间羟苯甲酸4-羟化酶的化学计量学研究

用扫描分光光度计对酶所催化的反应进行化学计量学研究。在反应开始后的不同时间，在２００～４００ｎｍ波长范围内扫描，观察到不同的吸收波谱，直到吸收波谱不再改变为止，由此得到间羟苯甲酸４羟化酶催化间羟苯甲酸转变成３，４二羟苯甲酸随时间变化的吸收波谱。用摩尔消光系数计算每种成分的浓度，在２次独立的实验中，底物与产物的摩尔比值分别为１：０．９９８和１：１．０８５，提示来源于Ｃｏ．ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉＫＨ１２２３Ｓ菌株的ＭＯＢ４ＨＯａｓｅ与文献报道的来源于Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ菌株的ＭＯＢ４ＨＯａｓｅ所催化的反应是相同的。

加强研究生的《分子生物学》课程建设

为使硕士研究生与博士研究生了解当今分子生物学进展 ,熟悉有关基础理论 ,并掌握必要的分子生物学实验技术 ,近年我校为《分子生物学》课程建设做了以下改进 :1更新教材 ,新编适用的《医学分子生物学》;2加强师资队伍建设 ,集校内在该领域掌握相关前沿知识并有实践经验的教授与青年骨干教师任课 ,并聘请校外专家学者作有关新进展讲座 ;3更新教学手段 ,应用多媒体教学软件等 ,以增大知识容量、提高教学质量 ;4更新教学内容 ,突出“新”与“实用”,包括以下三部分内容—分子生物学研究进展、分子生物学实验技术、分子生物学实验。力求在教短时间内拓宽研究生的知识面 ,启迪他们的思维 。

缺氧小鼠脑中神经节苷脂和单胺类神经递质水平

脑缺氧和缺氧后的再灌注常导致一系列复杂的生理生化改变．通过小鼠重复缺氧后，观察其脑组织中的神经节苷脂和单胺类递质水平变化情况，发现重复缺氧时，随着缺氧次数的增加，ａ．神经节苷脂水平（以唾液酸含量表示）非常明显地持续下降（Ｐ＜０．０１），其中ＧＭ１与ＧＤ１ｂ相对组分百分比值下降尤为突出（ＧＭ１：Ｐ＜０．０５，ＧＤ１ｂ：Ｐ＜０．０１）；ｂ．单胺类神经递质中ＮＥ和ＤＯＰＡ水平下降，ＤＡ和ＨＩＡＡ水平升高（Ｐ＜０．０１）．结果提示脑组织经重复缺氧后，中枢神经组织细胞膜受到一定程度的损伤，其结果可能影响到单胺类神经递质的合成、释放、重摄取和贮存的全过程；据此推测脑组织缺氧时神经节苷脂与单胺类神经递质水平改变时存在着相互联系．

急性重复缺氧与动物脑组织细胞保护作用的研究

目的：观察急性重复缺氧动物产生间歇性低氧适应及对脑组织细胞的保护作用。结果：一次急性缺氧时血液和脑组织中的ＧＳＨｐｘ活性明显下降（Ｐ＜００１），其中脑组织中的ＧＳＨｐｘ活性在急性重复缺氧时被激活（Ｐ＜００５）。脑组织抗氧化能力增强。同时脑组织的Ｇｌｓ含量明显下降（Ｐ＜００１）。结论：Ｇｌｓ和ＧＳＨｐｘ有抗自由基活性。急性重复性缺氧Ｇｌｓ下降同时ＮＥ下降，不同于持续性低氧表现，推测脑细胞β受体－腺苷酸环化酶系统在急性重复缺氧时未受严重伤害。

急性重复性缺氧小鼠脑神经节苷脂含量的研究

以昆明鼠为实验对象，用ＣＳ－９０００薄层扫描仪测定急性重复性缺氧小鼠脑组织中神经节苷脂ＧＭ１、ＧＤ１ａ、ＧＤ１ｂ和ＧＴ的各个组分相对百分比及唾液酸的含量．结果发现：与未经缺氧处理的空白对照组（Ａ）比较，缺氧一次的实验对照组（Ｂ）及急性重复缺氧４次后饲养２ｄ（天）实验对照组（Ｄ）等３组小鼠比急性重复缺氧４次实验组（Ｃ）小鼠脑组织中的唾液酸含量显著下降，神经节苷脂ＧＭ１与ＧＤ１ｂ相对百分比明显降低；神经节苷脂ＧＴ相对组分百分比明显上升，神经节苷脂ＧＤ１ａ，还没发现有统计学差异．结果提示脑组织中神经节苷脂可能参与急性重复缺氧小鼠的耐缺氧能力的形成，而且是一个短时间内不能恢复的过程．

微波辐照对鼠脑MDA、NOS含量和LDH活性的影响

为研究手机微波对小鼠脑是否有损害 ,选用 4种不同频率和不同发射功率的微波照射小鼠 ,用TBA比色法、二硝基苯肼显色法 (DNPH显色法 )和吩嗪二甲脂比色法 (PMS显色法 )检测小鼠脑组织中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶 (LDH)和一氧化氮合酶 (NOS)。统计学分析显示 :2 45 0MHz微波辐射后MDA含量升高 (P <0 .0 0 1 ) ,LDH活性降低 (P <0 .0 5 ) ,NOS不变 (P >0 .0 5 ) ;870、45 0和 45MHz微波分别辐照后 ,MDA含量和LDH活性均变化不大 (P >0 .0 5 )。提示 :在强辐照条件下 (2 45 0MHz) ,微波通过使脑中自由基产生过量参与脑损伤 ;而在手机弱辐照条件下 (870、45 0、45MHz) ,微波辐照对脑基本无损伤 。

方剂槲芪散及君药槲寄生提取物对人肝癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨方剂槲芪散(HQS)及其君药槲寄生提取物多糖和总碱对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用及细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度的影响.方法：采用MTT法测定药物槲芪散(0.3125,0.625,1.25g/L),槲寄生多糖(0.625,1.25,2.5,5g/L)及槲寄生总碱(3,6,12g/L)作用48,72及96h对细胞(密度1×10\+8/L)增殖的体外抑制作用；利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡；利用激光共聚焦显微镜测定细胞内活性氧浓度.结果：MTT结果显示HOS及槲寄生提取物有较好的抑制肿瘤细胞增殖的作用,呈现出时间.剂量依赖性,高剂量组除了HOS和槲寄生总碱48h时间点外,A值均较对照组明显降低(HOS72h：1.022±0.13 vs 1.207±0.04,P＜0.01：96h：1.235±0.20 vs 1.602±0.05,P＜0.01；槲寄生多糖48h：0.570±0.03 vs 0.744±0.01,P＜0.01；72h：0.803±0.04 vs 1.207±0.04,P＜0.01：96h：0.860±0.13 vs 1.602±0.05,P＜0.01；槲寄生总碱72h：0.919±0.14 vs 1.233±0.04,P＜0.01；96h：0.701±0.07 vs 1.819±0.04,P＜0.01).流式细胞仪检测发现,与对照组相比,经药物作用72h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加(81.0%,86.9% vs 70.0%,P＜0.01),S期(5.9%,7.4% vs 13,5%,P＜0.01)和G2期(13.1%,5.7% vs 16.4%,P＜0.01)比例降低,HOS组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低(1.5% vs 13.5%,P＜0.01),G2期比例增加(28.2% vs 16.4%,P＜0.01)；三者均使细胞凋亡增加(HQS：14.8% vs 6.0%,P＜0.01；槲寄生多糖：11.7% vs 6.0%,P<0.01；总碱：6.7% vs 6.0%,P＜0.05).激光共聚焦显微镜检测发现,当细胞内荧光强度呈现不断升高趋势时,加入3种药物后,荧光强度瞬间下降,然后稳定在一低水平,未见明显波动.当荧光开始稳定在一基线时,加入槲寄生总碱,荧光强度陡然增强后又迅速下降到低水平,并维持一段时间,而加入HQS及槲寄生多糖未见此变化.结论：HQS、槲寄生多糖和总碱均能抑制肝癌细胞增殖并促进凋亡.

反复低氧对小鼠脑内神经肽Y免疫反应活性的影响

目的 :观察反复低氧对小鼠脑内神经肽Y(NPY)免疫反应活性的影响。方法 :昆明小鼠 4 0只随机分为对照组、低氧 1次 (H1)组、低氧 2次 (H2 )组、低氧 3次 (H3)组和低氧 4次 (H4)组。对低氧各组动物分别行不同次数的反复低氧。各组动物脑内NPY的免疫反应活性采用放射免疫测定法测定。结果 :小鼠对低氧的标准耐受时间随反复低氧次数的增加而显著增加。经 1次低氧和 2次低氧后小鼠脑内NPY的免疫反应活性明显提高 ,分别为正常对照组的 14 5 5 %± 3 2 %和 14 7 3 %± 2 5 % (P <0 0 1) ;而低氧 3次后则降到正常对照水平。结论 :反复低氧通过预适应能显著提高小鼠对低氧的耐受性 ,并可诱导小鼠脑内NPY免疫反应活性在预适应形成的早期一过性地上升。

槲芪散及其君药槲寄生提取物抑制人肝癌细胞生长的机制研究

目的:探讨槲芪散(HQS)及其君药槲寄生提取物多糖、总碱对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用与细胞内游离钙离子浓度的影响。方法:采用MTT法测定对细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡;利用激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度。结果:流式细胞仪检测发现,经药物作用48h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加,S期和G2期比例降低,HQS组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低,G2期比例增加,三者均使细胞凋亡增加。激光共聚焦显微镜检测发现,加入不同浓度的HQS、槲寄生多糖及总碱,低浓度时荧光增强不明显,而高浓度均导致细胞内荧光强度瞬间增强,升高到一定水平后,基本持续维持在一高水平,除槲寄生总碱组有略微下降外,其余两组未见明显下降趋势。结论:HQS、槲寄生多糖和总碱均能抑制肿瘤细胞增殖,促进凋亡,并且初步认为药物引起胞内钙超载可能是三者诱导SMMC-7721凋亡的机制之一。

人酪氨酸羟化酶全长及催化结构域序列表达产物酶活性比较

采用人的全长酪氨酸羟化酶 c DNA为模板 ,设计特定的引物进行 PCR扩增反应 ,获得编码 N-端缺失 14 1个氨基酸的催化结构域 c DNA片段 ,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体 p GEX-4 T-1中 ,构建表达质粒 p GEXTHc,同时构建其全长片段的表达质粒 p GEXTHa。两者分别转化大肠杆菌 BL2 1,以 IPTG诱导可高效表达 ,产物以可溶形式存在 ,经亲和层析纯化后以蛋白酶裂解 ,再经亲和层析分离得到较纯的酶蛋白 ,采用高效液相色谱法 ( HPLC-ECD)检测酶活性 ,结果证明催化结构域活性高于全酶 ,是全酶活性的 2 .

间隔低氧适应与神经细胞过氧化损伤

为研究间隔重复低氧对神经细胞膜功能的影响 ,观察重复缺氧小鼠血和组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)和脑细胞膜神经节苷脂 (Gls)的变化。发现间隔重复低氧小鼠组织中GSHpx比活性下降 (P <0 .0 1 ) ;但经多次重复后 ,GSHpx比活性回升趋势明显 (P <0 .0 1 )。此种改变与血液中GSHpx的变化不同 ,表明在间隔重复低氧时 ,脑组织细胞产生了间隔低氧适应。与此同时 ,富集于脑细胞膜上的Gls含量持续下降 (P <0 .0 1 ) ,表明有机过氧化自由基使膜脂类过氧化延续。提示 :间隔重复低氧对神经细胞膜功能的影响 ,不会因间隔低氧适应即告终止 。

小鼠急性重复缺氧对脑神经节苷脂的影响

利用重复缺氧的方法，研究小鼠间歇性低氧适应和神经节苷脂（Ｇｌｓ）的作用。发现：在小鼠急性缺氧时，血液和脑组织中的谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨｐｘ）活性明显下降（Ｐ＜０．０１）；脑组织中的ＧＳＨｐｘ活性在急性重复缺氧时较１次缺氧时升高（Ｐ＜０．０５）；脑组织的Ｇｌｓ含量明显下降（Ｐ＜０．０１）。提示Ｇｌｓ和ＧＳＨｐｘ有相同的抗自由基活性。急性重复性缺氧时Ｇｌｓ下降，去甲肾上腺素（ＮＥ）也下降（Ｐ＜０．０１），不同于持续性低氧的表现。推测脑细胞β受体腺苷酸环化酶系统在急性重复缺氧时未受严重伤害，Ｇｌｓ和缺氧、缺氧保护有关。

神经节苷脂类抑制BT325细胞系的生长

应用自提的神经节苷脂GM 3,牛脑神经节苷脂 (bovinebraingangliosides,BBG)加入低血清培养的人多形成胶质细胞瘤BT32 5细胞中观察其对该细胞系的影响 ;以及GM3、BBG对表皮生长因子(EGF)刺激该细胞系生长的拮抗作用 .结果表明GM3、BBG均能抑制BT32 5细胞生长 ,GM 3的抑制作用远高于BBG ,其抑制率为 60 2 8% (P <0 0 1 ) ,BBG为 1 9 33% ,在含不同浓度的EGF培养液中分别加入GM3、BBG均可拮抗EGF对BT32 5生长的刺激作用 ,GM3的拮抗作用远高于BBG .

毛细管电泳技术分离哺乳动物脑组织中神经节苷脂

利用毛细管电泳（ｃａｐｉｌｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＣＥ）分离猪脑、鼠脑组织中主要几种神经节苷脂ＧＭ_１、ＧＤ_（１ａ）、ＧＤ_（１ｂ）、ＧＴ_（１ｂ），在缓冲液中加入α－环状糊精（α－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ，α－ＣＤ）来提高分离的选择性和效率，并对缓冲液的ｐＨ值、α－ＣＤ浓度和电压等变化因素进行研究。结果表明在含１５．０ｍｍｏｌ／Ｌα－环状糊精的２．５ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸级冲液（ｐＨ８．６）中，电压为２５ｋＶ时能很好的分离生物样品。从猪脑提取物中分离出ＧＭ_３、ＧＭ_１、ＧＤ_（１ａ）、ＧＤ_（１ｂ）、ＧＴ_（１ｂ）和含唾液酸的其他糖脂类物质，鼠脑中分离出ＧＭ_１、ＧＤ_（１ａ）和ＧＴ_（１ｂ），说明毛细管电泳可用于分离神经节苷脂，具有快速、简便、节约等特点。

微波辐照对小鼠脑乳酸脱氢酶和一氧化氮合酶活性及丙二醛含量的影响(英文)

背景:研究手机微波是否对人体健康有潜在危害已成为热点问题。目的:观察不同频率和不同发射功率的微波照射对小鼠脑丙二醛含量、乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)和一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)活性的影响。设计:随机对照的实验研究。地点和对象:实验地点:首都医科大学动物科学部。按随机数字表法将50只无特定病原体(SPF)C57BL/6N小鼠分为正常对照组和45MHz组(新式手机组):照射功率20mW/cm2,照射时间12h/d;450MHz组(老式手机组):照射功率100mW/cm2,照射时间6h/d;870MHz组(无绳电话组):照射功率100mW/cm2,照射时间6h/d;2450MHz(强微波组):照射功率730mW/cm2,照射时间2s/次,3次/d。每组10只。干预:采用不同辐照强度的微波照射3个月后颈椎脱臼处死,用硫代巴比妥酸(TBA)比色法、二硝基苯肼显色法(DNPH比色法)和吩嗪二甲脂比色法(PMS显色法)分别检测小鼠脑组织中脂质过氧化产物-丙二醛含量、LDH和NOS活性。主要观察指标:①强微波辐照时小鼠脑中丙二醛含量、LDH和NOS的活性。②弱微波辐照时小鼠脑中丙二醛含量和LDH的活性。结果:2450MHz强微波辐射后,丙二醛含量犤(29.571±3.888)μmol/g犦升高,与对照组犤(21.660±2.729)μmol/g犦比较,差异有统计学意义(Z=1.789,P<0.01),LDH和NOS活性犤(17.

间羟苯甲酸4－羟化酶纯化及部分性质研究

经超声破碎、硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤、磷酸钙胶层析和离子交换层析等步骤，从Ｃｏｍａｍｏｎａｓｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉ菌株中获得了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ单一条带，相对分子质量为６２×１０３的间羟苯甲酸４－羟化酶比活提高２１倍，产率为３０％此酶为ＦＡＤ加单氧酶，催化间羟苯甲酸转变为３。

高压氧对大鼠短暂全脑缺血半胱天冬酶-3的影响

为探讨高压氧 (HBO)对脑缺血半胱天冬酶 3 (简称caspase 3 )活性的影响 ,将 2 0 0～ 2 5 0 gSD大鼠分为缺血再灌注组 (I/R组 )、高压氧 (HBO)处理组及假手术组 ,以Pulsinelli等报道的四动脉阻断法建立脑缺血再灌注动物模型 ,缺血 2 0min,分别于再灌注 6、2 4、4 8及 96h取顶叶皮质匀浆 ,用显色法测定caspase 3活性。结果显示 :再灌注 6h ,HBO组及I/R组同假手术组相比 ,caspase 3活性无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,但HBO显著高于I/R组 (P <0 .0 5 ) ;2 4h时间点HBO组及I/R组均高于假手术组 (P <0 .0 5 ) ,但前 2组之间无显著差异 ;4 8及 96h时间点HBO及I/R组虽高于假手术组 ,但差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ,且此 2组间亦无显著差异 ,说明此时caspase 3已基本降至正常。提示全脑短暂性缺血再灌注后caspase 3被激活 ,缺血早期用HBO处理可促进其活化 。