酒精性肝病患者脂代谢相关差异蛋白的定量分析

目的应用串联质谱标记(TMT)技术筛选和鉴定酒精性肝病(ALD)患者肝脏组织中的差异蛋白,对脂代谢相关蛋白和通路进行分析,探索其功能及生物学过程。方法收集符合纳入标准的肝脏组织,筛选出酒精性肝硬化患者样本8例,正常对照组样本3例。采用TMT技术筛选差异蛋白并进行富集信号通路分析和蛋白质网络互作分析,探索其参与的生物学过程。结果蛋白质组学分析鉴定出2组资料中有2741种差异蛋白具有统计学意义(P<0.05),以P<0.05且|log2(foldchange)|>1的标准筛选出差异表达蛋白106种,与对照组相比,ALD组上调蛋白12种,下调蛋白94种。其中,与脂代谢相关的上调差异蛋白有2种,下调差异蛋白有14种。生物信息学分析结果显示这些蛋白在脂代谢中主要参与了脂质转运,脂肪酶活性的调节,脂肪酸结合以及胆固醇代谢等生物学过程,并与过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路、胆固醇代谢、甘油三酯代谢及脂肪细胞内脂解的调节等脂代谢相关信号通路密切相关。结论16种脂代谢相关差异蛋白可能是ALD发病机制中的关键蛋白。

GPC3在癌症免疫治疗及诊断中的意义

肝细胞癌（ HCC ）是全球最常见的恶性肿瘤之一，我国每年约11万人死于肝癌，占全世界肝癌死亡人数的45％。免疫治疗因其靶向性好，副作用少而广受关注，而鉴定一个有效的分子靶点则是肿瘤免疫治疗的关键。在此，我们将讨论磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（ GPC3）的结构、功能和生物学特点，并将其作为癌症免疫疗法中药物作用靶点的潜能为讨论重点，研究其在人类癌症治疗中的作用。

细胞自噬对肝脏疾病代谢的调节作用研究进展

细胞自噬参与到多种肝脏代谢中,为饥饿的细胞提供氨基酸、游离脂肪酸和葡萄糖,用于新的大分子的能源生产和合成,同时自噬还控制着线粒体等细胞器的质量和数量。肝脏作为机体重要的代谢器官,细胞自噬的多种特异性变异是维持肝脏稳态的关键,不同的肝脏疾病会引起蛋白质、脂肪、糖三大营养物质的代谢变化。调节细胞自噬的药物,可以通过增强或者减少细胞自噬,从而使肝脏疾病时三大营养物质的代谢增强或减弱,为肝脏疾病的治疗开创新的途径。

糖原合成酶激酶3β在乙型重型肝炎肝衰竭中的作用研究

目的探讨细胞内信号分子糖原合成酶激酶（GSK）30在HBV引起的重型肝炎肝衰竭发生过程中的作用。方法收集2009年至2011年北京佑安医院就诊患者中慢性乙型肝炎患者（12例，慢乙型肝炎患者组）和HBV感染引起的重型肝炎肝衰竭患者（12例，乙型重型肝炎肝衰竭组）以及正常人（8例，对照组）的肝组织资料，进行各项临床检测指标的统计分析，用细胞裂解液匀浆提取蛋白，用GSK3D活性测定试剂盒检测肝组织中GSK3D活性，用Westernblot方法检测p-GSK3、GSK3、β-肌动蛋白的表达；制备石蜡切片进行免疫荧光检测。用LSD-t检验进行组间比较，P〈0．05为差异有统计学意义。结果Westernblot结果显示，与对照组相比，慢性乙型肝炎患者组GSK3β第9位丝氨酸磷酸化程度上升，活性下降，重型肝炎肝衰竭患者组GSK3β第9位丝氨酸磷酸化程度显著下降，即GSK3β活性显著上升（P=0．0342）；同时，免疫荧光方法对各组样本进行检测结果显示乙型重型肝炎肝衰竭组GSK3D磷酸化水平显著下降，证明其活性明显增高；最后，GSK3D活性检测试剂盒进行GSK3β活性检测，与Westernblot和免疫荧光结果相一致，重型肝炎肝衰竭患者中GSK3β涪性显著增加，与对照组相比，P=0．0289。结论GSK3活性在重型肝炎肝衰竭发生过程中被激活，因此其是重型肝炎肝衰竭发病机制中的一种重要信号分子，抑制其活性可能在重型肝炎肝衰竭的预防和治疗中发挥一定的作用。

内质网应激在乙型重型肝炎(肝衰竭)中的作用研究

目的探讨内质网应激在乙型肝炎病毒(HBV)感染后引发的重型肝炎(肝衰竭)(重型肝炎肝衰竭)过程中的作用及其相关机制。方法收集2009—2011年首都医科大学附属北京佑安医院就诊患者中慢性乙型肝炎患者(12例,慢性乙型肝炎患者组)和HBV感染所引发的重型肝炎肝衰竭患者(12例,乙型重型肝炎肝衰竭组)以及正常人(8名,对照组)的肝组织标本和临床资料。对各组临床检测指标进行统计分析;选用透射电镜对肝组织内质网结构进行观察;用蛋白质印迹法和qRT-PCR检测内质网应激和凋亡相关因子葡萄糖调节蛋白(Grp)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)等的表达;制备冰冻切片进行免疫荧光检测。所有数据以均数±标准差(±s)表示,用LSD-t检验进行组间比较,P<0.05为差异有统计学意义。结果透射电镜检测结果表明,慢性乙型肝炎组和重型肝炎肝衰竭组内质网形态结构均受到破坏,且重型肝炎肝衰竭组更为严重;蛋白质印迹法和qRT-PCR结果显示Grp78、Grp94、胱天蛋白酶4在正常组和慢性乙型肝炎组表达较高,蛋白相对表达量分别为1.20±0.13和0.78±0.11、0.90±0.06和0.11±0.01、0.15±0.02和0.22±0.04;在重型肝炎肝衰竭组表达减弱(蛋白相对表达量分别为0.01±0、0.01±0、0.11±0.02),且与正常组差异有统计学意义,P值均<0.05;而CHOP表达与免疫荧光结果一致,随着损伤的加重而增强。结论内质网应激在乙型肝炎重症化过程中失调:慢性乙型肝炎阶段引发轻度内质网应激,而在重型肝炎肝衰竭阶段引发重度内质网应激。因此,内质网应激在重型肝炎肝衰竭发病过程中起到重要而又复杂的作用。