轻中度睡眠呼吸障碍儿童疾病进展的风险因素分析

目的研究轻中度睡眠呼吸障碍(sleep-disordered breathing,SDB)包括原发鼾症(primary snoring,PS)和轻中度阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)患儿,在保守治疗情况下的自然转归及影响疾病进展的风险因素,为轻中度SDB患儿的治疗管理提供数据支持。方法选择于2017年1月~2018年12月北京儿童医院睡眠中心行多导睡眠监测(PSG)且阻塞性呼吸暂停低通气指数(OAHI)≤10次/h的3~14岁打鼾儿童。在纳入研究时及随访6个月时完成PSG检查,在纳入研究时、随访3个月、6个月及1年时完成儿童睡眠问卷-睡眠相关呼吸紊乱分量表(PSQ-SRBD)。监测PSG指标及临床症状的变化,并对影响疾病进展的相关因素进行分析。结果共有209例轻中度SDB患儿完成1年PSQ-SRBD的随访,随访过程中PSQSRBD分数逐渐降低。共55例(男43例,女12例)轻中度SDB患儿在随访6个月时返院复查PSG,纳入研究时,患儿平均年龄为(5.7±2.0)岁,PS组23例,轻度OSA组21例,中度OSA组11例。半年后PSG结果显示,PS组中34.8%(8/23)的患儿仍为PS,47.8%(11/23)进展为轻度OSA,17.4%(4/23)进展为中度OSA;轻度OSA组中,14.3%(3/21)进展为重度OSA;中度OSA组中,18.2%(2/11)进展为重度OSA。在PS组中,扁桃体肥大在疾病进展与非进展组中差异有统计学意义(P=0.04);在中度OSA组中,腺样体肥大在疾病进展与非进展组中差异有统计学意义(P=0.01)。结论约66.7%的PS患儿在随访6个月后进展为OSA,16%的轻中度OSA患儿进展为重度OSA。扁桃体肥大可能是PS患儿疾病进展的一个重要风险因素,应对学龄前期伴有扁桃体肥大、保守治疗的原发鼾症儿童定期监测,以发现疾病进展情况。

儿童总免疫球蛋白E和特异性免疫球蛋白E临床可报告范围建立的研究

目的建立儿童荧光酶联免疫分析法检测总免疫球蛋白E(tIgE)和特异性免疫球蛋白E(sIgE)的临床可报告范围。方法收集儿童tIgE和sIgE血清样本12例,参考中国合格评定国家认可委员会(CNAS)和美国临床实验室标准化协会(CLSI)相关文件,在荧光免疫分析仪上进行tIgE和sIgE的分析测量范围(AMR)验证试验,建立其临床可报告范围(CRR)。结果tIgE的AMR为3~4788kU/L,最大允许稀释倍数为50倍,CRR为3~239400kU/L。sIgE的AMR为0.01~92.97kUA/L,不能进行稀释,CRR为0.01~92.97kUA/L。结论儿童tIgE和sIgE临床可报告范围的建立,对于高值病例的动态监测和病例间比较有重要意义,tIgE能够满足临床需求。

TRPV4基因相关疾病的遗传学诊断与管理

TRPV4基因相关疾病是一类具有相同致病基因但表型高度异质的疾病。根据其症状可分为两组不同的疾病:神经肌肉病和骨骼发育不良。在分子病因明确之前,TRPV4基因相关疾病常被临床归类为多个相互独立的疾病。因此,基因检测对TRPV4基因相关疾病的诊断和管理具有重要意义。文章介绍了TRPV4基因特点、相关疾病的种类和特征、遗传学检测、基因型-表型关联性以及诊断后的管理,为TRPV4基因相关疾病的诊断和治疗提供思路。

荧光酶联免疫法和免疫印迹法检测过敏原特异性免疫球蛋白E一致性分析

目的 以荧光酶联免疫法的Immuno CAP系统为标准方法,探讨免疫印迹法的Allergy Screen系统的检验效能及在不同系统疾病诊疗中的临床应用价值。方法 收集2017年至2022年就诊于首都医科大学附属北京儿童医院过敏反应科的过敏原致敏患者血清样本4 525份,根据疾病类型分为呼吸系统疾病组、消化系统疾病组、多系统疾病组和其他系统疾病组。采用Allergy Screen系统检测血清中的户尘螨、粉尘螨、烟曲霉、猫毛、狗毛、豚草、艾蒿、葎草、鸡蛋、牛奶、蟹、虾过敏原sIgE。对Allergy Screen系统的检验效能、可靠性、级别一致性和不同疾病系统组的应用进行评价。结果 在检验效能上,Allergy Screen系统猫毛过敏原灵敏度最高为0.75,特异性为0.95。其次为蟹过敏原,灵敏度为0.57,特异性为0.89。Allergy Screen法检测各过敏原的Kappa值在0.122~0.866之间。豚草一致性好,Kappa值为0.866。Allergy Screen系统的Spearman相关分析结果显示,对粉尘螨、艾蒿、猫毛等级相关性均>0.7,关系非常紧密。其中粉尘螨相关性最佳,为0.757。Allergy Screen系统检测不同过敏原中,总体一致率为65.6%~90.3%,阴性符合率一致率为81.5%~97.9%,阳性一致率为9.1%~70.5%。在不同系统疾病组间检验效能比较,特异性在各系统组间差异无统计学意义。结论 Allergy Screen系统具有较高的诊断效能,适用于临床过敏原筛查检测。

富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2在神经母细胞瘤恶性进展中的功能和机制

目的:探究富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2(cysteine and glycine-rich protein 2,CSRP2)在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)恶性进展中的功能和作用机制。方法:利用R2数据库分析NB临床样本中CSRP2基因的mRNA水平与NB患儿临床预后的相关性;在NB细胞系SK-N-BE(2)和SH-SY5Y中利用靶向小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰CSRP2的表达或利用质粒转染过表达CSRP2;通过结晶紫染色和实时无标记动态细胞分析技术观察NB细胞的增殖情况;采用克隆形成方法观察NB细胞长时间的克隆形成能力;利用免疫荧光实验检测细胞增殖标记物Ki-67的水平;利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色流式细胞术分析细胞周期比例,Annexin V/7AAD染色分析细胞凋亡比例;采用划痕实验观察细胞的迁移能力;利用Western blot或实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测NB原发肿瘤组织和细胞系中蛋白和基因的表达水平。结果:NB临床数据库中,国际神经母细胞瘤分期(international neuroblastoma staging system,INSS)为高危险度3/4期的NB组织中CSRP2的mRNA水平显著高于低危险度的1/2期,且高表达水平组NB患儿的生存期显著低于低表达组;Western blot结果显示,CSRP2在3/4期NB组织中的蛋白水平显著高于1/2期。NB细胞中敲低CSRP2,细胞的活力减弱、增殖能力降低;NB细胞中过表达CSRP2促进细胞增殖;敲低CSRP2后,sub-G1、G0/G1和S期细胞的比例增加,Annexin V阳性细胞的比例增多;敲低CSRP2的NB细胞的划痕愈合率显著小于对照组。机制研究发现,敲低CSRP2后细胞增殖标记分子Ki-67和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)磷酸化水平显著低于对照组。结论:CSRP2在高危险度3/4期NB组织中高表达,表达水平与NB患儿生存期呈负相关;CSRP2通过促进ERK1/2活化,促进NB细胞的增殖和迁移,抑制细胞凋亡,表明CSRP2通过激活ERK1/2促进NB进展,为高危NB的靶向治疗提供了潜在的靶点。

TMEFF1对神经母细胞瘤细胞系增殖的调控

目的探究具有表皮生长因子结构域和两个卵泡抑素样结构域的跨膜蛋白1(TMEFF1/tomoregulin1)对神经母细胞瘤(NB)细胞系SN-K-BE(2)增殖和迁移的调控效应。方法RT-qPCR检测神经母细胞瘤细胞系SN-K-BE(2)、IMR32、SK-N-SH、SK-N-AS和正常细胞系MCF 10A、hTERT RPE-1中TMEFF1 mRNA表达量。利用小分子干扰RNA(siRNA)瞬时敲低MCF 10A、hTERT RPE-1细胞和SN-K-BE(2)NB细胞中TMEFF1表达,RT-qPCR检测TMEFF1 mRNA瞬时敲低效果后,结晶紫染色、实时无标记细胞分析(RTCA)检测细胞增殖;CellTiter-Glo(CTG)检测细胞活性。利用短发夹RNA(shRNA)稳定敲低正常细胞系和NB细胞系中TMEFF1表达,进一步通过集落形成实验、RTCA、CTG检测细胞增殖和活性,此外,通过免疫荧光检测Ki-67细胞阳性率,细胞划痕实验检测细胞迁移率。结果与正常细胞系相比,NB细胞系中TMEFF1 mRNA表达量显著较高(P<0.001)。敲低TMEFF1对正常细胞系增殖影响无统计学意义,但在SN-K-BE(2)细胞中敲低TMEFF1,RTCA和集落形成实验结果显示细胞增殖能力减弱(P<0.05),免疫荧光结果显示Ki-67阳性细胞率减少(P<0.001),CTG结果显示细胞活性降低(P<0.01),细胞划痕实验结果显示敲低组细胞迁移率显著低于对照组(P<0.01)。结论TMEFF1是一种特异在NB细胞中高表达的膜蛋白,TMEFF1敲低后不影响正常细胞系的增殖,但显著抑制NB细胞系的增殖、迁移,提示TMEFF1可能在NB发生发展中发挥重要作用,可能成为NB靶向治疗的潜在新靶点。

C12ORF66对MYCN扩增的高危神经母细胞瘤细胞的活性调控

目的探究12号染色体开放阅读框66(C12ORF66)对MYCN扩增神经母细胞瘤(NB)细胞系活性的调控效应。方法通过R2数据库GSE16476和GSE49710数据集,分析MYCN扩增和MYCN非扩增NB细胞中C12ORF66表达量,以及C12ORF66表达量与患儿预后的相关性。RT-qRCR检测正常组织永生化细胞系、MYCN扩增及MYCN非扩增细胞系中C12ORF66 mRNA表达差异。构建瞬时敲低和稳定敲低C12ORF66的MYCN扩增细胞株,对照组和敲低组细胞进行实时无标记动态细胞分析(RTCA)、集落形成能力检测及Ki67免疫荧光染色。结果R2数据库分析显示MYCN扩增NB患儿样本中C12ORF66表达显著高于MYCN非扩增NB患儿样本,并且C12ORF66表达与患儿预后负相关(P<0.05)。细胞实验表明,与MYCN非扩增细胞系CHLA-255和SH-SY5Y相比,C12ORF66在MYCN扩增细胞系BE(2)-C和SK-N-BE(2)中表达显著升高(P<0.001)。瞬时或稳定敲低C12ORF66,MYCN扩增NB细胞增殖显著减缓(P<0.001),集落形成能力显著降低(P<0.001),Ki67阳性细胞比例显著减少(P<0.05)。结论C12ORF66在MYCN扩增NB患儿样本和细胞系中高表达,且与患儿预后负相关,敲低C12ORF66显著抑制NB细胞活性。

儿童神经母细胞瘤相关性眼阵挛⁃肌阵挛⁃共济失调综合征的诊疗建议

眼阵挛⁃肌阵挛⁃共济失调综合征(OMAS)是一种罕见的神经系统疾病。该病常与神经母细胞瘤(NB)相关,我国儿童OMAS和NB分别由神经内科和肿瘤内、外科单独进行诊治。本组患儿中,NB通常预后良好,而OMAS易留有后遗症,但由于缺乏规范的诊治及随访,不利于患者疾病的控制。本文由多学科领域专家共同制订儿童NB相关性OMAS诊疗建议,从疾病的诊断、治疗、随访等方面进行阐述,希望通过对本组患儿的规范管理,改善患儿的预后。

MicroRNA与IgA肾病的研究进展

IgA肾病发病机制复杂,尚未完全了解。一些microRNA(miRNA)在IgA肾病患者中出现差异性的表达,提示可能参与IgA肾病的发病机制,作为新的非创伤性生物标志物,miRNA为诊断、预防以及改善IgA肾病预后提供了新的研究方向。

溶质载体家族7成员11对MYCN基因扩增高危神经母细胞瘤细胞增殖的影响

目的分析溶质载体家族7成员11(SLC7A11)在有无MYCN基因扩增的神经母细胞瘤(NB)细胞系和临床样本中的表达及其与患儿预后相关性,研究SLC7A11对MYCN扩增高危NB增殖的影响。方法利用GEO数据库GSE49710数据集、TARGET数据库和R2数据库GSE45547数据集分析NB临床样本中SLC7A11 mRNA水平与MYCN基因扩增状态和NB患儿预后相关性。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MYCN扩增NB细胞系SK-N-BE(2)和IMR32细胞以及MYCN非扩增NB细胞系CHLA-255和SH-SY5Y细胞中SLC7A11 mRNA水平。在MYCN扩增NB细胞系SK-N-BE(2)细胞中,利用2条不同序列小干扰RNA瞬时敲低SLC7A11 mRNA,应用RT-qPCR和Western印迹法检测SLC7A11 mRNA和SLC7A11表达及MYCN mRNA和N-MYC表达,采用结晶紫染色和实时无标记细胞分析(RTCA)技术观察NB细胞增殖情况。免疫荧光法检测增殖标记物Ki-67表达情况。利用短发夹RNA慢病毒感染方法构建稳定敲低SLC7A11的SK-N-BE(2)细胞,RT-qPCR和Western印迹法检测SLC7A11的稳定敲低效果和MYCN水平,采用克隆形成实验观察NB细胞克隆形成能力。结果分析NB临床样本GSE49710和GSE45547数据集发现,在MYCN扩增NB中,SLC7A11 mRNA水平显著高于非MYCN扩增NB(P<0.05,P<0.01),且TARGET数据库和R2数据库GSE45547数据集分析表明SLC7A11 mRNA水平与NB患儿生存率呈负相关(P<0.05,P<0.01)。SLC7A11在MYCN扩增NB细胞系SK-N-BE(2)和IMR32中的表达均显著高于非扩增细胞系CHLA-255和SH-SY5Y(P<0.01)。与对照敲低组相比,瞬时敲低SLC7A11导致MYCN扩增NB细胞增殖显著减慢(P<0.01),Ki-67阳性细胞比例明显减少(P<0.05);稳定敲低SLC7A11显著减少了NB细胞克隆形成数(P<0.01)。瞬时和稳定敲低SLC7A11对MYCN mRNA和N-MYC蛋白水平均未见明显影响。结论SLC7A11在MYCN扩增NB细胞系和临床样本中高表达,且其表达水平与患儿预后呈负相关,敲低SLC7A11显著抑制SK-N-BE(2)细胞的增殖和克隆形成能力。

2014—2020年儿童社区获得性肺炎中人副流感病毒感染的多中心研究

目的了解我国儿童社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)中人副流感病毒(human parainfluenza viruses,HPIVs)感染的流行病学特点及临床特征,为HPIVs感染诊疗和防控提供基础数据。方法2014年11月至2020年2月,在11个省和直辖市的14家医院纳入5448名CAP住院儿童,采集鼻咽抽吸物或咽拭子,使用液相悬浮芯片技术检测包括HPIV1-4型等18种呼吸道病毒核酸,收集人口学资料和临床信息进行统计学分析。结果5448例CAP住院患儿中HPIVs总检出率为8.83%(481/5448),男性检出率高于女性(62.79%v.s 37.21%,χ^(2)=0.000,P=0.992)。1~<3岁年龄组的HPIVs检出率较其它年龄组高,且差异有统计学意义(χ^(2)=61.893,P<0.001)。北方地区患儿的HPIVs检出率高于南方地区(9.02%v.s 8.65%),但差异无统计学意义(χ^(2)=0.239,P=0.625)。北方和南方地区儿童中HPIV1-4型流行特征不完全一致。HPIV1在北方和南方地区均主要为秋季流行;HPIV2在北方夏季流行,南方检出率较低;HPIV3在北方和南方春夏季是流行高峰,但南方比北方持续时间更长;HPIV4在北方和南方均主要为秋季流行。在481名HPIVs阳性患儿中,单纯HPIV感染病例占58.42%(281/481),临床表现主要以咳嗽(90.75%)和发热(68.68%)为主;合并另一种HPIV型或其它病毒感染的病例占42.62%(205/481),合并2种及以上病毒感染的病例占11.43%(55/481),HPIV3与其它病毒发生合并感染的检出率最高。47名HPIVs阳性的重症肺炎患儿中HPIV3感染占比最多(76.80%)。结论HPIVs是引起我国儿童CAP的重要病原体之一,3岁以下儿童是HPIVs感染的主要群体;各型HPIV在北方和南方地区儿童中的流行特征不完全相同;HPIV3是儿童呼吸道HPIVs感染和重症的主要型别。

蛋白磷酸酶1调节亚基14B对神经母细胞瘤细胞有丝分裂进程的调控作用

目的 研究蛋白磷酸酶1调节亚基14B(PPP1R14B)对神经母细胞瘤(NB)细胞有丝分裂进程的调控作用,为其治疗提供潜在新靶标。方法 在NB细胞SK-N-BE(2)-M17中转染2条不同序列小干扰RNA(siRNA)(PPP1R14B siRNA#1和#2)敲低PPP1R14B,实时定量PCR和Western印迹法检测PPP1R14B的敲低效果。在SK-N-BE(2)-M17 GFP-H2B细胞中转染PPP1R14B siRNA#1和#2,Time-lapse活细胞成像技术动态监测敲低PPP1R14B对该细胞有丝分裂进程的影响。采用酶切克隆法构建靶向PPP1R14B的2条不同序列短发夹RNA(shRNA)(sh PPP1R14B#1或#2)慢病毒质粒,并感染SK-N-BE(2)-M17细胞建立PPP1R14B稳定敲低细胞,Western印迹法检测其敲低效果,克隆形成实验观察敲低PPP1R14B对SK-N-BE(2)-M17细胞生长的影响。基于GEO数据库的临床数据,按NB不同临床分期分组,分析各组样本中PPP1R14B mRNA表达水平及其与预后的相关性。结果 与转染对照siRNA相比,转染PPP1R14B siRNA#1和#2均可有效敲低SK-N-BE(2)-M17细胞中PPP1R14B mRNA和蛋白表达(P<0.01)。Timelapse活细胞成像结果显示,与转染对照siRNA相比,转染PPP1R14B siRNA#1和#2组SK-N-BE(2)-M17GFP-H2B细胞有丝分裂期时间延长(P<0.05),且主要是有丝分裂前中期时间显著延长(P<0.01)。Western印迹法结果显示,与转染对照shRNA相比,转染sh PPP1R14B#1和#2均可有效敲低SK-N-BE(2)-M17细胞中PPP1R14B蛋白表达(P<0.01);克隆形成实验结果表明,转染sh PPP1R14B#1或#2稳定敲低组细胞克隆形成数亦明显降低(P<0.01)。GEO数据库分析显示,PPP1R14B mRNA表达水平与NB恶性程度呈正相关,与患者预后呈负相关。结论 敲低PPP1R14B导致SK-N-BE(2)-M17细胞有丝分裂期阻滞和生长减慢,PPP1R14B在NB发生发展中发挥重要作用。

存在出血风险患儿行腰椎穿刺术后3天内发生穿刺部位血肿的病例系列报告

目的 探讨存在出血风险患儿行腰椎穿刺(腰穿)术是否容易发生穿刺部位血肿.方法 回顾性收集首都医科大学附属北京儿童医院(我院)接受过腰穿且存在凝血功能异常(主要指有出血风险)的住院患儿的病历,排除入院至出院时间≤24 h病历,考察有出血风险时行腰穿术后3 d内是否发生穿刺部位血肿.出血风险综合指标包括:①有出血的症状和体征;②腰穿前3 d内接受过抗凝治疗、或输注过PLT或血浆;③PLT、纤维蛋白原(FIB)低于正常值下限,凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)、抗凝酶Ⅲ(AT-Ⅲ)活性和国际标准化比值(INR)高于上限.符合①或②,合并③为有出血风险.结果 2014年1月1日至2019年7月30日我院出院病历病案首页有腰穿记录并排除24 h出院病历,最终232例患儿370例次腰穿记录进入本文分析.232例患儿中,年龄4 h至17岁8个月,中位年龄为3岁.370例次腰穿中,以怀疑各种中枢神经系统感染性疾病(209例次,56.5%)和需要鞘内注射药物(142例次,38.4%)为主,无存在腰穿绝对禁忌证行腰穿病例.存在出血风险综合指标异常的患儿,即使有出血表现/抗凝药物和输注PLT史且实验室6项指标中任意指标指示出血风险[PLT 1~97(53±30)×109·L-1、PT 13~24.8(15.7±3.4)s、APTT 40.4~157.9(60.2±20.2)s、INR 1.21~2.11(1.53±0.34)、FIB 0.68~1.99(1.34±0.40)g·L-1、AT-Ⅲ130~158.6(144.3±11.7)%],行腰穿后3 d内穿刺部位均未发生血肿.结论 有出血表现、腰穿前抗凝或输血治疗、实验室出血指标异常儿童腰穿部位发生血肿风险极低.

女性CYBB突变嵌合体遗传致X连锁慢性肉芽肿病

慢性肉芽肿病(CGD)是一种罕见的原发性免疫缺陷病,临床主要表现为反复严重的细菌、真菌感染以及肉芽肿形成。诊断主要依据中性粒细胞功能检测和基因检测。CYBB基因突变导致的X连锁CGD(XL⁃CGD)是最常见的类型。本文报道了1例罕见的女性CYBB基因突变嵌合体遗传导致XL⁃CGD。先证者为一例7岁男性患儿,存在反复下呼吸道感染,生后接种卡介苗出现发热,局部皮肤出现疱疹。既往有左跟骨骨髓炎、肛周脓肿史。中性粒细胞呼吸爆发功能检测结果患儿%DHR+0.051%,母亲%DHR+76%,父亲%DHR+97%。外周血全外显子测序及Sanger测序验证发现患者CYBB基因8号外显子半合子突变,c.866G>A,p.W289X,家系验证结果显示该突变位点来源于母亲。外祖母无CYBB基因突变。母亲外周血和口腔黏膜细胞Sanger测序结果显示母亲变异峰值低,外周血CYBB基因高深度二代测序结果显示突变比率为19.5%,提示母亲为CYBB嵌合突变。本文在国内首次报道CYBB嵌合突变遗传导致XL⁃CGD,以丰富临床医生对该病的认识,并对该病的遗传咨询提供新思路。

免疫出生错误基于发病机制的精准治疗

精准医学是通过分析疾病发病机制寻找特异生物学标志物,并进行靶向治疗的学科。免疫出生错误是一类单基因突变导致的疾病,是研究免疫学机制的适宜人体模型。近年来随着科技日新月异,人类对免疫出生错误的临床表现型与基因型、基因型与特定靶点的认识越来越清楚,因此,为临床医务人员按照精准医学的原则诊断和治疗此类疾病提供了机遇。目前,针对免疫出生错误的精准治疗已有很多成功的范例,具有治疗疾病本质的优点。本文着重阐述了几类免疫出生错误病的精准治疗。

2017-2020年我国儿童急性下呼吸道感染住院病例中呼吸道合胞病毒的感染情况分析

目的了解我国儿童急性下呼吸道感染(ALRTI)住院病例呼吸道合胞病毒(RSV)的感染状况。方法于2017年6月至2020年3月,在我国华北地区的首都医科大学附属北京儿童医院、东北地区的中国医科大学附属盛京医院、西北地区的银川市妇幼保健院、华南地区的广州市妇女儿童医疗中心、东南地区的温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院和西南地区的贵阳市妇幼保健院开展前瞻性儿童ALRTI病例感染RSV的多中心研究,最终共纳入2839例病例。采集儿童ALRTI住院病例的呼吸道样本,使用多重实时荧光定量PCR方法筛检样本中的16种呼吸道病毒,分析儿童ALRTI住院病例中RSV感染状况。结果RSV总检出率为18.6%(528/2839);各地区RSV检出率5.5%~44.3%。男童的RSV检出率高于女童检出率(20.2%比16.3%)(P=0.009)。<5岁年龄组的RSV检出率(22.3%,501/2245)高于5~18岁组(4.5%,27/594),差异有统计学意义(χ^(2)=97.98,P<0.001);<6月龄组患儿的RSV检出率(37.0%)高于其他年龄组,且差异有统计学意义(均P<0.001)。2018年1月至2019年12月,RSV全年均有检出(除2019年6月和7月),冬春季是流行高峰。270例重症肺炎病例中,RSV核酸阳性病例占比为17.0%(46/270),其中36例为单纯RSV感染。结论RSV是引起我国5岁以下儿童ALRTI的常见病毒病原体;全年均可检出,并呈现出冬春季流行高峰。

ETV6-RUNX1阳性儿童急性淋巴细胞白血病基因表达谱聚类的临床特征

目的通过基因表达谱研究儿童ETV6-RUNX1阳性急性淋巴细胞白血病(ALL)异质性,探索不同聚类分组临床特征,为临床个性化诊疗及利用测序技术探索预后相对不良组预测模型提供可行性参考。方法应用改进的基因片段分析技术对2016年8月至2019年6月北京儿童医院收治的264例初诊ALL患儿的骨髓标本进行57个分型基因检测和聚类分析,重点分析56例ETV6-RUNX1阳性患者的基因表达谱与临床特点、免疫表型和早期化疗反应的关系。结果基因分型聚类显示ETV6-RUNX1阳性ALL被分为两组:E/R-1组(45例,80.4%)和E/R-2组(11例,19.6%)。E/R-2聚类离散度大于E/R-1,spearman相关系数分别为0.788、0.901;E/R-2、E/R-1组初诊PLT中位数分别为104(27~644)×10^9/L、50(8~390)×10^9/L(P<0.01),初诊骨髓原始幼稚细胞比例分别为0.830(0.270~0.975)、0.935(0.445~0.990)(P<0.05);CD22^+CD34^+CD20^CD117^-CD56^-免疫组合在E/R-2组占比更高(P<0.001);E/R-2和E/R-1组化疗第33天流式细胞术检测的微小残留病(MRD)转阴例数分别为5例(55.6%)和32例(88.9%)(P=0.064),去除临界值病例敏感性分析转阴例数分别为5例(55.6%)和32例(91.4%)(P=0.035);第33天PCR检测的MRD转阴例数分别为7例(77.8%)和36例(100.0%)(P=0.047)。结论ETV6-RUNX1阳性ALL患儿在基因表达谱层面存在异质性,符合E/R-2表达特征的患儿可能初诊时血小板减少倾向小但早期化疗反应相对不良。

9例综合征型孤独症患儿的基因诊断研究

目的对伴有孤独症样表现的神经发育障碍患儿进行基因诊断,明确病因,从而指导预后。方法收集来自首都医科大学附属北京儿童医院(以下简称北京儿童医院)精神心理科的患儿,记录患儿的临床资料,家属签署知情同意书后采集患儿及其父母的静脉血,提取基因组DNA并进行基因检测。结果9例患儿检测出4例拷贝数变异(CNVs),均为男性患儿;5例单核苷酸变异(SNVs),其中男性患儿2例,女性患儿3例。结论基因检测可对病因复杂、临床表现多样且不典型的综合征型孤独症进行病因学诊断,为遗传咨询以及预后提供可靠依据。

重视呼吸道人副流感病毒感染

人副流感病毒(human parainfluenza viruses,HPIVs)属于副黏病毒科,为有包膜的单股负链RNA病毒,根据其血清学及基因组特征,分为HPIV1-4型。HPIVs是引起儿童和成人急性呼吸道感染的重要病毒病原,其疾病负担可能被严重低估。目前HPIVs感染尚无有效的疫苗和特异的抗病毒药物,需要重视HPIVs感染的病原学监测、致病机制研究、疾病诊治、抗病毒药物和疫苗的研发。

人腺病毒7型DNA结合蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

目的原核表达人腺病毒(HAdV)7型DNA结合蛋白(DBP),制备DBP蛋白多克隆抗体。方法合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,使用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定该抗体效价;使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法(IFA)检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体,表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%,间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1024000,Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性,间接ELISA方法检测HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%(19/38)和63.2%(24/38)。结论成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体,获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。