消化系统重大疾病预警、预防、早期精准诊治的全链条研究

消化系统疾病发病率越来越高,国家和人民的负担越来越重,消化系统的癌前病变及早癌则是消化系统的重大疾病。如能在癌前病变及早癌阶段,早期发现,早期干预,将对人民的健康水平产生重大的影响,而消化系统癌前病变及癌变的预警、预防和早诊早治的全链条研究就是要建立消化系统重大疾病诊治体系,提高现有诊断水平,创新和推广精准诊治技术和设备,建立具有国际水平、符合中国国情的消化病学癌前病变和早期的诊治体系。

PFTK1在消化道肿瘤中的功能及机制回顾

细胞周期依赖性激酶（cyclin-dependent kinases,CDKs）是真核细胞的重要的调控因子,CDKs属于丝氨酸/酪氨酸蛋白激酶家族,含有高度保守的PSTAIRE motif,人类基因组包含21个编码CDKs的基因,主要包括10个经典的CDKs（CDK1-10）和11个新发现的CDKs（CDK11A-20）。

内镜黏膜下剥离术联合黏膜切除术在非壶腹部十二指肠占位性病变治疗中的应用价值研究

目的评估内镜黏膜下剥离术(ESD)与内镜黏膜下剥离术联合黏膜切除术(ESD+EMR)在非壶腹部十二指肠占位性病变治疗中的疗效及安全性。方法选取2015年4月至2019年4月在首都医科大学附属北京友谊医院应用ESD术及ESD+EMR术治疗的14例非壶腹部十二指肠占位性病变患者为研究对象,根据手术方式的不同将患者分为ESD组和ESD+EMR组,回顾性分析患者的基线资料、手术方式、并发症发生情况与转归、病理结果及手术时间等资料。结果 14例患者均成功完成内镜下治疗,整块切除率为100%(14/14)。其中ESD 4例,完全切除率为100%(4/4),ESD+EMR 10例,完全切除率为80%(8/10)。总体并发症发生4例(4/14,28. 6%),均为围手术期穿孔。在4例ESD的操作中,1例来源于黏膜下层的病变最大直径较大(16 mm),术前予外科手术备案,术中发生穿孔(1/4,25. 0%),行腹腔镜下十二指肠修补术后好转出院。在10例ESD+EMR的操作中,发生穿孔3例(30%,3/10),其中2例行内镜下金属夹封闭术治疗后好转;1例为内镜下金属夹封闭术治疗不佳,转外科开腹探查修补术后好转出院。ESD组与ESD+EMR组内镜下病灶最大直径分别为(16±7)、(16±6) mm,差异无统计学意义(P=0. 971);手术时间分别为(71. 8±39. 7)、(32. 0±18. 4) min,差异具有统计学意义(P=0. 022)。结论对于空间狭小、操作困难的非壶腹部十二指肠占位性病变,ESD及ESD+EMR治疗均是安全有效的,相比于ESD,ESD+EMR操作更快捷有效,具有良好的临床应用前景。

miR-365通过靶向E2F2抑制胃癌细胞增生和肿瘤形成

目的研究胃癌相关miR-365调控胃癌细胞增生和肿瘤发生的功能,并通过验证下游靶分子E2F2研究miR-365的作用机制。方法采用Northern blotting法检测miR-365在小鼠各组织器官中的表达谱;real-time PCR检测miR-365在人胃癌组织中的表达变化;细胞实验和裸鼠成瘤实验研究miR-365过表达对胃癌细胞增生的抑制作用;生物信息学分析miR-365下游靶分子E2F2;构建E2F2 3’UTR野生型和突变型荧光素酶报告载体,并利用双荧光素酶活性分析检测miR-365对E2F2基因表达的调控和结合位点;Western blotting法检测miR-365对E2F2蛋白表达的调控作用。结果 miR-365在包括胃在内的多种消化道组织中表达;miR-365在人胃癌组织中表达显著下调;miR-365过表达显著抑制多种胃癌细胞的增生和裸鼠皮下的成瘤能力;E2F2是miR-365的靶分子,miR-365通过E2F2 3’UTR上的结合位点抑制E2F2的蛋白表达。结论 miR-365在人胃癌组织和小鼠胃癌模型中表达下调,并通过下游靶分子E2F2抑制胃癌细胞增生和肿瘤形成。

过表达DBHS家族基因可促进食管鳞癌细胞的迁移侵袭

目的研究人类剪切蛋白(drosophila behavior human splicing,DBHS)家族基因,包括p5nrb、PSF、PSPC1基因,对食管鳞状细胞癌(以下简称食管磷癌)细胞系TE-8细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法构建p54nrb、PSF、PSPC1基因过表达载体,通过脂质体法转染TE-8细胞,转染48 h后qRT-PCR和Western blotting检测各组细胞p54nrb、PSF、PSPC1在mRNA和蛋白质水平的表达。细胞划痕实验及覆盖有Matrigel的Transwell小室检测食管鳞癌细胞的迁移、侵袭能力。结果过表达p54nrb、PSF、PSPC1后,qRT-PCR和Western blotting检测证实食管鳞癌TE-8细胞中上述基因表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显上调,细胞划痕实验及Transwell小室实验证实食管鳞癌TE-8细胞过表达p54nrb、PSF、PSPC1后,其迁移、侵袭能力增强。结论过表达DBHS家族基因可促进食管鳞癌细胞的迁移侵袭。

Akt信号通路调控miR-193b抑制胃癌细胞增殖

目的研究胃癌相关miR-193b调控胃癌细胞增殖的功能作用,并通过研究其与Akt信号通路的关系探讨miR-193b的调控机制。方法在PTEN基因特异性敲除(PTEN^(-/-))小鼠胃癌组织中,Northern Blot法检测miR-193b的表达变化;在胃上皮正常细胞系GES-1和5种胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、N87、SNU-16中,Real-Time PCR和Western Blot分别检测miR-193b与p Akt、Akt的表达水平;激活或抑制胃癌细胞Akt信号通路,RealTime PCR检测miR-193b表达改变;在胃癌细胞BGC-823、SGC-7901中过表达miR-193b,检测细胞的增殖变化。结果 miR-193b在Akt异常激活的小鼠胃癌组织中表达显著下调;胃癌细胞中Akt信号通路激活程度与miR-193b表达水平呈负相关,Akt信号通路抑制miR-193b表达;过表达miR-193b抑制胃癌细胞增殖。结论 miR-193b抑制胃癌细胞增殖并受Akt信号通路负向调节,其表达下调可能参与Akt信号通路调控的细胞增殖与胃癌发生。

DEC1参与顺铂诱导食管鳞癌的细胞衰老

目的探究化学治疗药物顺铂对食管鳞癌细胞衰老的影响及其机制。方法检测4种食管鳞癌细胞株(ECA109、EC9706、TE-1、TE-3)和一株正常的人类永生化食管上皮细胞株(Het-1a)中细胞衰老因子p53、分化型胚胎软骨发育基因1(differentiated embryo-chondrocyteexpressed gene1,DEC1)的mRNA和蛋白的表达情况;选取TE-3为研究对象,采用MTT方法检测不同浓度的顺铂(2、4、6、8、10μmol/L)对TE-3增生的情况,并结合衰老相关的β半乳糖苷酶染色方法,筛选出诱导细胞衰老的最适浓度。以顺铂最适浓度(4μmol/L)作用TE-3 48 h,采用Western blotting方法检测顺铂作用前后p53、DEC1蛋白水平的表达情况。结果检测食管鳞癌细胞系中细胞衰老因子p53、DEC1的mRNA和蛋白的表达,发现食管鳞癌细胞与食管上皮细胞相比,p53的表达均有不同程度下降,DEC1的表达均有不同程度升高。用不同浓度的顺铂(2、4、6、8、10μmol/L)作用TE3,MTT显示顺铂对细胞TE-3的增生抑制作用呈剂量和时间依赖性;结合衰老相关的β半乳糖苷酶染色,发现顺铂可诱导TE-3出现细胞衰老,并在顺铂4μmol/L作用48 h时细胞衰老现象最明显;在顺铂4μmol/L作用TE-3细胞48 h检测对照组与实验组的p53、DEC1的蛋白表达情况,发现实验组中TE-3的p53、DEC1的表达量分别升高了4.6倍(P=0.040)、2倍(P=0.032)。结论顺铂可诱导食管鳞癌细胞呈现细胞衰老表型,细胞衰老相关基因p53和DEC1可能参与这一过程。

内镜黏膜下剥离术治疗结直肠肿瘤不完整切除和手术时间延长的风险因素

目的分析应用结肠内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)治疗结直肠肿瘤患者期间发生不完整切除和手术时间延长的危险因素。方法收集自2014年2月至2021年11月间就诊于首都医科大学附属北京友谊医院因结直肠肿瘤行ESD治疗的患者资料,采取χ^(2)检验和Logistic回归模型分析导致ESD不完整切除和手术时间延长的危险因素。结果本研究共纳入433例患者进行分析。顺利完成ESD治疗的患者占98.8%(428/433),平均手术时长为(67.91±64.28)min。不完整切除率为20.56%(88/428),其危险因素包括肿瘤直径超过4 cm(P=0.001,OR=3.017,95%CI:1.536~5.924),伴有严重纤维化(P<0.001,OR=5.825,95%CI:2.540~13.355)和注射后抬举不良(P=0.025,OR=2.831,95%CI:1.141~7.025)。手术时间延长的患者占15.7%(67/428),其危险因素为女性(P=0.044,OR=1.832,95%CI:1.017~3.300),肿瘤直径超过4 cm(P<0.001,OR=10.276,95%CI:5.340~19.774)。结论大直径肿瘤、合并溃疡性结肠炎、肿瘤伴严重纤维化以及抬举征阳性为不完整切除的危险因素;女性患者以及大直径肿瘤会导致手术时间延长。

细针型共聚焦显微内镜临床应用进展

共聚焦激光显微内镜（confocallaserendomicroscopy，CLE）是一项新型内镜，在内镜检查的同时可直接观察到组织细胞学形态，提供无创组织病理学诊断，实现即时“光学活检”目的。通过这项技术可研究体内自然状态下的病理实体，同时进行更全面的病理评估。

内镜在原发性十二指肠占位性病变中的应用价值

目的评估内镜治疗原发性十二指肠占位性病变的应用价值。方法以2015年1月至2018年1月在首都医科大学附属北京友谊医院接受内镜下治疗的原发性十二指肠占位性病变的79例患者为研究对象,根据手术结果分为并发症组与无并发症组,并根据病灶位置及内镜类别进一步分组,回顾性研究患者基线信息、内镜诊疗、创面封闭方式、病理结果和并发症的发生与转归等资料。结果79例患者均成功完成内镜下治疗,其中内镜黏膜切除术(EMR)59例,内镜黏膜下剥离术(ESD)5例,耙状金属夹闭合系统(OTSC)辅助的全层切除6例,内镜下分片黏膜切除术(EPMR)9例。全组79例操作围手术期发生并发症8例(10.1%),均发生于降部及乳头部,十二指肠降段及乳头部的并发症发生率(17.0%,8/47)显著高于非降段及乳头部(球腔、球降交界、水平段)(0,0/32),差异具有统计学意义(P=0.012)。共有2例(2.5%)出现需要内镜或外科手术进一步干预的并发症。在全部47例十二指肠乳头及降部的操作中,并发症发生率为17.0%(8/47),其中1例患者(2.1%)出现术中穿孔,1例患者(2.1%)术后出现迟发出血,6例患者(12.8%)出现轻度急性胰腺炎,患者经治疗后均好转。47例患者根据使用内镜不同,分为十二指肠镜组和胃镜组。十二指肠镜组并发症发生率也显著高于胃镜组并发症发生率[28.0%(7/25)比4.5%(1/22),P=0.037]。结论内镜下治疗原发性十二指肠占位性病变是安全有效的,对于十二指肠降段及乳头部的操作和使用十二指肠镜的情况下,要更加警惕并发症的发生。

微探头共聚焦激光显微内镜诊断八例不明原因胆管狭窄

目的评估微探头共聚焦激光显微内镜（pCLE）在不明原因胆管狭窄中的诊断价值。方法纳入2015年3月至9月行内镜下逆行胰胆管造影术（ERCP）的10例患者，收集其pCLE检查和细胞刷检或术后病理检查结果。以最终诊断为标准，计算pCLE诊断胆管恶性狭窄的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、总体准确率，以及95％cI。结果纳入的8例患者中，最终确诊为恶性胆管狭窄7例。pCLE诊断恶性胆管狭窄的敏感度为85．7％（95％CI42．1％-99．6％），特异度为100．0％（95％CI2．5％-100．0％），阳性预测值为100．0％（95％CI54．1％-100．0％），阴性预测值为50．0％（95％CI1．3％-98．7％），总体准确率为87．5％（95％CI47．3％-99．7％）。结论pCLE诊断不明原因胆管狭窄有较高的敏感度和阴性预测值，可提高临床对恶性胆管狭窄诊断的准确性。

胰管支架置入在预防内镜逆行性胰胆管造影术后急性胰腺炎发生中的作用

为探讨胰管支架对内镜逆行性胰胆管造影(ERCP)术后预防急性胰腺炎(PEP)发生的作用,本研究回顾性分析2015年1月至2019年12月期间在首都医科大学附属北京友谊医院因胆总管结石首次行内镜逆行胰胆管造影患者的病例资料。根据术中是否留置胰管支架分为胰管支架组(147例)和未留置胰管支架组(192例)。以COTTON标准诊断是否发生内镜逆行性胰胆管造影术后急性胰腺炎,比较两组间急性胰腺炎的发生率。采用独立样本t检验、Pearson卡方检验(χ2)、Fisher精确检验方法比较组见差异。结果显示,胰管支架组有2例发生急性胰腺炎,均在48 h后好转。未留置胰管支架组有22例发生急性胰腺炎,其中20例在48 h好转,另2例为重症胰腺炎,经过30 d治疗后好转出院。胰管支架组(1.4%)和未留置胰管支架组(11.5%)之间急性胰腺炎发生率差异有统计学意义(χ2=12.905,P<0.001)。综上,胰管支架可能是预防ERCP术后发生PEP的有效方法。

ERCP联合ESWL在胰管结石治疗中的应用

胰管结石继发于慢性胰腺炎,常规内科治疗效果不佳。内镜下逆行胰胆管造影术(ERCP)联合体外声波碎石术的方法创伤小、操作简单、并发症少,自1987年被首次用于胰管结石的治疗以来,在30余年间不断完善,经历了从被质疑到现在成为多国指南中胰管结石一线治疗方式的发展历程。但是在科技飞速发展的今天,ERCP联合体外碎石的方法也面临着诸多其他治疗方法的挑战。

内镜下治疗非壶腹部早期十二指肠癌的疗效分析

目的评估内镜下治疗非壶腹部早期十二指肠癌的临床疗效。方法以2015年1月-2021年1月在首都医科大学附属北京友谊医院接受内镜下治疗的非壶腹部早期十二指肠癌患者为研究对象, 回顾性研究患者基线信息、内镜治疗方式、创面封闭方式、病理分析和并发症的发生与转归等资料。结果 47例患者资料入选并均成功完成内镜下治疗, 其中内镜黏膜切除术(endoscopic mucosal resection, EMR)17例, 内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection, ESD)5例, ESD+EMR 7例, 因ESD剥离困难转为ESD+EMR 6例, 耙状金属夹闭合系统(over-the-scope clip system, OTSC)辅助的全层切除4例, 分片内镜黏膜切除术(piecemeal EMR, EPMR)8例。47例早期癌病变中, 整块切除率83.0%(39/47), 完全切除率85.1%(40/47)。全组47例中, 围手术期发生穿孔并发症4例(8.5%), 均发生于降部, 其中2例(4.3%)经内镜治疗后好转, 另外2例(4.3%)内镜治疗效果不佳, 经外科手术治疗后好转。围手术期未出现术后出血、感染等并发症。结论内镜下治疗非壶腹部早期十二指肠癌是安全有效的, 可根据病灶的位置、大小及个体情况选择有针对性的治疗方案。对于十二指肠降段的操作, 要更加警惕穿孔并发症的发生。

ERCP联合体外震波碎石术在慢性胰腺炎合并胰管结石治疗中的应用

目的探讨内镜逆行胰胆管造影术(endoscopic retrograde cholangiopancreatograph,ERCP)及体外震波碎石术(extracorporeal shock wave lithotripsy,ESWL)在胰管结石治疗中的应用价值。方法回顾性收集2010年1月至2021年8月期间笔者所在医院消化内科收治的慢性胰腺炎合并胰管结石患者28例,根据患者处理方式分为ERCP直接取石组和ESWL联合ERCP取石组,比较2组患者的治疗效果,包括取石成功率、ERCP术后并发症、术后症状缓解情况等。结果28例患者中行ERCP直接取石19例,ESWL联合ERCP取石9例。ERCP直接取石组患者结石完全清除7例(36.84%),部分清除1例(5.26%),清除失败、仅放置支架引流11例(57.89%);术后6 h白细胞升高5例(26.32%)、C反应蛋白升高4例(21.05%);术后诊断为ERCP术后胰腺炎3例(15.79%)、高淀粉酶血症2例(10.53%);术后随访3~6个月腹痛症状完全缓解14例(73.68%),术后6个月17例患者体质量有所增加(89.47%)。ESWL联合ERCP取石患者结石完全清除5例(55.56%),部分清除3例(33.33%),清除失败、仅放置支架引流1例(11.11%)。术后6 h白细胞升高1例(11.11%)、C反应蛋白升高1例(11.11%);术后发生ERCP术后胰腺炎1例(11.11%),1例患者(11.11%)出现ESWL过程中腹痛及一过性血尿,3 d后自行缓解。术后随访3~6个月腹痛症状完全缓解9例(100%),术后6个月9例患者体质量均增加(100%)。ESWL联合ERCP取石组的结石清除率高于ERCP直接取石组(P=0.033),但2组在术后并发症、腹痛完全缓解和体质量增加方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论ESWL联合ERCP治疗慢性胰腺炎合并胰管结石的取石效果较ERCP直接取石更优,可有效清除结石,安全有效。