自身免疫性肝病抗原抗体研究及临床意义

自身免疫性肝病(autoimmune liver disease,AILD)主要包括自身免疫性肝炎、原发性胆汁性胆管炎和原发性硬化性胆管炎。不同类型的AILD有不同特征的自身抗体谱,自身抗体不仅具有诊断价值,在发病机制、疾病分型、早期诊断甚至预后判断方面也有重要作用。本文就AILD抗原抗体研究进展及临床意义作一综述。

重视自身免疫性肝病的临床诊断和治疗

自身免疫性肝病（autoimmune liver disease,AILD）是一组由于肝脏免疫耐受机制失衡而导致的肝细胞或胆管上皮细胞慢性损伤性炎症,是肝损伤、肝硬化的常见原因之一。AILD通常包括自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis,AIH）、原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）、

Ⅰ型自身免疫性肝炎患者抗Ro52抗体的检测及临床意义

目的 探讨Ⅰ型自身免疫性肝炎患者抗Ro52抗体的临床意义.方法 采用免疫印记法检测54例Ⅰ型自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis,AIH）患者血清中的抗Ro52抗体,根据检测结果分为抗Ro52抗体阳性组与阴性组,并对两组检测结果及临床资料进行回顾性分析.结果 54例Ⅰ型AIH患者中,抗Ro52抗体阳性20例（37％）.抗Ro52抗体阳性组与阴性组Ⅰ型AIH患者的抗核抗体（ANA分布主要见于滴度1∶320～1∶1000）.20例抗Ro52抗体阳性患者中,5例（25％）抗可溶性肝原（抗SLA/LP）抗体阳性；12例（60％）同时抗Ro60阳性.抗Ro52抗体阳性组出现肝病相关并发症的比例高于阴性组,但差别无统计学意义（65％vs.38.2％;x2 =3.613,P＞0.05）.抗Ro52抗体阳性组合并肝外自身免疫性疾病的比例显著高于阴性组（x2 =4.290,P=0.038）.抗Ro52抗体阳性组IgG水平显著高于阴性组（t=3.014,P=0.04）.结论 抗Ro52抗体阳性可提示AIH患者伴发肝内或肝外并发症几率升高；抗Ro52抗体可能与IgG共同作用,参与Ⅰ型AIH的发病.

自身免疫性肝病诊断思路

自身免疫性肝病是机体自身免疫耐受被打破,出现肝功能异常及相应症状、体征的一组疾病,包括肝细胞受累的自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis,AIH）和主要以肝内小胆管受累的原发性胆汁性肝硬化（primary billiary cirrhosis,PBC）和肝内外胆管受累的原发性硬化性胆管炎（primary sclerosing cholangitis,PSC）。3种疾病的共同特点是在肝脏出现病理性炎症损伤的同时,血液中伴有肝病相关的自身抗体。

第四届全国肝病免疫暨自身免疫性肝病进展研讨会会议纪要

第四届全国肝病免疫暨自身免疫性肝病进展研讨会于2011年11月11~14日在北京召开。本次会议由中国免疫学会临床免疫分会、中华医学会北京分会和首都医科大学附属北京佑安医院共同主办。北京大学医学部庄辉院士,中华医学会肝病学会主任委员、北京友谊医院贾继东教授,

第五届全国肝病免疫暨自身免疫性肝病进展研讨会会议纪要

第五届全国肝病免疫暨自身免疫性肝病进展研讨会于2012年11月2～4日在山东省青岛市召开。本次会议由中国免疫学会临床免疫分会、首都医科大学附属北京佑安医院共同主办,由青岛市传染病医院承办。17个省、直辖市从事肝病、消化、风湿病、检验及科研工作的200余位专家学者参加本次会议。研讨会特邀多位国内著名的肝病免疫和自身免疫性肝病方面的专家做了专题报告。

抗SSA和抗SSB抗体在肝病患者的检测及临床意义

目的探讨抗SSA、抗SSB在肝病患者的临床意义。方法对143例抗SSA和(或)抗SSB抗体阳性的肝病患者自身抗体的检出情况及其与疾病的关系进行回顾性分析。结果 143例患者中,126例(88.1%)单一抗SSA阳性,3例(2.1%)单一抗SSB阳性,14例(9.8%)抗SSA、抗SSB均阳性;抗SSA的阳性率显著高于抗SSB(掊2=143,P<0.05)。140例抗SSA阳性患者中,79例(56.4%)抗Ro52阳性,33例(23.6%)抗Ro60阳性,28例(20.0%)两者均阳性。本组患者中,126例(88.1%)抗核抗体(ANA)阳性,ANA滴度为1:320～1:1000和1:100的患者分别为102例(71.3%)、24例(16.8%),差异具有统计学意义(掊2=113.99,P<0.05);17例(11.9%)患者ANA阴性,且均为单一抗SSA阳性者。抗SSA、抗SSB阳性主要见于原发性胆汁性肝硬化(61例,42.7%)、药物性肝损害(22例,15.4%)、自身免疫性肝炎(20例,14.0%)、慢性丙型肝炎(20例,14.0%)和慢性乙型肝炎(15例,10.5%)。143例患者中,13例(9.1%)合并干燥综合征。结论抗SSA和(或)抗SSB不仅见于干燥综合征、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎等自身免疫性疾病中,还可见于药物性肝损害、病毒性肝炎等非自身免疫性疾病中,提示在肝病患者中出现抗SSA和(或)抗SSB抗体阳性时,应综合考虑其是否合并干燥综合征等结缔组织病,并密切随访,避免误诊漏诊。

3-磷酸甘油酸脱氢酶抗体对自身免疫性肝炎诊断意义评价

目的探讨3-磷酸甘油酸脱氢酶(D-3-phosphoglycerate dehydrogenase,PHGDH)抗体对自身免疫性肝炎诊断意义。方法选择在北京佑安医院诊治的自身免疫性肝炎(AIH)40例,原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者34例,伴抗核抗体阳性(ANA≥1∶320)慢性病毒性肝炎(乙型+丙型)患者43例,免疫印迹法检测各组血清中PHGDH抗体,分析PHGDH抗体与其他自身抗体出现特点,并采用掊2检验分析AIH组患者与其他组间PHGDH抗体阳性率差别。结果共完成117例的标本检测,PHGDH抗体阳性18例,其中AIH 40例中PHGDH抗体阳性12例,阳性率30.7%;34例PBC中,PHGHD抗体阳性3例,阳性率8.8%;慢性病毒性肝炎43例中PHGDH抗体阳性3例,阳性率6.9%。两组间差异有统计学意义(P=0.026),AIH组阳性率明显高于PBC组,AIH组与病毒性肝炎组比较差异有统计学意义(P=0.007)。AIH组阳性率明显高于病毒性肝炎组;12例PHGDH抗体阳性AIH患者伴随自身抗体中ANA滴度≥1∶1000 6例,1∶320 5例,1∶100 1例,伴平滑肌抗体(SMA)阳性5例,12例阳性患者均不伴SLA/LP抗体及肝肾微粒体(LKM-1)抗体。结论 3-磷酸甘油酸脱氢酶抗体在自身免疫性肝炎患者中检出率显著高于在PBC组和病毒性肝炎组,可能有助于AIH诊断。

免疫组库及高通量分析技术在原发性胆汁性胆管炎中的研究进展

原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种器官特异性自身免疫性肝脏疾病,发病机制尚不明确。T淋巴细胞受体(TCR)和B淋巴细胞受体(BCR)互补决定区3氨基酸组成和排列顺序呈现高度多样性,构成容量巨大的抗原识别受体库,即免疫组库。采用第二代测序技术结合多重PCR或扩增子救援多重PCR技术研究PBC患者免疫组库特征是近年的研究热点,目前发现PBC存在特异性CD4^+T淋巴细胞大量克隆扩增,B淋巴细胞克隆多样性、体细胞高频突变及类别转换现象明显减少,熊去氧胆酸治疗后克隆多样性增加。上述发现有待通过大范围体内和体外试验及不同的免疫组库研究策略进行验证。

原发性胆汁性胆管炎合并肝炎病毒感染患者的临床及预后特征

目的探讨原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者合并肝炎病毒感染的临床及预后特征。方法选取2004年10月-2012年10月北京佑安医院收治的确诊PBC合并肝炎病毒感染患者16例(7例合并慢性HBV感染,3例合并丙型肝炎,4例合并戊型肝炎,1例合并乙型肝炎和丙型肝炎,1例合并甲型肝炎),同时随机选择住院确诊无肝炎病毒感染的单纯PBC患者76例作为对照。比较两组患者临床特征、实验室指标、自身抗体结果,随访分析预后特征。正态分布计量资料两组间比较采用独立样本t检验,非正态分布计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验;计数资料组间比较采用χ~2检验或Fisher精确概率法。组间生存率比较采用Kaplan-Meier法作log-rank检验。结果 PBC合并肝炎病毒感染患者与单纯PBC患者比较,其女性患者比例、ALP、CHO、IgG水平偏低(χ~2=12.22,P=0.002;U=225.00,P<0.001;U=363.50,P=0.036;t=2.79,P=0.007);未出现腹壁静脉曲张、上消化道出血、肝性脑病症状;存在抗核抗体、抗平滑肌抗体、抗胃壁细胞抗体(APCA)、抗肝特异蛋白抗体、抗心肌抗体等多种自身抗体,APCA阳性率高于对照组(25.0%vs 3.9%,χ~2=5.608,P=0.016);随访时间中位数为49.5个月(2~312个月),PBC合并肝炎病毒感染患者不良事件阳性率明显低于单纯PBC患者(25.0%vs 64.5%,χ~2=8.43,P=0.005),两组患者的累积生存率和累积不良事件未发生率差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论 PBC合并肝炎病毒感染患者多数处于PBC早期,血清中存在非特异性自身抗体,目前未见肝炎病毒感染对PBC患者生存预后有影响。

药物性肝损害伴自身抗体阳性患者临床特征及转归

随着自身抗体检测技术的提高及临床医师对自身免疫性肝病认识程度的不断提高,肝功能异常伴自身抗体阳性特别是高滴度自身抗体阳性患者的诊断、鉴别诊断及治疗问题越来越受到临床医师的关注,因为自身抗体阳性虽是诊断自身免疫性肝病的主要条件之一,但在部分病毒性肝炎、药物性肝损害、

抗Ro-52抗体在自身免疫性肝病中的检测

目的探讨抗Ro-52抗体对自身免疫性肝病（autoimmune liver disease，AILD）的临床意义。方法对采用免疫印迹法检测抗Ro-52抗体的115例AILD患者的临床资料进行回顾性分析，比较抗Ro-52阳性和阴性AILD患者肝功和免疫学指标，对可能有相关性的血清学指标进行诊断试验一致性评价。结果抗Ro-52抗体在自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）（37例）、原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）（57例）、AIH／PBC重叠综合征组（21例）的阳性率分别为32．43％、24．56％、33．33％，差异无统计学意义（χ^2=0．949，P〉0．05）。抗可溶性肝抗原／肝胰抗原抗体（anti—soluble liver antigen／liver—pancreas，anti—SLA／LP）在抗Ro-52阳性AIH组频率（58．33％）高于阴性组（16．00％）（χ^2=6．955，P〈0．05），抗SLA／LP抗体在抗Ro-52阳性AIH／PBC重叠综合征组频率（85．71％）高于阴性组（28．57％）（χ^2=6．109，P〈0．05）。抗Ro-52抗体和抗SLA／LP抗体结果有一致性（κ=0．466，P〈0．05）。AIH／PBC重叠综合征组抗Ro-52阳性患者IgG水平高于阴性患者（t=2．508，P〈0．05）。结论抗Ro-52抗体在AIH、PBC和AIH／PBC重叠综合征中的分布没有差别；抗Ro-52抗体与抗SLA／LP抗体检测结果有一致性；抗Ro-52抗体阳性AIH／PBC重叠综合征患者IgG水平高于抗体阴性者。

ROC曲线对原发性胆汁性肝硬化患者预后诊断阈值的确定及意义

目的采用受试者工作特征（ROC）曲线确定原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者生存预后诊断阈值并评价其临床意义。方法以2001年10月至2009年9月北京佑安医院收治的155例确诊PBC患者为研究对象，进行随访，随访终点事件为死亡和（或）进行肝移植。对患者临床资料进行分析，符合正态分布的定量资料采用独立样本￡检验，偏态分布的定量资料采用Wilcoxon秩和检验；计数资料采用矿检验；偏态分布定量资料或分类变量资料采用Spearman秩相关分析法。采用ROC曲线确定预后诊断指标及阈值，采用Kaplan—Meier法进行组间生存率，评价临床意义。结果随访中位时间为50个月（6～316个月），36例患者出现终点事件（33例患者死亡，3例患者进行了肝移植）。年龄〉155岁、TBil〉1．8mg／dl、血清总IgG〉17．2g／L、Mayo评分（MRS）〉6．11对肝硬化阶段PBC患者具有预后诊断价值；4项指标作联合分析，串联的特异度可达99．18％，灵敏度为5．56％，总符合率为79．23％；并联时，其灵敏度可达100％，特异度为24．51％，总符合率为40．77％；对年龄≥55岁组，TBil〉1．8mg／dl组，IgG〉17．2g／L组。MRS〉6．11组分别与其对照组进行组问生存率比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论年龄≥55岁、TBil〉1．8mg／dl、IgG〉17．2g／L、MRS〉6．11可能对肝硬化阶段PBC患者生存预后具有预测价值。

抗延胡索酸水合酶抗体间接酶联免疫吸附试验法的建立及其对自身免疫性肝炎的诊断价值

目的 建立检测人血清抗-延胡索酸水合酶（FH）的间接ELISA法,并评价其在自身免疫性肝炎（AIH）临床诊断中的价值.方法 采用FH蛋白建立血清抗-FH的间接ELISA法,并对反应条件进行优化.应用建立的ELISA法检测88例AIH、56例PBC、50例慢性乙型肝炎（CHB）、36例慢性丙型肝炎（CHC）和98例健康志愿者（HC）血清中的抗-FH.统计学方法采用χ^2检验和Kruskal-WallisH法.结果 建立了检测人血清抗-FH的间接ELISA法,并确定了反应条件.抗-FH的血清检测结果,在AIH患者中抗-FH的阳性率为40％,显著高于健康志愿者（3％,χ^2=38.44,P＜0.01）、PBC组（7％,χ^2=18.45,P＜0.01）、CHB组（2％,χ^2=23.59,P＜0.01）和CHC组（6％,χ^2=14.29,P＜0.01）.抗-FH对AIH诊断的灵敏度为40％,特异度为94％.结论 采用ELISA法检测AIH血清中抗-FH可能提高AIH的诊断,该抗体可能是诊断AIH的新指标.

原发性胆汁性肝硬化患者肝硬化期外周血淋巴细胞计数及T细胞亚群检测与分析

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者肝硬化期外周血淋巴细胞总数及T细胞亚群的特点并分析影响因素及临床意义。方法对86例肝硬化期PBC患者的临床资料、实验诊断数据进行回顾性分析,比较40例代偿期和46例失代偿期PBC患者肝功、免疫学指标和外周血淋巴细胞亚群特点,对可能的影响因素进行相关性分析。结果失代偿期PBC患者年龄、血清总胆红素(TBil)水平、血清总IgA水平、Mayo评分高于代偿期患者(P<0.05),而ALT、ALB、外周血淋巴细胞绝对数(LYMPH)、淋巴细胞百分率(LYMPH%)、T淋巴细胞绝对数(CD3+)、T辅助细胞绝对数(CD3+CD4+)和T抑制细胞绝对数(CD3+CD8+)均低于代偿期患者(P<0.05);LYMPH、LYMPH%、CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+结果中,失代偿期减低者频率均高于代偿期(45.7%vs.10%,34.8%vs.7.5%,58.7%vs.17.5%,45.7%vs.5%,60.9%vs.27.5%,P<0.05),失代偿期增高者频率均低于代偿期(54.3%vs.90%,6.5%vs.27.5%,0 vs.20%,2.2%vs.22.5%,2.2%vs.10%,P<0.05)。在可能的影响因素中,年龄、Mayo评分、上消化道出血、脾大或脾切除、腹水等肝硬化失代偿表现对结果影响呈负相关;而ALT、ALB对结果影响呈正相关。结论随着肝硬化程度的加深,PBC患者外周血淋巴细胞总数及T细胞亚群数量降低;从淋巴细胞定量角度分析,随着疾病的进展,PBC患者免疫水平下降。

高通量测序对原发性胆汁性胆管炎患者个体水平外周血B细胞受体免疫球蛋白重链互补决定区3免疫组库特征的初步研究

目的分析原发性胆汁性胆管炎（PBC）患者个体水平外周血B细胞受体免疫球蛋白重链互补决定区3（IGH-CDR3）免疫组库特征，了解其免疫系统多样性的特点。方法采用扩增子救援多重PCR（arm-PCR）技术特异性扩增一例PBC患者外周血B细胞受体，即膜表面免疫球蛋白重链IGH-CDR3区核苷酸序列，通过第二代高通量测序技术进行测序，结合生物信息学分析其免疫组库特征。结果共测得序列数329219个，总CDR3序列为325540个，独特CDR3序列为72774个，D50为7．7；IGH-CDR3区长度主要为45个核苷酸（nt）（9．6％），N区添加的核苷酸数量频率最高的为13-14nt（5．25％），J基因片段末端去除的核昔酸数主要是0（12．7％）；V基因使用频率最高的前3个等位基因是V4-59（9．5％），其次为V3-23（8．1％）和V1-69（6．4％）。结论该PBC患者IGH-CDR3免疫组库多样性程度较低，存在个别克隆异常增殖情况，该特异性有待扩大样本量进一步验证。

抗乙醇脱氢酶抗体ELISA法的建立及其对自身免疫性肝炎诊断的价值

目的 建立血清抗乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase，ADH）抗体ELISA法，并评价抗-ADH在诊断自身免疫性肝炎（AIH）中的价值。方法用免疫印迹试验对酵母ADH与人血清抗-ADH之间的反应性进行验证。用酵母ADH建立检测血清抗-ADH的ELISA法。以67例AIH、94例原发性胆汁性肝硬化（PBC）、199例慢性乙型肝炎（CHB）、132例慢性丙型肝炎（CHC）、24例酒精性肝病（ALD）和99例结缔组织病（CTD）患者及31名健康对照者为研究对象，对其血清中的抗-ADH进行检测并统计其阳性率，阳性率的比较用X^2检验。结果建立了一种检测人血清抗-ADH的ELISA法，并确定了最佳反应条件；免疫印迹试验证实酵母ADH与人血清抗一ADH有良好反应性。AIH患者血清抗-ADH阳性率为59．7％（40／67），高于健康对照组（0，X^2=31．271，P〈0．05）、PBC组（6．4％，X^2=54．492，P〈0．05）、CHB组（14．1％，X^2=54．848，P〈0．05）、CHC组（21．2％，X^2=29．269，P〈0．05）、ALD组（25．0％X^2=8．512，P〈0．05）和CTD组（43．4％，X^2=4．229，P〈0．05）。结论AIH患者血清中抗-ADH阳性率高于其他肝病和某些自身免疫性疾病患者，可能对AIH有一定辅助诊断价值。

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体表达与调节性T细胞相关性分析

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体2、4、9(TLR2,TLR4,TLR9)表达及PBMC中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)特点和影响因素。方法采用流式细胞术检测PBC患者(52例)和健康对照者(22例)外周血PBMC中TLR2、4、9阳性细胞及Tregs比例,比较其在PBC患者和健康对照者中的差别并分析TLR与Tregs相关性。结果PBC患者Tregs比例低于健康对照者[(1.53±1.33)vs(4.42±1.43),P<0.0001],TLR4阳性细胞比例高于健康对照者[(36.95±3.53)vs(32.84±8.06),P=0.003];PBC患者Tregs比例与TLR9阳性细胞比例呈负相关(R2=0.115,P=0.016),健康对照者Tregs比例与TLR2,4和TLR2,4,9联合表达阳性细胞比例呈负相关(R2=0.326,P=0.007;R2=0.226,P=0.034)。结论 PBC患者外周血PBMC中Tregs比例降低,TLR4表达升高,可能受肝硬化失代偿期腹腔感染的影响。

原发性胆汁性肝硬化1例治疗体会

患者女,33岁,因皮肤瘙痒7年,伴乏力、尿黄3年,加重10d于2008年4月21日入院。患者于2001年7月开始间断出现皮肤瘙痒,未予重视。5年前因皮肤瘙痒加重在当地医院检查发现肝功能轻度异常（具体不详）,肝脏病毒学指标均阴性,未予明确诊断,间断服用保肝药物及中药治疗,肝功能仍轻度异常。2005年9月出现乏力、食欲减退。