OX40调控双阴性T细胞的转化及抑制功能研究

目的探讨免疫共刺激分子OX40对双阴性T细胞(DN T细胞)转化、抑制功能的影响及可能的作用机制。方法通过中和抗体及基因敲除的方式将OX40作用阻断,检测在这一过程中DN T细胞的转化效率、抑制功能的变化及OX40对DN T细胞存活的影响。结果通过DN T细胞的转化实验发现,将OX40阻断,DN T细胞的转化效率分别从20.2%、29.1%降为10.5%、15.9%。同时与CD4 T细胞相比,OX40在DN T细胞中高表达,其阳性率为27.0%。通过DN T细胞的体外抑制实验发现,OX40敲除后的DN T对CD4 T细胞的抑制作用明显减弱。通过Annexin V染色发现,OX40敲除后DN T细胞的凋亡率分别从14.6%、22.3%增加为21.1%、35.1%,同时OX40敲除使DN T细胞抗凋亡基因表达降低。结论 OX40敲除能降低DN T细胞的转化效率,减弱其对CD4 T细胞抑制功能,这有可能与OX40敲除所致DN T细胞凋亡增加有关。

OX40基因对卵清白蛋白诱导的小鼠哮喘模型的影响机制研究

目的研究OX40基因对卵清白蛋白(OVA)诱导的小鼠哮喘模型中的影响及其机制。方法选取6~8周龄雄性C57/BL6小鼠20只,应用腹腔注射OVA致敏和雾化吸入OVA的方式诱导野生型和OX40基因敲除小鼠产生过敏性哮喘。通过苏木精-伊红染色、迪夫快速染色、肺气道呼吸阻力测试等方法验证哮喘疾病严重程度。通过流式细胞术检测肺泡灌洗液和肺实质中嗜酸性粒细胞、CD4 T细胞、滤泡辅助T(Tfh)细胞和CD11b^+CD8^-树突状细胞亚群比率。结果OX40基因敲除明显减轻了OVA诱导的小鼠过敏性哮喘的疾病症状和嗜酸性粒细胞在肺部的浸润。与野生型哮喘小鼠相比,OX40基因敲除的哮喘小鼠肺脏中CD4 T细胞和Tfh细胞亚群比率明显降低,CD11b^+CD8^-树突状细胞比率也明显降低。结论OX40基因促进了OVA诱导的小鼠哮喘疾病进程,并显著增高了Tfh细胞和CD11b^+CD8^-树突状细胞比率。

Rag1和Rag2/IL2rγ基因敲除小鼠肝脏缺血再灌注损伤的实验研究

目的 探讨Rag1和Rag2/IL2rγ基因敲除小鼠肝脏缺血再灌注损伤中淋巴细胞对天然免疫细胞的作用.方法 C57BL/6小鼠、Rag1基因敲除小鼠、Rag2/IL2rγ基因双敲除小鼠各10只,每种小鼠按简单随机化分组,分为假手术组和肝脏缺血再灌注损伤组,每组5只小鼠,通过采用小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,利用流式细胞术检测肝内各种免疫细胞亚群的变化,并观察免疫系统缺陷小鼠,即Rag1基因敲除小鼠和Rag2/IL2rγ基因双敲除小鼠的肝脏缺血再灌注损伤情况及肝脏内细胞亚群的变化.计量资料以均数±标准差((x)±s)表示,数据分析采用独立样本t检验.结果 通过比较假手术组与缺血再灌注组的肝脏内浸润的免疫细胞亚群变化,发现肝脏缺血再灌注后CD4+T细胞、DNT细胞、NK细胞、NKT细胞、库普弗细胞、骨髓来源的巨噬细胞和中性粒细胞的比例均明显升高.Rag1基因敲除小鼠在肝脏缺血再灌注损伤后库普弗细胞、骨髓来源的巨噬细胞和中性粒细胞的比例均比假手术组明显升高;与正常小鼠的肝脏缺血再灌注组相比,血清谷丙转氨酶水平明显下降,从(1 776.25±219.37) U/L下降至(932.33±58.77) U/L(P =0.003,t =7.350),肝脏病理苏木精-伊红染色结果显示坏死区域明显减少.Rag2/L2rγ基因双敲除小鼠在肝脏缺血再灌注损伤后中性粒细胞比例较假手术组依然明显升高,但库普弗细胞和骨髓来源的巨噬细胞的变化并不明显;与Rag1基因敲除小鼠的肝脏缺血再灌注损伤组相比,血清谷丙转氨酶进一步降低,从(932.33±58.77) U/L降至(309.00±163.53) U/L(P=0.002,t=6.182).结论 Ragl和Rag2/IL2rγ基因敲除小鼠肝脏缺血再灌注损伤均较C57 BL/6小鼠轻,T细胞和NK细胞均促进肝脏损伤.其中,T细胞对库普弗细胞、骨髓来源的巨噬细胞和中性粒细胞的募集的影响不大,而对NK细胞的肝脏浸润起到了促进作用;NK细胞可影响库普弗细胞和骨髓来源的巨噬细胞的募集,而对中性粒细胞的影响甚少.

肝内T淋巴细胞在急性肝损伤中的作用机制

急性肝损伤（acute liver injury,ALI）是由病毒或细菌感染,毒物摄入,药物服用不当等原因引起的急性肝细胞损伤,临床表现为急性肝功能障碍。若未能及时去除病因或给予适当的药物治疗,急性肝损伤可进展为急性肝衰竭,表现为迅速进展的肝性脑病和多器官功能衰竭,预后差,病死率高。除了原发病因造成的肝细胞损伤外,多种免疫细胞、细胞因子及分子均参与了急性肝损伤的发生与发展。

CD4^(+)T/DN T比值预测原发性胆汁性胆管炎患者的远期预后

目的探讨原发性胆汁性胆管炎(PBC)初治患者外周血淋巴细胞比例与临床特点及远期预后的关系。方法前瞻性选取2017年9月至2018年9月就诊于首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心确诊的15例PBC患者作为PBC组。同时选取来本院体检中心检查的17例性别、年龄匹配的健康对照者作为对照组。PBC组均长期规律应用熊去氧胆酸(UDCA)13~15 mg·kg^(-1)·d^(-1)治疗,并通过门诊及电话随访。采用流式细胞术检测CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、双阴性(DN)T细胞在PBC组患者和对照组外周血淋巴细胞中的比例;计算UDCA治疗1年时的GLOBE评分和UK-PBC风险评分。采用Spearman相关性分析PBC患者的淋巴细胞比例及其与临床指标、预后评分的相关性。结果PBC组患者外周血CD4^(+)T、CD8^(+)T、DN T细胞百分比及CD4^(+)T/CD8^(+)T、CD4^(+)T/DN T、CD8^(+)T/DN T比值与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在PBC患者中,血清AST与CD4^(+)T/DN T比值呈正相关(r=0.593,P=0.022);血清总胆红素与CD4^(+)T细胞百分比、CD4^(+)T/CD8^(+)T比值呈正相关(r=0.621、0.657;P=0.016、0.009),而与CD8^(+)T细胞百分比呈负相关(r=-0.611,P=0.018)。PBC患者外周血CD4^(+)T/DN T比值与UDCA治疗1年时UK-PBC风险评分之间呈正相关(r=0.568,P=0.030)。结论PBC患者外周血中CD4^(+)T/DN T比值与血清AST及UDCA治疗1年后UK-PBC风险评分之间呈正相关。本研究提示,PBC患者外周血中CD4^(+)T/DN T比值有助于评估其远期预后。

T淋巴细胞在肝脏缺血再灌注损伤机制中的研究进展

肝脏缺血再灌注损伤作为肝移植和复杂的肝切除术后的主要并发症,预防和防治肝脏缺血再灌注损伤逐渐成为国内外研究热点.既往认为,参与肝脏缺血再灌注损伤发生、发展的免疫细胞主要涉及库普弗细胞和中性粒细胞,而越来越多的文献报道T淋巴细胞在肝脏缺血再灌注损伤机制中的重要作用.本文结合近几年国内外相关文献,就T淋巴细胞各种细胞亚群在肝脏缺血再灌注损伤中的作用机制的研究进展作一综述.