耻垢分枝杆菌新型毒素-抗毒素系统MSMEG_3435-3436基因功能的初步研究

目的初步探讨耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系统基因的功能及其在细菌药物耐受中的作用。方法利用无水四环素(ATc)诱导穿梭质粒构建毒素基因(MSMEG_3436和MSMEG_6760)表达系统,检测毒素基因表达的抑菌作用。应用CRISPR-Cas12a基因编辑技术构建ΔMSMEG_3435-3436和ΔMSMEG_6762-6760敲除菌株,探究毒素-抗毒素系统对菌株生长的影响。通过计算菌株存活率检测MSMEG_3435-3436基因对异烟肼(96μg/ml)和利福平(40μg/ml)的耐受相关性。在耻垢分枝杆菌中用LacZ报告基因分别替换毒素-抗毒素基因(MSMEG_1277-1278、MSMEG_1283-1284、MSMEG_3435-3436、MSMEG_4447-4448和MSMEG_5635-5634),构建5个启动子活性检测突变菌株(SY3328、SY3309、SY6407、SY3310和SY3311),并将pMV261空载体和pMV261-抗毒素系列质粒分别电转至5个突变菌株中,通过测定吸光度值(A600、A550和A420)计算β-半乳糖苷酶活性[酶活性单位为“Miller单位(MU)”],以检测毒素抗毒素系统的启动子活性。结果在耻垢分枝杆菌中,ATc诱导表达毒素基因MSMEG_3436可抑制细菌生长,而同时表达对应的抗毒素基因MSMEG_3435可消除抑制作用;ATc诱导表达毒素基因MSMEG_6760未发现明显的抑菌作用。与野生株相比,ΔMSMEG_3435-3436和ΔMSMEG_6762-6760敲除菌株在7H9液体培养基中生长表型无明显差异。野生株和ΔMSMEG_3435-3436敲除菌株经异烟肼和利福平处理后的存活率[分别为(4.38±1.48)%和(3.49±0.66)%,(0.15±0.04)%和(0.03±0.02)%]显示毒素-抗毒素基因MSMEG_3435-3436与药物耐受性无关(t=0.548,P=0.613;t=2.663,P=0.056)。启动子(SY3328、SY3309、SY6407、SY3310和SY3311)在携带pMV261-空载体和pMV261抗毒素表达质粒的报告菌株中的β-半乳糖苷酶活性分别为(376.50±17.13)和(315.50±20.71)、(189.00±12.24)和(160.70±9.89)、(225.20±9.95)和(211.70±2.57)、(221.40±12.07)和(186.60±13.17)、(179.10±5.87)和(127.70±19.21)MU,差异均无统计学意义(t=2.272,P=0.086;t=1.795,P=0.147;t=1.319,P=0.258;t=1.949,P=0.123;t=2.562,P=0.063)。结论成功构建了MSMEG_3435-3436和MSMEG_6762-6760在耻垢分枝杆菌中的诱导表达体系及敲除菌株,并发现MSMEG_3435-3436是一个新的有功能的毒素-抗毒素系统,以及这两个毒素-抗毒素系统与菌株生长表型及异烟肼和利福平耐受性无关,最后发现耻垢分枝杆菌中5对毒素-抗毒素系统的抗毒素基因可能在自身启动子调控中不发挥关键作用,可为进一步研究结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统的功能提供线索。

室内尘螨过敏原监控及其对儿童哮喘防控效果研究进展

过敏性哮喘患病率不断上升,与人群居住环境日趋封闭化有关。尘螨是居室内最主要的吸入性过敏原来源,并能导致人体致敏和哮喘发病。监测并认识室内尘螨过敏原暴露水平的规律,采取综合性方法对尘螨及其过敏原进行防控,是减少尘螨过敏性哮喘症状和发病的重要措施之一。该文综述了室内尘螨过敏原监控及其对儿童哮喘防控效果的研究进展。

基于733例择期手术患儿的EB病毒感染血清流行病学调查

目的了解不同年龄段儿童EB病毒(EBV)感染现状及流行病学特点。方法以首都医科大学附属北京儿童医院2010年行外科择期手术住院患儿为研究对象,并排除临床EBV感染的病例。以患儿生化检测后剩余血清,采用酶联免疫吸附法检测血清EBV-CA-IgG、EBV-NA-IgG和EBV-CA-IgM抗体。计算EBV累计感染率和新发感染率,分析各年龄组EBV感染的性别和城乡特征。结果 733例患儿进入分析,男414例,女319例。<1岁306例,～5岁193例,～10岁147例,～17岁87例。①CA-IgG、NA-IgG和CA-IgM抗体的总阳性率分别为70.4%(516例)、68.4%(501例)和0.7%(5例);CA-IgG、NA-IgG的阳性率随年龄增长呈增高趋势;②<1、～5、～10和～17岁组EBV累计感染率分别为54.2%、74.6%、85.0%和90.8%;新发感染率分别为2.1%、2.4%、0和11.1%;③各年龄组男女性累计感染率差异无统计学意义;④各年龄组CA-IgG抗体阳性率和累计感染率均呈现城区高于郊区的趋向,但差异无统计学意义。结论儿童EBV原发感染的年龄较早,10岁时近90%的儿童血清EBV-CA-IgG抗体阳性,年龄较20世纪80年代有所延迟。