人心肌肌球蛋白轻链基因启动子驱动的GFP和Luc报告基因在人心肌细胞系中的表达

目的:构建人肌球蛋白2v基因启动子(pMLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和萤光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体并观察其在人心肌细胞系(HCM)和人肺癌细胞株A549中的整合表达特征。方法:应用去毒化的人类I型免疫缺陷病毒和pMLC2v-GFP或pMLC2v-Luc报告基因构建慢病毒示踪载体,转染HCM和A549细胞,激光共聚焦显微镜及生物发光检测仪观察2种报告基因在不同细胞生长进程中的表达特征。非特异性启动子驱动的GFP(GFPC)和红色荧光蛋白(RFPC)报告基因作为对照。结果:2种细胞转染GFPC和RFPC后第3 d,都表达GFP和RFP;而HCM只在转染pMLC2v-GFP和pMLC2v-Luc 21 d后表达GFP和Luc,A549细胞不表达。结论:pMLC2v主要在培养21 d后新增殖的人心肌细胞中驱动GFP和Luc报告基因表达,这为监测干细胞向心肌细胞的分化进程提供了可靠的病理及活体示踪工具。

婴儿左向右大分流先天性心脏病的外科治疗

目的 评估婴儿左向右大分流先心病的外科手术治疗的效果。方法 选择年龄≤ 11个月 ,危重型左向右大分流先心病 5 9例 ,I期修补 5 8例 ,分期手术 1例。病种为室间隔缺损、房间隔缺损、单心房等。结果 手术病死率 3.4% (2 / 5 9)。结论 左向右大分流先心病婴儿伴有肺炎、心衰及合并肺动脉高压 ,经内科治疗无效时应及时手术治疗。术前的营养支持、术中的精细操作以及术后的正性肌力药物及强效肺血管扩张剂前列腺素E1的合理使用、持续静注速尿 ,维持水电解质平衡是手术成功的关键因素。

小儿主动脉缩窄围术期泛素羧基末端水解酶L1的变化与临床意义

目的观察体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)和非CPB下行手术的主动脉缩窄患儿中血清泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin carboxyl-terminal esterase-L1,UCH-L1)浓度变化,评价UCH-L1是否是一个主动脉弓部手术后CPB相关脑损伤的预测指标。方法 2012年1月和2013年6月首都医科大学附属北京儿童医院共39例主动脉缩窄患儿接受了主动脉成型手术;其中A组17例未行CPB,B组22例应用选择性脑灌注分别在6个时间点(麻醉诱导后,关胸,术后2、8、24、48 h)收集血清标本,采用酶联免疫吸附法分别测定UCH-L1、神经胶质蛋白S-100β和神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)浓度。在术后8 h,拔除气管插管后6 h和出院前进行神经系统功能评分。结果 2组血清中UCH-L1浓度在术前基本相同[A组(0.184±0.066)μg/L vs B组(0.194±0.067)μg/L]。B组术后2 h后血清UCH-L1浓度较A组明显升高[A组(0.238±0.067)μg/L vs B组(0.327±0.151)μg/L,P<0.05],并于术后8 h达到高峰。在术后24 h,2组血清UCH-L1浓度差异无统计学意义[A组(0.208±0.078)μg/L vs B组(0.201±0.081)μg/L,P>0.05]。B组血清UCH-L1的峰值浓度和CPB时间明显相关(r=0.575,P=0.005)。术后所有患者均未出现持续存在的严重神经系统合并症。结论与非CPB手术相比,应用选择性脑灌注的小儿主动脉弓部手术可引起血清UCH-L1浓度显著升高,并且与CPB时间密切相关。UCH-L1可以作为一个CPB相关脑损伤诊断的潜在生物标志物。

先天性心脏病合并气管狭窄患儿心脏病矫治术同期置入气道支架治疗效果观察

目的 观察6例先天性心脏病合并气管狭窄患儿心脏病矫治术同期行气道支架置入治疗的效果,探讨其安全性。方法 先天性心脏病合并气管狭窄患儿6例,年龄4~17(9.47±3.98)个月,均于先天性心脏病矫治术后同期行气道支架置入术。记录术后CICU治疗时间及呼吸机使用时间;术后1个月行常规支气管镜检查,观察气管内支架形态、位置、有无肉芽组织等;术后3个月行超声心动图检查,观察心脏病矫治术后恢复情况,行增强CT检查评估气管形态后支气管镜下取出支架。随访1年,记录患儿术后恢复情况和生存情况,观察气管发育、肺功能及反复呼吸道感染改善情况。结果 6例患儿均顺利完成心脏矫治术,气道支架均一次性放置成功,术后CICU治疗时间(6.63±4.27)d,呼吸机使用时间(42.01±38.00)h。6例患儿气道支架置入术后均发生刺激性咳嗽,给予止咳等对症治疗后缓解,呼吸困难症状消失。术后1个月,支气管镜检查提示气管内支架形态和位置正常,无肉芽组织形成。术后3个月,增强CT和支气管镜检查显示气管形态良好后顺利取出支架;超声心动图显示心功能正常,心脏结构正常,未见残余分流。随访至2019年2月,6例患儿气管发育和肺功能均正常,无死亡病例。结论 先天性心脏病合并气管狭窄患儿心脏病矫治术同期行气道支架置入术可改善肺部通气,减少呼吸道感染,术后3个月取出支架可维持气管腔开放,不影响气管生长发育。

法洛四联症右心室流出道心肌的超微结构及力学特性

目的 研究法洛四联症 (TOF)右心室流出道心肌细胞的超微结构变化及心肌组织的生物力学性能。方法 对 2 4例TOF根治术手术前后的右心室及肺动脉的压力变化进行对比研究。对其中 7例TOF与对照组 7例先心病小室缺、小房缺应用透射电镜进行右心室流出道心肌的超微结构研究。对 4例TOF与 2例非先心病死亡右心室心肌进行多样本量的对比 ,采用计算机控制的小力学量软组织力学测试平台进行右心室心肌力学的研究。结果 TOF右心室流出道的心肌组织存在着很多超微结构异常的心肌细胞。TOF右心室流出道心肌组织的力学特点表现为过软 ,而右心室外壁表现为过硬 ,TOF根治术经过较为彻底地切除肥厚肌束 ,没有残余右心室流出道梗阻存在 ,肺动脉瓣前后无阶差存在 ,P >0 .0 5。 2 4例TOF无手术死亡。结论 建议TOF根治中 ,在疏通右心室流出道、切除肥厚肌束时不必过分考虑其功能作用。

婴幼儿法乐四联症合并肺动脉闭锁的外科治疗

目的 探讨法乐四联症合并肺动脉闭锁 (TOF PA)的外科治疗 ,重点讨论根治手术的适应证。方法 1995～ 2 0 0 1年 ,5例 2岁以下TOF PA患儿均施行根治手术 ,其中 ,肺动脉瓣膜性闭锁 2例 ,肺动脉瓣闭锁 +肺动脉干发育不良 3例。手术均在中度低温体外循环下进行 ,采用自体心包补片加宽肺动脉 ;Gore Tex补片加宽右心室流出道。结果 5例患儿根治手术无住院死亡。术后 1个月～ 1年复查 ,紫绀消失 ,体重明显增加。彩超复查未见残余分流 ,右心室流出道未见梗阻 ,肺动脉与右室流出道之间无明显压力阶差。X线检查 ,两肺血均有明显的增加 ,分布均匀对称。结论 婴幼儿TOF PA早期施行根治术可以得到较为满意的疗效。

血清UCH—L1浓度在幼猪深低温停循环模型中的变化

目的评估深低温停循环（DHCA）和选择性脑灌注（SCP）对幼猪血清UCH-L1水平的影响，并探讨UCH-L1和体外循环（CPB）脑损伤之间的关系。方法15头幼猪被随机分为3组，即假手术组（S组），SCP组和DHCA组。DHCA组单纯进行深低温停循环操作，而SCP组进行了选择性脑灌注。分别在三个时间点采集血清样品（T1：诱导麻醉后，T2：CPB后即刻，T3：CPB停止后2h），测试UCH-L1浓度。Western印迹法和TUNEL法分别检测海马组织bcl-2，bax蛋白的表达和细胞凋亡情况。结果三组血清中UCH-L1的浓度在T2均增加，到T3时浓度达到高峰。在DHCA组和SCP组T3血清UCH-L1浓度均显著高于S组[S组：（0．194±0．026）ng／ml，SCP组：（0．342±0．126）ng／ml，DHCA组：（0．476±0．077）ng／ml；P〈0．051，但是血清UCH-L1在SCP组较DHCA组明显降低（P〈0．05）。S组血清UCH-L1水平在手术后没有显著变化[T1：（0．140±0．051）ng／ml，T2：（O．141±0．049）ng／ml，T3：（0．194±0．026）ng／ml,P〉0．051。在DHCA组和SCP组，TUNEL染色的阳性细胞数较S组显著增加（S组：2．70±1．15，SCP组：17．13±6．77，DHCA组：20．23±8．26；Pd0．01）。在肼DHCA组TUNEI，阳性细胞数比SCP组增多，但差异无明显统计学意义。在S组和SCP组中海马组织bcb2／bax比值较DHCA组明显升高（S组：0．662±0．105，SCP组：0．606±0．163，DHCA组：0．375±8．26；P〈0．05）。结论幼猪动物模型中血清UCH-L1水平在DHCA和SCP后出现升高，并且它可以用来作为一种可预测临床体外循环相关脑损伤的生物标志物。

Nur77在深低温停循环对大鼠脑保护中作用

目的观察深低温停循环下大鼠海马组织Nur77表达情况,探讨Nur77在深低温停循环对大鼠脑保护中的作用及可能机制。方法45只SD大鼠均建立体外循环模型,随机分为对照组(常温不停循环20min)15只,常温停循环组(常温10min、停循环10min)15只,深低温停循环组(深低温10min、停循环10min)15只。术后取3组大鼠海马组织行组织病理检查,采用DAPI染色测定神经细胞凋亡情况,应用透射电镜观察线粒体改变情况,采用Western blot法检测Nur77、Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、细胞色素C(cytochrome C,CytC)蛋白相对表达量及细胞核、细胞质Nur77蛋白相对表达量,采用实时荧光定量PCR法检测Nur77mRNA相对表达量,采用免疫荧光法观察Nur77蛋白在细胞中的定位情况。结果对照组海马组织神经细胞及线粒体形态结构正常,细胞核周边连续,染色分布均匀;常温停循环组大量神经细胞变性坏死,凋亡小体出现,线粒体肿胀,数量减少,嵴扭曲变形断裂;深低温停循环组少量神经细胞变性坏死,线粒体轻微肿胀,膜较完整。3组大鼠海马组织Nur77mRNA和蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。对照组海马区Nur77主要分布于细胞核,细胞质表达较少;常温停循环组细胞质Nur77表达较对照组和深低温停循环组增加。常温停循环组海马组织细胞核Nur77(0.34±0.07)及海马组织Bcl-2(0.11±0.02)蛋白相对表达量均低于对照组(2.12±0.18、0.86±0.09)、深低温停循环组(1.79±0.11、0.34±0.04)(P<0.05),深低温停循环组均低于对照组(P<0.05);常温停循环组细胞质Nur77(0.74±0.05)及海马组织Bax(0.74±0.08)、caspase-3(0.86±0.09)、caspase-9(0.98±0.11)、CytC(0.92±0.08)蛋白相对表达量均高于对照组(0.12±0.02、0.13±0.03、0.13±0.02、0.17±0.03、0.14±0.02)、深低温停循环组(0.21±0.03、0.22±0.04、0.31±0.05、0.43±0.07、0.36±0.06)(P<0.05),深低温停循环组均高于对照组(P<0.05)。结论Nur77参与深低温停循环对大鼠的脑保护作用,其机制可能为深低温阻止Nur77从细胞核易位至细胞质线粒体,抑制神经细胞凋亡和线粒体损伤。

Nur77线粒体转位对细胞凋亡影响研究进展

Nur77在调控细胞生存和凋亡中发挥重要作用,多种生理信号均可诱导Nur77激活,激活的Nur77对细胞周期、动脉粥样硬化、炎症、代谢、DNA修复及凋亡有调节作用,尤其对细胞凋亡的调控作用越来越受到关注。Nur77在多种细胞中可通过线粒体信号通路参与自噬性凋亡,在凋亡信号刺激下从细胞核易位到线粒体,导致线粒体释放细胞色素C,从而诱导凋亡。本文就Nur77线粒体转位对细胞凋亡影响的研究进展作一综述。