帕金森病患者合并抑郁、精神障碍和痴呆的诊断及治疗原则。

外周神经损伤大鼠背根神经节中Ephrin B1及RYK受体表达的变化

目的研究外周神经损伤后背根神经节细胞中Ephrin B1及其相关受体的表达变化。方法建立一侧坐骨神经夹伤的大鼠动物模型,通过免疫荧光组织化学方法检测受损侧背根神经节细胞中Ephrin B1及其相关受体Eph B1、Eph B2、Eph B3和Eph A4、RYK等的表达,并分析阳性细胞数和不同大小阳性细胞的构成比例。结果外周坐骨神经受损侧背根神经节细胞中Ephrin B1的表达明显减弱,而Eph B1、Eph B2、Eph B3和Eph A4受体的表达无明显变化,但RYK受体的表达则明显加强。结论Ephrin B1和RYK受体在一侧外周坐骨神经夹伤后的大鼠背根神经节细胞中表达的变化,说明它很有可能参与了损伤后的功能活动。

RYK在小鼠皮质脊髓束神经通路发育过程中的表达变化

目的观察RYK在皮质脊髓束发育投射通路中的表达情况，为进一步研究RYK在其中的功能提供重要线索。方法通过原位杂交和免疫荧光组织化学法，分别检测了E14．5、E16、E18．5和出生后P3、P5、P7等不同时间点RYK在小鼠大脑运动皮层和皮质脊髓束神经通路中的表达情况。结果RYK的表达出现在胚胎E18．5d运动皮层神经元中，到P0时逐渐增强并表达在脑内投射的皮质脊髓束神经通路，从P0～P5，RYK持续表达在皮质脊髓束在脑内和脊髓的整个神经通路上，而后逐渐减弱。结论RYK的表达与皮质脊髓束神经通路在脊髓中的发育投射有密切关系。

2007临床蛋白质组学高峰论坛会议纪要

2007临床蛋白质组学高峰论坛于4月14日在北京会议中心举行。本次论坛由中国生物化学与分子生物学会临床应用生物化学与分子生物学分会、军事医学科学院生物医学分析中心、北京国家生物医学分析中心和北京协和医院主办，博扬通（北京）科技有限公司和美国布鲁克·道尔顿公司承办。来自中国协和医科大学、首都医科大学、北京大学、台湾长庚大学、军事医学科学院生物医学分析中心、中国科学院基因组信息学中心暨北京华大基因研究中心等多所国内著名院校和研究机构的专家在会上作了精彩的专题报告。

组蛋白脱乙酰化酶在α-突触核蛋白抑制酪氨酸羟化酶表达中的作用

目的探讨组蛋白脱乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)参与α-突触核蛋白(-αsynuclein,-αSyn)的过表达抑制酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的可能机制。方法利用HDAC活性检测试剂盒检测MES 23.5多巴胺能神经细胞系和稳定转染-αSyn的细胞中HDAC的活性差异,应用Western-blot及RT-PCR检测转染-αSyn细胞系中HDAC抑制剂———曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对TH表达的影响。结果在转染-αSyn的细胞系中HDAC的活性显著高于未转染组;TSA增加了转染细胞内TH蛋白和mRNA的表达(P<0.05)。结论HDAC参与了多巴胺能神经元中-αSyn抑制TH表达的机制。

C57 BL/6J小鼠肝脏中mPer1基因CpG岛甲基化分析

目的建立分析C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区甲基化状态的亚硫氢酸修饰法,检测mPer1表达峰、谷对应的甲基化状态。方法利用实时定量PCR方法检测mPer1基因表达时相特点,并利用亚硫氢酸修饰法对小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区域CpG岛和E-box甲基化情况进行了研究。结果C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因表达有显著波动性,表达高峰位于ZT13,低谷位于ZT01。序列分析显示mPer1基因启动子区含有CpG岛,并且该CpG岛覆盖与mPer1波动性表达密切相关的顺式元件E-box1和E-box2。亚硫氢酸修饰测序结果显示,mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均呈低甲基化或非甲基化状态。不同时间点mPer1基因CpG岛甲基化频率无显著变化(P=0.458)。结论肝脏中mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均为开放状态,可以与时钟相关转录因子结合。甲基化不参与调节mPer1基因的节律性表达。

时钟基因在胚胎干细胞分化为神经元过程中的表达特征

目的检测小鼠胚胎干细胞(ES)体外向神经元诱导分化过程中,7种重要时钟基因的表达情况。方法小鼠胚胎十细胞(ES),经过5个阶段诱导分化为神经元。各阶段细胞的总 RNA反转录为 cDNA,利用7种时钟基因的特异引物进行 PCR 反应,以明确其随分化表达的情况。结果各个时钟基因无非特异扩增,BMAL1、CLOCK、CRY1和 CRY2、PER1、PER3基因在各个分化阶段中都表达,而 PER2基因只在终末阶段被检测到。结论时钟基因的转录在 ES 细胞向神经元分化的过程中并不一致,提示在成体动物存在的时钟基因环路,在 ES 细胞向神经元分化过程中还没有建立。PER2 仅在分化终末期——大量停止分裂的神经元和胶质细胞出现的时期才转录,提示其可能在细胞增殖过程中发挥某种作用。