理血解毒类方对寻常型银屑病患者外周血血管内皮生长因子水平的影响

目的观察不同证型银屑病患者血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平的差异及理血解毒类方对银屑病患者血清VEGF的调节作用,探讨银屑病的病机基础及中医药作用机制。方法采用酶联免疫吸附法检测105例寻常型银屑病(血热型、血燥型、血瘀型)患者口服凉血解毒汤、养血解毒汤和活血解毒汤前后血清VEGF水平。结果银屑病组患者治疗前血清VEGF水平较正常对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),治疗前血热型银屑病组患者血清VEGF显著高于血燥型组,差异有统计学意义(P<0.05);与血瘀型组相比差异无统计学意义;血燥型银屑病组患者与血瘀型组患者相比血清VEGF差异亦无统计学意义。与治疗前比较,血热型和血燥型银屑病组经中药治疗后血清VEGF均明显降低(P<0.05),血瘀型银屑病组患者经中药治疗后血清VEGF与治疗前相比较差异无统计学意义。结论VEGF的变化与银屑病之间具有疾病特异性,而证候及发展阶段的特异性不明显。抑制血管新生可能是凉血解毒方、养血解毒方治疗血热型和血燥型银屑病的机制之一。

凉血活血胶囊对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损的干预作用

目的:观察凉血活血胶囊对咪喹莫特诱导银屑病样小鼠模型中免疫异常的干预作用。方法:BALB/c雌性小鼠48只,随机分为正常对照组,模型组,凉血活血胶囊高、中、低剂量组和雷公藤多苷组。采用银屑病皮损面积和疾病严重程度(psoriasis area and severity index,PASI)评分标准观察银屑病样小鼠模型皮损变化情况。光镜下观察皮损组织形态学变化,测量表皮层厚度。免疫组织化学法检测皮损中增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear antigen,PCNA)反映表皮角质形成细胞增殖程度;检测CD3、CD11c、F4/80和Gr-1反映炎症浸润程度;检测CD31以反映血管增生情况。结果:模型组小鼠皮肤出现鳞屑红斑,皮损增厚;皮损组织表现为表皮棘层增厚,角化不全和微脓肿;真皮大量炎症细胞浸润,血管增生明显。与模型组比较,凉血活血胶囊组小鼠银屑病样皮损症状缓解,PASI分数降低,表皮角化不全减轻,角质形成增殖减少,T淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和单核细胞的浸润减弱,新生血管减少。结论:凉血活血胶囊可通过影响表皮细胞过度增殖、角化不全、炎症细胞浸润及血管增生而改善咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损变化。

凉血解毒方对JurkatT淋巴细胞增生、活化及细胞因子分泌的影响

目的研究凉血解毒方含药血清对模拟银屑病病理状态的T淋巴细胞增生、活化及释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为阐明凉血解毒类中药治疗银屑病血热证的作用机制和临床治疗提供实验依据。方法选用Jurkat E6-1T淋巴细胞株为研究材料,以不同剂量的凉血活血胶囊药物粉末灌服大鼠,制备大鼠含药血清。将含药血清预先与细胞孵育3h,用多克隆刺激剂佛波醇酯(phorbol12,13-dibutyrate,PDB)活化T淋巴细胞。采用CCK-8比色法检测含药血清对活化及正常的T淋巴细胞增生的影响;采用流式细胞术观察药物对T淋巴细胞早期活化标志分子CD69表达的影响;采用酶联免疫夹心法(ELISA)检测药物对T淋巴细胞所释放TNF-α含量的影响。结果低、中、高3种剂量的凉血解毒方含药血清均可使活化的T淋巴细胞数量明显下降,且排除药物毒性作用。不同剂量的药物均可显著降低T淋巴细胞早期活化标志分子CD69的表达,不同浓度的药物均可抑制T细胞分泌TNF-α。结论临床用于治疗银屑病的常用有效方剂凉血解毒方能显著抑制T淋巴细胞增生、活化及炎性反应细胞因子的释放。

朱红膏对脂多糖刺激人单核细胞系THP-1细胞分泌细胞因子和黏附分子的影响

目的探究朱红膏对脂多糖（ lipopolysaccharide, LPS）刺激的人单核细胞系（human acute monocytic leukemia cell line，THP-1）分泌人白细胞介素-1p（ interleukin-1 beta，IL-1β）、人可溶性细胞间黏附分子-1 （soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1）、人白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）和人单核细胞趋化蛋白-1（ monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1 ）的影响，探讨其促进皮肤创伤愈合的机制。方法用细胞计数试剂盒（cellcountingkit-8，CCK-8）检测朱红膏对THP-1细胞活力的影响，用酶联免疫吸附法检测朱红膏对LPS刺激的THP-1表达IL-1β、sICAM-1、IL-8和MCP-1的影响。结果朱红膏和LPS共同作用THP-1细胞24h后，朱红膏在汞含量4．2-8．4mg／kg时可抑制THP-1细胞表达MCP-1（P〈0．01，P〈0．05）；在汞含量2．1mg／kg时可抑制THP-1细胞分泌IL-1β（P〈0．05）；在汞含量2．1-8．4mg／kg时可抑制IL-8的分泌（P〈0．01，P〈0．05），而对分泌sICAM-1的影响差异无统计学意义。结论朱红膏通过降低LPS诱导的THP-1表达IL-1β、IL-8和MCP-1，从而抑制过度的炎性反应来促进慢性创面愈合。

凉血活血胶囊含药血清对微血管异常生成的影响

目的观察临床治疗银屑病的经验方凉血活血胶囊含药血清对微血管异常生成的作用,探讨其治疗银屑病的作用机制。方法以鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)为模型观察凉血活血胶囊含药血清对血管生成的影响;采用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导的人真皮微血管内皮细胞株(human dermal microvascular endothelial cells,HDMEC)异常增生模型,以cck-8比色法测定凉血活血胶囊含药血清对其增生的影响;采用transwell细胞迁移、体外管腔形成方法观察凉血活血胶囊含药血清对HDMEC迁移及管腔形成能力的影响。结果与相同浓度的空白血清组相比,5%、10%、15%的凉血活血胶囊含药血清均在不同程度上抑制CAM血管新生(分别P<0.05,P<0.01);对HDMEC增生也表现出一定的抑制作用(分别P<0.05,P<0.01);均可抑制HDMEC的迁移(P<0.01);并可显著抑制HDMEC的管腔形成(P<0.01)。结论凉血活血胶囊含药血清可抑制CAM血管新生、对异常HDMEC的增生、迁移、微血管管腔形成均有抑制作用,提示凉血活血胶囊作用于血管异常生成环节,可能是临床治疗银屑病的作用机制之一。

凉血活血胶囊含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

目的探讨凉血活血胶囊含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管抑制作用的机制。方法在8日龄鸡胚CAM上植入凉血活血胶囊空白血清、含药血清,以及生理盐水、不完全1640制备的明胶海绵药膜,孵化72h。解剖显微镜下放大10倍计数给药组和对照组载体周围5mm范围内的大、中、细小血管数目,观察药物对CAM血管新生的影响。结果CAM正常状态的血管呈非特异性的贯穿、包绕、叶脉样、平行生长。解剖显微镜下放大10倍计数载体周围5mm范围内的大、中、细小血管数目。实验结果显示:不同浓度的给药组均出现无血管区或血管断裂现象,与生理盐水组、不完全1640组比较差异有统计学意义(分别P<0.01);凉血活血胶囊含药血清对CAM大血管生成未显示明显抑制作用(分别P>0.05);但3个浓度对CAM中血管均有一定的抑制作用(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01);对CAM细小血管均有明显的抑制作用(分别P<0.01);不同浓度给药组总血管数与其相应浓度空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论凉血活血胶囊含药血清对CAM血管新生有显著的抑制作用。

凉血活血胶囊全方及拆方对Jurkat T淋巴细胞增殖、活化及释放细胞因子的影响

目的:对比性观察银屑病有效方剂凉血活血胶囊中凉血药、解毒药及全方含药血清对模拟银屑病病理状态的T淋巴细胞增殖、活化及释放细胞因子的调节作用,探讨配伍的科学基础。方法:选用Jurkat E6-1 T淋巴细胞株为研究对象,以多克隆刺激剂佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)和离子霉素(ionomycin,Iono)刺激活化细胞株体外模拟银屑病的关键病理环节。根据组方规律将凉血活血胶囊方中的药物拆分为凉血药(白茅根、紫草根、茜草根、赤芍、生地)和解毒药(板蓝根、紫草根、熟大黄、羚羊角粉)两部分,采用血清药理学的方法将全方及凉血、解毒组分中药制备成含药血清作用于活化的T淋巴细胞。采用CCK-8比色法检测含药血清对活化及正常的T淋巴细胞增殖的影响;采用流式细胞术观察药物对T淋巴细胞早期活化标志分子CD69表达的影响;采用酶联免疫夹心法(ELISA)检测药物对T淋巴细胞所释放Th1类细胞因子含量的影响。结果:凉血活血胶囊全方及凉血、解毒组分的含药血清均可显著降低活化的T淋巴细胞的活性,明显抑制细胞表面活化分子CD69的表达,并有效下调干扰素-γ(IFN-γ),白介素-2(IL-2),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌。组间比较发现,全方组总体药效优于各拆方组,尤其在抑制细胞活性和降低TNF-α分泌上表现突出。解毒组除在调节IL-2,TNF-α分泌上作用与凉血组相当外,其余各项药效均优于凉血组;尤其是在对细胞活性及IFN-γ分泌的抑制作用方面,解毒组可接近全方的作用效果。结论:凉血活血胶囊及其凉血、解毒组分均可抑制T淋巴细胞增殖、活化和释放细胞因子,且全方作用优于凉血、解毒拆方,提示银屑病"热"、"毒"并存,临床治疗凉血、解毒不可分割。