武警部队官兵常见寄生虫病预防的知识、态度、信念、行为调查

目的 了解武警部队官兵对常见寄生虫病预防的知识、态度、信念及行为 (Knowledge、attitude、belief、practice,KABP)情况 ,为开展常见寄生虫病的健康教育提供依据。 方法 在预调查的基础上 ,参照有关 KABP调查标准 ,多级整群抽取 2 10 0名官兵为调查对象 ,采用无记名问卷调查。 结果 知识平均得分 35 .38(满分 10 0分 ) ;态度与信念平均得分 6 6 .0 4 (满分 90分 ) ;行为平均得分 6 5 .6 4 (满分 10 0分 )。知识知晓率 16项有 12项在 5 0 %以下 ;态度、信念形成率 9项有 5项在 6 0 %以下 ;行为形成率 10项有 6项在 6 0 %以下。 结论 武警部队官兵关于常见寄生虫病预防的 KABP水平较低 ,很有必要进行专题健康教育 ,以提高寄防知识水平 ,纠正不正确的态度与信念 。

武警部队官兵常见寄生虫病健康教育效果评价

目的 评价对武警官兵开展常见寄生虫病健康教育的效果。 方法 参照有关“KABP”调查标准 ,自行设计问卷 ,内容包括基本情况、常见寄生虫病防治知识、有关态度与信念以及预防行为。多级整群抽样。教育前现场编号无记名调查 ,随后进行常见寄生虫病健康教育 (讲座 +小册子 +板报强化 ) ,半年后在同一群体中进行相同内容的问卷调查。用SPSS10 .0软件分析数据。 结果 健康教育前官兵对寄生虫病防治知识、态度信念、行为平均得分分别为 3 3 .2 5、65 .81、66.2 4;健康教育实施半年后平均得分分别为 72 .3 3、74.3 2、85 .49。经统计学处理 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。教育前后武警部队官兵常见寄生虫病的预防知识知晓率、态度与信念、行为形成率也有明显差异 (P <0 .0 0 1)。 结论 在武警部队官兵中进行常见寄生虫病的健康教育是有效的。

细胞凋亡与寄生虫、宿主相互作用的关系

细胞凋亡(apoptosis)是由自稳机制促发的主动性细胞死亡.这一过程既与个体的形成有关,又与免疫机制、器官细胞量的平衡以及多种细胞因子、生长因子、激素等的作用机理有关[1,2].近年,寄生虫与宿主相互作用中发现的细胞凋亡现象,日益受到重视.明确寄生虫感染状态下细胞凋亡的调控机制及意义,选择性地促进或抑制细胞凋亡的发生,将有助于达到防病、治病、杀虫的目的.

旋毛虫成虫cDNA文库免疫筛选及序列分析

目的 为获得旋毛虫成虫抗原基因。 方法 应用免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行免疫筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,采用DNAstar软件进行基因序列分析。 结果 免疫筛选成虫cDNA文库 ,获得 9个阳性克隆。对其中的Ts87进行测序 ,又采用 5′ RACE ,获取全长为 1172bp的cDNA片段 ,该基因编码 3 47个氨基酸。序列分析表明 ,克隆Ts87是个尚未见报道的旋毛虫基因序列 ,存在预测的抗原表位。 结论 获得具有抗原性的旋毛虫抗原新基因。

云南和海南两省不同地区恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2基因型的研究

目的 分析云南和海南两省恶性疟原虫的基因型及其分布。方法采用套式PCR法特异扩增MSP2基因中间多态区 ,对恶性疟原虫群体进行基因分型。结果 检测云南省 31例和海南省 2 9例恶性疟原虫患者血清 ,其中分别有 14和 18种不同的MSP2等位基因型 ,其等位基因株存在高度的多态性 ,基因片段大小及分布频率具有地区差异。海南省不同等位基因型虫株混合感染及多重感染现象比云南省严重。

用DNA限制性片段长度多态性鉴定中国旋毛虫3个分离株

以旋毛虫国际标准虫株Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ（Ｔｓ）、Ｔ．ｎａｔｉｖａ（Ｔｎ）和Ｔ．ｎｅｌｓｏｎｉ（Ｔｎｅ）作对照，利用限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）差异对分离自我国黑龙江省３株旋毛虫进行虫种归属鉴定。５种内切酶实验结果显示：黑龙江猪株（ＨＬ）与Ｔｓ酶切图谱相同；犬株（ＷＣ）与Ｔｎ酶谱相同；猫株（ＳＷ）与Ｔｎ的ＤｒａⅠ，ＰｓｔⅠ，ＨａｅⅢ酶谱相近，而与Ｔｎｅ酶谱差异显著。提示：黑龙江猪株系Ｔｓ；犬株系Ｔｎ；猫株在分类归属上似乎与Ｔｎ靠近。

IFN-γ激活巨噬细胞产生一氧化氮杀伤疟原虫的作用

目的 :观察 IFN- γ激活的巨噬细胞 ( MΦ)合成的一氧化氮 ( NO)及其在疟疾保护性免疫中杀伤疟原虫的作用。方法 :体外分离培养小鼠腹腔 MΦ,与不同浓度的 γ干扰素 ( IFN- γ)共育 4 8h后 ,加入分离的寄生疟原虫的红细胞 ,观察激活的 MΦ NO产生水平及其对疟原虫的杀伤作用。结果 :IFN-γ能激活 MΦ产生 NO,其产生的量与 IFN-γ的浓度有关 ;MΦ对疟原虫的杀伤作用与 NO的释放量呈显著相关关系 ( r=0 .898,n=13,P<0 .0 1) ;N-硝基 - L -精氨酸 ( N- nitro-L- arginine,L- NNA)能抑制 NO合成 ,同时也降低 MΦ 的杀伤活性 ;感染约氏疟原虫的 BAL B/c小鼠注射 L- NNA,导致原虫血症上升 ,小鼠死亡率升高。结论 :IFN- γ激活 MΦ产生 NO可能是杀伤疟原虫的重要作用机制。

云南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1基因分型及测序

目的：确定云南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１（ Ｍ Ｓ Ｐ １）基因分型和探讨 Ｍ Ｓ Ｐ １ 基因多态性的遗传及地理特征。方法：采用巢式 Ｐ Ｃ Ｒ法和引物标记周期反应测定法，对云南疫区恶性疟原虫群体 Ｍ Ｓ Ｐ１ 基因分型，并对代表株进行基因序列分析。结果：３０ 例云南恶性疟患者，检出３８ 个基因型虫株，其中 Ｍ Ａ Ｄ２０ 型是优势虫株， Ｋ１ 次之， Ｒ Ｏ３３ 最少，并存在不同基因株混合感染现象。扩增片段序列分析表明，云南疫区的 Ｍ Ａ Ｄ２０ 型、 Ｋ１ 型和 Ｒ Ｏ３３型均分别与国际上典型的 Ｍ Ｓ Ｐ１、 Ｍ Ａ Ｄ ２０、 Ｋ１ 和 Ｒ Ｏ ３３ 等位基因代表株具有高度的同源性。结论：以 Ｍ Ｓ Ｐ１ 为基因标记物的基因分型法，有助于掌握流行区疟原虫种群的基因特点、分布及流行特征。

旋毛虫成虫期特异性基因的筛选与序列分析

目的 获得旋毛虫成虫期特异性基因序列。方法 应用旋毛虫成虫期特异性探针对成虫cDNA文库进行杂交筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,采用DNAstar软件进行基因序列分析。结果 利用消减杂交 (subtractedhybridization)获得的旋毛虫成虫期特异性探针筛选成虫cDNA文库 ,获得一个长 16 2 9bp的基因。其开放阅读框架由 146 4个核苷酸组成 ,编码 487个氨基酸。序列分析表明 ,该序列是一个尚未见报道的旋毛虫基因序列 ,在 2 0 7～ 2 70位氨基酸间存在两个锌指结构 ,在 5 2～ 6 4,10 8～ 116 ,137～ 16 3,2 2 6～ 2 6 0位氨基酸处存在预测的抗原表位。结论 获得旋毛虫成虫期特异性基因 。

双氢青蒿素对约氏疟原虫在蚊体内发育的影响

目的：观察双氢青蒿素（ｄｉｈｙｄｒｏｑｉｎｇｈａｏｓｕ，ＤＱＨＳ）对约氏疟原虫在斯氏按蚊体内发育的影响。方法：受染疟原虫小鼠一次性经口灌喂不同浓度ＤＱＨＳ药液后，供蚊虫吸血，应用光镜和电镜观察对照组和用药组的疟原虫在蚊体内的发育情况。结果：ＤＱＨＳ对疟原虫配子体有一定的抑制作用，其作用强度与配子体成熟程度和用药剂量不同有关。未成熟配子体对药物较敏感；随着药物剂量的增加，卵囊和子孢子的阳性率和密度随之逐渐下降；但１８０ｍｇ或２４０ｍｇ／ｋｇ用药组对子孢子密度的影响的差别无显著性意义。电镜观察６０ｍｇ／ｋｇ作用１６ｈ后，用药组的蚊胃上卵囊（１２ｄ－１３ｄ解剖蚊），出现膜受损，甚至胞质空泡化。１２０ｍｇ／ｋｇ药量对蚊体内３日龄卵囊作用１６ｈ，卵囊仍继续发育，比较对照组和用药组的卵囊和子孢子密度，两组间差别无显著意义（Ｐ＞０．０５）；两组卵囊超微结构形态亦无明显差异。结论：ＤＱＨＳ影响约氏疟原虫配子体感染性而减少蚊媒传播。

肿瘤坏死因子增强巨噬细胞杀伤约氏疟原虫的观察

目的 :观察肿瘤坏死因子 ( TNF)对巨噬细胞 ( MΦ)表面受体表达及吞噬功能的影响 ,探讨 TNF体内杀伤疟原虫机制。方法 :以感染约氏疟原虫的 BAL B/ c小鼠为动物模型 ,将不同浓度的 TNF与小鼠腹腔 MΦ体外培养 5h后 ,加入感染红细胞 ,观察 MΦ对感染红细胞的吞噬率 ,将 TNF作用后的 MΦ用 m PAP超微半定量法测定 Fc受体 ,YC花环法测定 C3b受体。结果 :TNF能够增加 MΦ对感染红细胞的吞噬率 ,其作用与 TNF剂量呈正相关。TNF可增加正常及感染鼠MΦ 表面 Fc受体和 C3b受体的表达。结论 :TNF在感染小鼠体内可能调节 MΦ 表面受体的表达并增加其吞噬疟原虫的功能。

套式PCR检测蚊体内疟原虫的敏感性与特异性

目的：分析套式聚合酶链反应技术检测蚊体内疟原虫的敏感性与特异性。方法：采用２对针对间日疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）的特异引物，利用套式ＰＣＲ技术，从蚊体ＤＮＡ样本中，扩增间日疟原虫ＳＳＵｒＤＮＡ片段，进行间日疟原虫的检测。结果：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析，可见扩增出特异的约１２１ｂｐ大小的ＤＮＡ片段，估测每份蚊虫ＤＮＡ样本中含有３个以上子孢子或１００只蚊中含有１只阳性蚊即可得此片段，而对恶性疟原虫、食蟹猴疟原虫、约氏疟原虫及正常蚊虫ＤＮＡ不能扩增出此片段。结论：此法具有高度的敏感性和特异性。

毕赤酵母表达蛋白质的糖基化

毕赤酵母表达系统可对表达产物进行翻译后加工如糖基化等。通过研究其糖基化的特点、影响因素以及对重组蛋白质质产量、功能的影响 。

我国猪、猫旋毛虫的繁殖力指数初步研究

用消化法所得的猪、猫旋毛虫分别接种小鼠。结果表明，二者对小鼠均易感，猪旋毛虫对小鼠更易感。猪旋毛虫在小鼠的繁殖力指数（ＲＣＩ）为３７７５８±２９４８３，与旋毛形线虫的ＲＣＩ相符；猫旋毛虫的ＲＣＩ为１１９０６±７９５４２，与土著毛形线虫的ＲＣＩ相符。本研究结果提示，我国旋毛虫可能存在两个群；此外，ＲＣＩ可做为虫种鉴别的指标之一。

源真核生物蓝氏贾第虫核分裂的初步观察

贾第虫属于源真核生物（Ａｒｃｈｅｚｏａ）中的双滴虫门，是目前所知的最低等的真核生物。本工作首次对蓝氏贾第虫（Ｇｉａｒｄｌｉａｌａｍｂｌａ）的核分裂作了初步的电镜观察，未能在分裂着的核中见到纺锤体或纺锤体微管。以０．１—２０μｇ／ｍｌ浓度的秋水仙素作实验，其核分裂也不受阻抑。以抗微管蛋白的多抗作免疫荧光检查，也未见分裂着的核中有微管蛋白。这似乎意味着其核分裂方式乃是前有丝分裂性质的。对此进行了讨论。

蓝氏贾第鞭毛虫染色体核型初步观察

目的初步观察蓝氏贾第鞭毛虫细胞分裂过程中典型凝集染色体的形成及其数目。方法用改良TYI-S-33培养基培养贾第虫滋养体。在结束培养前4h弃去旧培养基,加入事先预热的含有秋水仙素(终浓度为0.2μg/ml)的新鲜培养液。低渗处理55min,用甲醇∶冰醋酸(体积比=3∶1)固定液固定。收集细胞、滴片、Giemsa染液染色,光学显微镜观察结果。结果获得了较好的染色体分裂相。贾第虫染色体的数目多数为2n=8条。50个细胞分裂相中,有35个为8条染色体,10个为9条染色体,5个为10条染色体。染色体微小呈小杆状,有时成对,形态相同。结论蓝氏贾第鞭毛虫在分裂过程中形成典型的凝集染色体,染色体数目为2n=10条。

源真核生物贾第虫与原细菌着丝粒／动粒蛋白的免疫印迹检查

以抗人着丝粒蛋白Ｂ的单抗和多抗以及抗ＣＨＯ细胞动粒蛋白的单抗对源真核生物（ａｒｃｈｅｚｏａ）蓝氏贾第虫（Ｇｉａｒｄｉａｌａｍｂｌｉａ）和分别代表原细菌的３个枝的３种原细菌（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ、Ｓｕｌｆｏｓｐｈａｅｒｅｌｌｕｓ）作了免疫电泳检查，并以小眼虫和大肠杆菌作为对照。结果表明，３种原细菌都呈阳性反应；而且贾第虫的反应情况显然比纤毛虫、眼虫、典型涡鞭毛虫、尖尾虫（Ｏｘｙｒｒｈｉｓ）等单细胞后真核生物的更接近于原细菌的情况。这不仅从一个新的方面为真核细胞起源于古代的原细菌的学说提供了新的佐证，而且从着丝粒／动粒蛋白方面证明了源真核生物贾第虫的原始性。本工作还为认识着丝粒蛋白Ｂ和动粒蛋白的起源和演化提供了线索。

从大鼠肺灌洗液中分离纯化培养卡氏肺孢子虫

目的建立卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii,P．c)纯培养株。方法从肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠模型离体肺脏的灌洗液中分离P.c,用改良IMDM培养基进行体外培养;以四胺银染色计数法观察虫体增殖情况;用PCR扩增培养物中P．c线粒体大亚基rRNA基因,进行基因鉴定;用透射电镜观察培养虫体的超微结构。结果用添加s-腺苷甲硫氨酸(SAM)等辅助剂的IMDM培养基从8只PCP大鼠的肺灌洗液中分离出5个Pc纯培养株(P.c Rat1-5)。分离培养的P.c可进行冷冻保存和复苏培养。培养72 h的P.c包囊可增殖19～22倍。形态、超微结构及基因序列分析证实从大鼠肺灌洗液中分离出的培养物是大鼠源性肺孢子虫。结论从大鼠肺灌洗液中分离培养出5株大鼠源卡氏肺孢子虫。

旋毛虫pcDNA3.1/Ts87重组质粒的构建和表达

目的 构建和表达旋毛虫重组质粒。方法 PCR法在旋毛虫抗原基因Ts87两端加上合适的酶切位点和KOZAK序列,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA3.1/Ts87重组质粒。采用Lipofectamine介导的细胞外源DNA转染法,把重组质粒导入COS7细胞。分别用肌肉注射和基因枪免疫小鼠。结果和结论 成功构建pcD-NA3.1/Ts87重组质粒,并在COS7细胞和BALB/c小鼠体内表达。