小鼠原始生殖细胞体外增殖与分化的研究

目的探讨小鼠原始生殖细胞(PGC)的体外增殖与分化。方法将PGC与睾丸支持细胞(SC)共培养进行PGC的体外增殖。用原代PGC悬浮培养获取类胚体(EB),将EB贴壁培养,观察自然分化的结果。结果PGC与SC共培养可获得大量PGC集落。组织化学与免疫组织化学法显示,PGC集落碱性磷酸酶(AKP)和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)均呈阳性表达。将PGC悬浮培养可获得EB,EB贴壁生长后,可自然分化形成上皮样细胞、成纤维样细胞和神经样细胞。结论小鼠PGC与SC共培养能在体外大量增殖。并保持干细胞特性。PGC可形成EB,EB自然分化后大多数形成神经样细胞、其次是上皮样细胞和成纤维样细胞。

人子宫内膜细胞外基质在月经周期中变化的研究

本实验对人正常子宫内膜细胞外基质随月经周期的变动状况进行了观察，目的是进一步探讨为接受胚泡着床，子宫内膜的准备状态。子宫内膜标本利用ＬＳＡＢ免疫组织化学方法对细胞外基质的Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原蛋白、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白在月经周期中的变化进行了观察。结果显示胶原蛋白、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白主要分布在上皮组织的基膜中。胶原蛋白和纤维粘连蛋白总量在分泌早期明显减少。而层粘连蛋白总量在分泌期，特别在分泌中期明显增多。结果表明，细胞外基质随月经周期变化而明显变化。提示子宫内膜细胞外基质的周期变化对胚泡着床可能有着重要的作用。我们认为，细胞外基质是否能伴随月经周期而进行周期性变化是检查是否有正常月经周期的指标之一。本研究对着床、抗着床机理及某些不孕症的治疗将提供新方向。

中草药促排卵汤对小鼠卵巢及子宫内膜作用的组织化学研究

昆明系雌性小鼠在生育期服用相当于人剂量的中草药促排卵汤５ｄ后，取出其卵巢和子宫，制成冰冻切片，均用油红０法显示脂类（Ｌ），用Ｌｏｊｄａ法显示３－β－羟基甾体脱氨酶（３－β－ＨＳＤＨ），用亮氨酰－β萘酰胺法显示氨基肽酶（ＬＮＡｓｅ），用偶氮偶联法显示碱性磷酸酶（ＡＫＰ），对子宫还用ＰＡＳ法显示糖原（ＧＬｙ）。结果表明，与对照组相比，无论是动情前期或动情后期，服用中草药的小鼠卵巢其卵泡内膜层及颗粒层细胞和黄体细胞的胞浆内３－β－ＨＳＤＨ活性和脂类明显增高；子宫内膜上皮细胞及间质内的糖蛋白和脂类明显增高。对结果的讨论说明中草药促排卵汤确有促进卵巢卵泡和黄体的甾体激素分泌，并可增强子宫内膜营养的作用，这些都会有利于胚泡的着床及发育。

药物流产后子宫刮出物的组织病理学和免疫细胞化学研究

为探讨药物流产后阴道出血和子宫内膜中胎盘残留组织的关系，用组织病理学和免疫细胞化学方法，对药物流产后刮出组织（２０例）和正常流出组织（１０例）进行了研究。组织病理学显示：刮出内膜组织中都含有残留蜕膜组织，后者多数蜕膜细胞变性坏死，蜕膜和内膜都有大量炎性细胞浸润，并具有不同步发育的腺体和间质。免疫细胞化学方法显示：正常流出或刮出组织的毛细血管内皮因子Ⅷ相关抗原和胎盘碱性磷酸酶（ＰＡＬＰ）呈阳性反应。残留的蜕膜组织中可见结构和功能正常的毛细血管。提示：子宫内膜中的炎细胞浸润，内膜不同步发育，残留蜕膜的某些部位因正常血液供应而继续生长，可能是药物流产后出血的原因。

功能性子宫出血子宫内膜血管变化的研究

目的 探讨内分泌功能紊乱和避孕药具引起的功能性子宫出血(DUB)病理变化的共同点。方法 应用组织学、免疫组织化学方法对DUB的子宫内膜进行组织形态学、血管内皮细胞CD34和基膜层粘连蛋白(LN)的比较研究。结果 避孕药具引发的出血为弥散性,内膜发育受抑制;而内分泌紊乱引发的出血为局灶性,内膜发育呈不同步状态。2组共同点是出血部位的血管呈断裂像,血管内皮细胞中CD34 和血管基膜中LN的阳性表达都明显减弱。结论 不同诱因的DUB导致子宫出血的直接因素均是毛细血管内皮细胞中CD34和基膜中LN的减少。

Norplant使用者子宫内膜血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及转移生长因子β_1的研究

为探讨Norplant使用者子宫不规则出血的相关因素,对使用Norplant月经规律和有不规则子宫出血者的子宫内膜与正常子宫内膜的形态、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转移生长因子β1(TGFβ1)进行比较观察。结果显示:Norplant使用者子宫内膜无典型的周期特点,子宫内膜VEGF比正常子宫内膜减少,尤其是不规则出血组减少更为明显,但bFGF及GFβ1无明显差异。提示Norplant使用者子宫异常出血与子宫内膜VEGF的减少有关。

培养原始生殖细胞的新方法——Sertoli细胞的应用

为探讨睾丸支持细胞 (sertolicell,SCs)对原始生殖细胞 ( primordialgermcell,PGCs)的增生与生长是否有明显的促进作用。用SCs和同源生殖嵴成纤维细胞分别与PGCs共培养。结果发现 :与SCs共培养的PGCs集落多于与同源生殖嵴成纤维细胞共培养的PGCs集落 ,传代次数也多于同源生殖嵴成纤维细胞。提示

实验性脾虚证大鼠甲状腺及甲状旁腺形态学与细胞化学研究

对实验性脾虚证大鼠的甲状腺与甲状旁腺进行了形态学与细胞化学观察。形态学显示：脾虚证大鼠甲状腺滤泡变得不规则，滤泡上皮呈低立方状，滤泡间隙变宽；甲状旁腺变化不明显。细胞化学显示甲状腺滤泡细胞酸性磷酸酶（ＡＣＰ）和滤泡液的ＰＡＳ反应明显减弱（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。甲状旁腺碱性磷酸酶（ＡＬＰ）增强（Ｐ＜０．０５），而ＡＣＰ减弱（Ｐ＜０．０１）。

层粘连蛋白及纤维粘连蛋白与药流后子宫出血关系的研究

为探讨层粘连蛋白 (LM)及纤维粘连蛋白 (FN)在米非司酮药物流产 (以下简称药流 )后子宫持续出血时的表达 ,对 2 0例米非司酮 +米索前列醇药物流产后子宫出血 (出血组 )的刮出组织及 1 0例人工流产负压吸宫术吸出的组织 (对照组 ) ,用HE及免疫组织化学方法染色并观察标本。结果 :出血组的刮出组织中 4 5%可见滋养细胞或绒毛 ,90 %发现蜕膜组织。 2组蜕膜组织的血管及腺上皮基膜、蜕膜细胞周围和一部分蜕膜细胞胞质内都含有较丰富的LM与FN ,并且 2组间比较 ,FN与LM含量表达无明显差异 (P >0 .0 5)。说明残留蜕膜中含有能分泌大量LM与FN的蜕膜细胞和血管 ,致使蜕膜组织与子宫壁牢固地结合而不易脱落 ,影响内膜发育而引起出血。

颗粒子宫腺细胞的分离、纯化与细胞化学研究

胰蛋白酶消化小鼠子宫腺细胞区，制成单细胞悬液，滴片后进行细胞学及细胞化学研究。结果：有多种类型细胞存在于悬液中，其中中等大小细胞（直径２０μｍ左右）大部分为颗粒子宫腺细胞（ＧｒａｎｕｌａｔｅｄＭｅｔｒｉａｌＧｌａｎｄＣｅｌｌｓ，ＧＭＧｃｅｌｌｓ）。ＧＭＧ细胞约占所有细胞的５０％。利用Ｐｅｒｃｏｌｌ非连续性密度梯度离心可以提高ＧＭＧ细胞的纯度，使之达８０％以上。细胞化学研究显示ＧＭＧ细胞含ＡＣＰ，ＮＳＥ，ＬＮＡｓｅ及糖蛋白成份。

显示微血管功能状态技术方法的比较研究

目的 为子宫血管生物学的研究提供形态学指标的依据。 方法 人增殖期子宫内膜 10例。应用免疫组织化学方法 ,对与血管功能密切相关的各种因子进行标记表达。 结果 不同标记物在同一组织、同一切面上 ,微血管的形态与密度呈现了明显的差异。

睾丸支持细胞促进体外培养神经元生长的研究

目的 探讨睾丸支持细胞 (SC)对体外培养神经元生长发育的促进作用。 方法 将SCs制备成饲养层和SCs条件培养液 (SCM)后与神经元共培养 ,观察培养细胞的存活数和突起数 ,并应用图像分析仪观察细胞的面积。 结果 SCs饲养层及SCM培养神经元的存活数、突起数和胞体面积明显高于对照组 (P <0 0 1)。 结论SCs对体外培养的神经元具有显著的促生长作用。

成年与胚胎大鼠卵泡细胞的体外研究

将胚胎、成年和妊娠Ｗｉｓｔａｒ大鼠的卵泡细胞进行冷冻保存、复苏后在ＲＰＭＩ６４０培养液中培养，观察各自的生长发育情况。形态学显示：冷冻复苏的各组卵泡细胞均有贴壁增殖生长的能力，培养初期胚胎与成年卵泡的贴壁生长速度快，而妊娠卵泡细胞贴壁生长发生的较晚；但培养至４ｄ后，胚胎卵泡细胞贴壁生长能力逐渐减弱并消失。组织化学显示：培养３ｄ后的胚胎卵泡细胞３β羟甾脱氢酶（３βＨＳＤＨ）呈阴性，酸性磷酸酶（ＡＣＰ）和ＰＡＳ反应也弱于成年卵泡细胞。结果提示：胚胎卵泡细胞可能是未完全成熟。

小鼠胚胎及生后发育的肾上腺皮质的组织学与组织化学研究

胚龄１３日小鼠肾上腺结构尚未形成，在肾附近可见两群细胞。１５日两群细胞融合，呈一新月形小体，外包被膜，内含两类细胞，一类胞体较大，染色较深，另一类胞体较小，染色浅。１７日，胞体大染色深的细胞形成团索状，发育成皮质细胞；另一类细胞则迁移至中央，形成髓质。组织化学研究显示，胎龄１５日及以后的肾上腺皮质细胞３β－羟甾体脱氢酶（３β－ＨＳＤＨ）、脂类、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、亮氨酸氨基肽酶（ＬＮＡｓｅ）均为阳性。以上一些酶活性的出现提示１５日及其后胚鼠，生后１～６０天小鼠的肾上腺皮质都有分泌甾体激素之功能。

子宫内膜毛细血管密度显示方法的比较研究

为准确显示子宫内膜毛细血管的密度,应用免疫组织化学方法,对人分泌期子宫内膜进行与血管功能密切相关的各种因子的标记表达,并应用图像分析仪进行子宫内膜毛细血管密度的测定。结果在同一组织、同一切面上,CLⅣ和CD34显示的毛细血管密度最高。提示CLⅣ和CD34是显示血管密度最好的标记物。

VIII因子相关抗原、基质金属蛋白酶9与米非司酮药物流产后子宫异常出血的相关性研究

目的探讨VIII因子相关抗原(VIII-RAg)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)与米非司酮药物流产(药流)后子宫异常出血的相关性。方法采用免疫组织化学法,对正常早孕人工流产(人流组)、药流完全和不完全组蜕膜组织中VIII-RAg和MMP-9进行标记,应用图像分析仪对标记结果进行定量观察,SPSS10.0统计软件进行数据分析。结果药流完全组和药流不全组出血区与人流组和药流不全组无出血区比较,蜕膜血管内皮细胞VIII-RAg和基质细胞MMP-9的表达,均有显著性差异(P<0.01),而药流完全组和药流不全组出血区之间,人流组和药流不全组无出血区之间无显著差异。结论米非司酮药流后子宫异常出血与蜕膜血管内皮VIII-RAg和基质细胞MMP-9的表达异常相关。

大鼠胚胎卵巢异体异位移植的研究

为了解胚胎卵巢异体异位移植后的存活和生长发育情况 ,将大鼠胚胎卵巢分别移植到去势雌鼠颈部皮下或肾被膜下 ,HE染色观察。移植后第 1 0天时移植物周围有结缔组织包裹 ,内有原始卵泡 ;移植后第 2 5天开始 ,移植物内可见大量发育卵泡及黄体与间质腺 ,移植卵巢中有丰富的血管。移植后平均 2 2天阴道上皮细胞出现周期性改变。细胞化学及免疫组织化学反应显示 :移植 3 5天后卵巢的卵泡膜内层细胞 3 -β羟甾脱氢酶呈阳性反应 ,卵巢血管内皮细胞碱性磷酸酶和 ATP酶为阳性 ;雌 ,孕激素及其受体反应强度与正常对照无明显差异。放射免疫法测定血清雌激素 ,孕激素 ,卵泡刺激素 (FSH)及黄体生成素 (L H)显示 ,移植 3 5天后 ,FSH和 L H的浓度接近正常。以上结果说明胚胎卵巢能在异体异位存活。

Norplant使用者子宫内膜中层粘连蛋白、血管内皮生长因子及CD_(34)含量的研究

对未使用 Norplant和使用 Norplant0 .5年、1年及 2年以上的无不规则子宫出血与有不规则子宫出血的人子宫内膜进行研究 ,比较观察形态学变化以及内膜中层粘连蛋白、血管内皮生长因子及内皮细胞的 CD34 的含量 ,结果显示 1 .Norplant使用者子宫内膜增殖期特点消失 ;2 .血管内皮变薄 ;3.不规则出血的内膜中血管基膜层粘连蛋白、血管内皮生长因子明显减少。提示 Norplant使用者子宫不规则出血与内膜血管内皮变薄。

培养原始生殖细胞的新方法

为探讨原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)在体外长期增殖、生长并长期保持分化潜能的新方法,我们将PGCs分别与睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)和同源生殖嵴成纤维细胞共培养。结果与SCs共培养的PGCs集落明显多于同源生殖嵴成纤维细胞共培养PGCs集落,传代次数也显著多于同源生殖嵴成纤维细胞．目前与SCs共培养的PGCs已成功传代培养至了第51代。因此我们认为PGCs与SCs共培养,可有效提高原始生殖细胞在体外的增殖能力并可长期维持干细胞的特性。