培养原始生殖细胞的新方法——Sertoli细胞的应用

为探讨睾丸支持细胞 (sertolicell,SCs)对原始生殖细胞 ( primordialgermcell,PGCs)的增生与生长是否有明显的促进作用。用SCs和同源生殖嵴成纤维细胞分别与PGCs共培养。结果发现 :与SCs共培养的PGCs集落多于与同源生殖嵴成纤维细胞共培养的PGCs集落 ,传代次数也多于同源生殖嵴成纤维细胞。提示

孕酮受体在雌性小鼠生殖系统中的分布及RU486对其影响

用免疫细胞化学ＬＳＡＢ法，兔抗人孕酮受体抗体（适用于小鼠）显示小鼠卵巢、输卵管、子宫和阴道中的孕酮受体。结果显示：未注射ＲＵ４８６的动物的子宫与阴道内孕酮受体丰富，输卵管中含量较少，卵巢中未见阳性反应物质。ＲＵ４８６注射４天后，子宫与阴道中孕酮受体明显减少；注射后７天，输卵管、子宫和阴道都为阴性反应。该结果显示了孕酮受体在雌性小鼠生殖系统内的分布特点，提示ＲＵ４８６封闭孕酮受体的最佳时间为用药后第７天。

雌性小鼠生殖系统、垂体和大脑中孕酮受体的免疫细胞化学研究

应用免疫细胞化学ＬＳＡＢ法和孕酮受体抗体研究了雌性小鼠生殖系统、垂体和大脑中孕酮受体的分布及其与胚泡植入的关系。结果：孕酮受体主要分布于子宫和阴道，输卵管中含量极少。它们均位于细胞核内，胞质为阴性。卵巢、垂体和大脑未见阳性反应细胞。孕酮受体在子宫内膜表面上皮和间质中的含量变化与胚泡植入平行发展。结果提示：子宫内膜在为胚泡植入做准备的过程中与孕酮受体的关系密切。

培养原始生殖细胞的新方法

为探讨原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)在体外长期增殖、生长并长期保持分化潜能的新方法,我们将PGCs分别与睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)和同源生殖嵴成纤维细胞共培养。结果与SCs共培养的PGCs集落明显多于同源生殖嵴成纤维细胞共培养PGCs集落,传代次数也显著多于同源生殖嵴成纤维细胞．目前与SCs共培养的PGCs已成功传代培养至了第51代。因此我们认为PGCs与SCs共培养,可有效提高原始生殖细胞在体外的增殖能力并可长期维持干细胞的特性。

小鼠原始生殖细胞体外增殖与分化的研究

目的探讨小鼠原始生殖细胞(PGC)的体外增殖与分化。方法将PGC与睾丸支持细胞(SC)共培养进行PGC的体外增殖。用原代PGC悬浮培养获取类胚体(EB),将EB贴壁培养,观察自然分化的结果。结果PGC与SC共培养可获得大量PGC集落。组织化学与免疫组织化学法显示,PGC集落碱性磷酸酶(AKP)和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)均呈阳性表达。将PGC悬浮培养可获得EB,EB贴壁生长后,可自然分化形成上皮样细胞、成纤维样细胞和神经样细胞。结论小鼠PGC与SC共培养能在体外大量增殖。并保持干细胞特性。PGC可形成EB,EB自然分化后大多数形成神经样细胞、其次是上皮样细胞和成纤维样细胞。

诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞样细胞分化的新方法

目的探索诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞样细胞定向分化的有效方法。方法分离孕13 d昆明小鼠的原始生殖细胞(PGC),体外培养扩增后,向其培养液中加入新生鼠肝组织提取液和包被有胎肝细胞的微囊共培养,利用微环境诱导法使PGC定向分化,然后免疫细胞化学法标记α-1-抗胰蛋白酶(AAT)和白蛋白(ALB)。结果在微环境的诱导作用下,可见PGC分化成卵圆形或星形肝细胞样细胞,并且分化细胞的数量随诱导时间延长而增多,培养2周时分化率可达70%以上。分化的肝细胞样细胞中,AAT和ALB均呈阳性表达。结论应用新生小鼠肝组织提取液和包被有胎肝细胞的微囊构成的微环境,可有效诱导PGC向肝细胞方向分化。

人子宫内膜细胞外基质在月经周期中变化的研究

本实验对人正常子宫内膜细胞外基质随月经周期的变动状况进行了观察，目的是进一步探讨为接受胚泡着床，子宫内膜的准备状态。子宫内膜标本利用ＬＳＡＢ免疫组织化学方法对细胞外基质的Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原蛋白、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白在月经周期中的变化进行了观察。结果显示胶原蛋白、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白主要分布在上皮组织的基膜中。胶原蛋白和纤维粘连蛋白总量在分泌早期明显减少。而层粘连蛋白总量在分泌期，特别在分泌中期明显增多。结果表明，细胞外基质随月经周期变化而明显变化。提示子宫内膜细胞外基质的周期变化对胚泡着床可能有着重要的作用。我们认为，细胞外基质是否能伴随月经周期而进行周期性变化是检查是否有正常月经周期的指标之一。本研究对着床、抗着床机理及某些不孕症的治疗将提供新方向。

中草药促排卵汤对小鼠卵巢及子宫内膜作用的组织化学研究

昆明系雌性小鼠在生育期服用相当于人剂量的中草药促排卵汤５ｄ后，取出其卵巢和子宫，制成冰冻切片，均用油红０法显示脂类（Ｌ），用Ｌｏｊｄａ法显示３－β－羟基甾体脱氨酶（３－β－ＨＳＤＨ），用亮氨酰－β萘酰胺法显示氨基肽酶（ＬＮＡｓｅ），用偶氮偶联法显示碱性磷酸酶（ＡＫＰ），对子宫还用ＰＡＳ法显示糖原（ＧＬｙ）。结果表明，与对照组相比，无论是动情前期或动情后期，服用中草药的小鼠卵巢其卵泡内膜层及颗粒层细胞和黄体细胞的胞浆内３－β－ＨＳＤＨ活性和脂类明显增高；子宫内膜上皮细胞及间质内的糖蛋白和脂类明显增高。对结果的讨论说明中草药促排卵汤确有促进卵巢卵泡和黄体的甾体激素分泌，并可增强子宫内膜营养的作用，这些都会有利于胚泡的着床及发育。

药物流产后子宫刮出物中hPL、PSβ1G及血管的相关抗原初探

目的:探讨药物流产持续出血时子宫刮出物中胎盘催乳素(hPL)、胎盘特异性糖蛋白(PSβ1G)、胎盘碱性磷酸酶(PALP)和因子Ⅷ相关抗原的分布。方法:运用组织病理学和免疫组织化学方法,对正常药物流产排出组织(正常组:10例)和流产后持续出血而刮宫的刮出组织(出血组:20例)进行了研究。结果:(1)组织病理学:出血组中,刮出物包括子宫内膜、残留蜕膜、残留绒毛和绒毛外滋养层细胞。子宫内膜的腺体和基质发育不同步,有大量白细胞浸润。(2)免疫细胞化学:1)hPL和PSβ1G:正常组中,大部分蜕膜细胞为阴性,其中可见少量阳性的绒毛外滋养层细胞;绒毛的滋养层呈阳性。出血组中,子宫内膜和残留蜕膜也为阴性,某些蜕膜中弥散着大量阳性的绒毛外滋养层细胞;残留绒毛的滋养层为弱阳性。2)PALP和因子Ⅷ相关抗原显示血管功能:两组中,蜕膜中毛细血管内皮细胞和腺体上皮细胞都呈阳性;绒毛的滋养层细胞也呈阳性。结论:出血组的残留蜕膜中血液供应较好,绒毛外滋养层细胞所分泌hPL和PSβ1G能营养蜕膜,这些因素会导致蜕膜残留;而蜕膜残留、子宫内膜不同步发育和白细胞浸润最终导致药物流产后出血。

药物流产后子宫刮出物的组织病理学和免疫细胞化学研究

为探讨药物流产后阴道出血和子宫内膜中胎盘残留组织的关系，用组织病理学和免疫细胞化学方法，对药物流产后刮出组织（２０例）和正常流出组织（１０例）进行了研究。组织病理学显示：刮出内膜组织中都含有残留蜕膜组织，后者多数蜕膜细胞变性坏死，蜕膜和内膜都有大量炎性细胞浸润，并具有不同步发育的腺体和间质。免疫细胞化学方法显示：正常流出或刮出组织的毛细血管内皮因子Ⅷ相关抗原和胎盘碱性磷酸酶（ＰＡＬＰ）呈阳性反应。残留的蜕膜组织中可见结构和功能正常的毛细血管。提示：子宫内膜中的炎细胞浸润，内膜不同步发育，残留蜕膜的某些部位因正常血液供应而继续生长，可能是药物流产后出血的原因。

功能性子宫出血子宫内膜血管变化的研究

目的 探讨内分泌功能紊乱和避孕药具引起的功能性子宫出血(DUB)病理变化的共同点。方法 应用组织学、免疫组织化学方法对DUB的子宫内膜进行组织形态学、血管内皮细胞CD34和基膜层粘连蛋白(LN)的比较研究。结果 避孕药具引发的出血为弥散性,内膜发育受抑制;而内分泌紊乱引发的出血为局灶性,内膜发育呈不同步状态。2组共同点是出血部位的血管呈断裂像,血管内皮细胞中CD34 和血管基膜中LN的阳性表达都明显减弱。结论 不同诱因的DUB导致子宫出血的直接因素均是毛细血管内皮细胞中CD34和基膜中LN的减少。

小鼠自体与胚胎异体卵巢移植的比较研究

对雌性小鼠进行自体及胚胎异体卵巢移植，于移植前、后检查动情周期，并于移植后进行组织学观察和血清孕酮放射免疫测定，探讨移植卵巢的生长发育以及胚胎卵巢移植的最佳时机。结果显示：双侧自体移植１４ｄ以后，移植卵巢的结构与正常卵巢组织没有明显的区别；血清孕酮水平接近正常，动情周期恢复。胚胎１７～１９ｄ的卵巢移植７～１４ｄ，卵巢中也可见到原始卵泡和窦前卵泡。结果提示：妊娠１７ｄ以后的胚胎卵巢具有较低的免疫原性，移植后有可能发育成熟，但其生长比成体组织慢。

小鼠移植卵巢的生长及功能初探

实验对小鼠单侧和双侧自体异位移植的卵巢，运用组织学、组织化学和放射免疫技术，探讨其生长规律。结果表明：移植卵巢的生长可分三个阶段：（１）坏死期：移植第２～４天，卵巢的原有组织处于退化状态，仅边缘可见原始卵泡和窦前卵泡；（２）恢复期：移植第７～１４天，卵巢逐渐恢复正常结构，血清孕酮水平开始上升，大多数动物出现动情周期；（３）发育成熟期：移植第１４天以后，卵巢内含发育不同阶段的卵泡、黄体和大量间质腺，孕酮水平接近正常。单侧移植卵巢的生长比双侧推迟约７天。

Norplant使用者子宫内膜血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及转移生长因子β_1的研究

为探讨Norplant使用者子宫不规则出血的相关因素,对使用Norplant月经规律和有不规则子宫出血者的子宫内膜与正常子宫内膜的形态、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转移生长因子β1(TGFβ1)进行比较观察。结果显示:Norplant使用者子宫内膜无典型的周期特点,子宫内膜VEGF比正常子宫内膜减少,尤其是不规则出血组减少更为明显,但bFGF及GFβ1无明显差异。提示Norplant使用者子宫异常出血与子宫内膜VEGF的减少有关。

实验性脾虚证大鼠甲状腺及甲状旁腺形态学与细胞化学研究

对实验性脾虚证大鼠的甲状腺与甲状旁腺进行了形态学与细胞化学观察。形态学显示：脾虚证大鼠甲状腺滤泡变得不规则，滤泡上皮呈低立方状，滤泡间隙变宽；甲状旁腺变化不明显。细胞化学显示甲状腺滤泡细胞酸性磷酸酶（ＡＣＰ）和滤泡液的ＰＡＳ反应明显减弱（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。甲状旁腺碱性磷酸酶（ＡＬＰ）增强（Ｐ＜０．０５），而ＡＣＰ减弱（Ｐ＜０．０１）。

层粘连蛋白及纤维粘连蛋白与药流后子宫出血关系的研究

为探讨层粘连蛋白 (LM)及纤维粘连蛋白 (FN)在米非司酮药物流产 (以下简称药流 )后子宫持续出血时的表达 ,对 2 0例米非司酮 +米索前列醇药物流产后子宫出血 (出血组 )的刮出组织及 1 0例人工流产负压吸宫术吸出的组织 (对照组 ) ,用HE及免疫组织化学方法染色并观察标本。结果 :出血组的刮出组织中 4 5%可见滋养细胞或绒毛 ,90 %发现蜕膜组织。 2组蜕膜组织的血管及腺上皮基膜、蜕膜细胞周围和一部分蜕膜细胞胞质内都含有较丰富的LM与FN ,并且 2组间比较 ,FN与LM含量表达无明显差异 (P >0 .0 5)。说明残留蜕膜中含有能分泌大量LM与FN的蜕膜细胞和血管 ,致使蜕膜组织与子宫壁牢固地结合而不易脱落 ,影响内膜发育而引起出血。

培养大脑皮层神经元的新方法—睾丸支持细胞的应用

实验将睾丸支持细胞(Sertoli细胞,SCs)与神经元共培养,以观察SCs的促生长与营养作用。结果显示2h时神经元的贴壁率明显增加(68%vs 0:P<0.01),从而提高了体外培养神经元的存活量,而且贴壁神经元的胞体面积以及突起数目也明显大于对照组(174.85±105.18 vs 96.59±41.63,2.53±1.79 vs 1.36±0.54:P<0.01)。实验结果证实使用SCs与神经元共培养是一种可以获得大量目的神经元的简便易行的新方法。