密闭式吸痰管不同更换时间在机械通气患者中应用价值的比较

目的对比密闭式吸痰管不同更换时间在机械通气患者中的应用价值。方法选择使用密闭式吸痰管吸痰的机械通气患者80例,随机分为A组26例、B组27例、C组27例,每次密闭式吸痰管更换时间分别为24 h、72 h、120 h,对比三组呼吸机相关性肺炎发生率、吸痰管前端培养的菌落计数、定植率。结果 A、B、C三组患者的呼吸机相关性肺炎发生率分别为11.54%、7.41%、3.70%,差异无统计学意义(P>0.05);三组患者的菌落计数分别为(6100±610)cfu/mL、(9 920±1 440)cfu/mL、(273 000±1 670)cfu/mL,定植率分别为57.69%、70.37%、100.00%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论密闭式吸痰管的不同更换时间对机械通气患者费用与安全具有差异性,每72小时更换一次的应用价值最高,值得临床推广与研究。

人乳头状瘤病毒E6和E7蛋白过表达慢病毒载体构建及稳定转染喉上皮细胞系的建立

目的分别构建过表达人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6型和11型的E6、E7癌基因的慢病毒载体,建立HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因过表达的SNU-1076喉上皮细胞系模型。方法分别合成表达HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因的片段,构建重组慢病毒载体pHBLV-CMV-h-HPV6-E6-E7-3FLAG-ZsGreen-Puro和pHBLV-CMV-h-HPV11-E6-E7-3FLAG-ZsGreen-Puro。包装慢病毒后转染进入人喉上皮细胞系SNU-1076,经嘌呤霉素抗性筛选得到阳性克隆。采用实时定量PCR法分别检测HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因过表达的水平。结果通过测序验证质粒构建的成功。实时荧光定量PCR的结果显示,转染HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因的SNU-1076细胞系相较于转染对照空载体的细胞系出现了明显的扩增曲线。其中HPV6-E6-E7的过表达效果为41692倍,HPV11-E6-E7的过表达效果为124957倍。结论利用慢病毒法成功分别建立了过表达HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7的喉上皮SNU-1076细胞系。

复发性呼吸道乳头状瘤细胞原代培养中人乳头状瘤病毒含量的变化

目的优化复发性呼吸道乳头状瘤(recurrent respiratory papilloma,RRP)细胞在体外原代培养的条件,并检测培养不同时间点单位细胞人乳头状瘤病毒(HPV)的含量。方法采用组织块培养法培养7例喉乳头状瘤组织,利用低速离心法和过筛网去除细胞碎片来优化培养系统,并于培养的第2、7、14天采用荧光半定量PCR法检测HPV分型及病毒的相对含量变化。结果 原代细胞培养第2天,显微镜下可见"凹空状"HPV感染的原代上皮细胞。培养第10天大部分HPV感染的原代上皮细胞出现了明显的凋亡和坏死,未被感染的、直径较小的上皮细胞开始增殖。在传代培养的第30~45天后,原代细胞逐渐衰老死亡。HPV6在离体后拷贝数迅速降低,最后完全检测不到;而HPV11虽然在离体后拷贝数出现迅速降低,但随着培养时间延长,即使细胞的状态不佳,HPV11仍然能维持着较低的拷贝数。结论 RRP原代细胞的体外培养虽可以存活30 d以上,但随着培养时间的延长,HPV含量不能随细胞增殖而稳定扩增,HPV拷贝数骤降甚至消失,尚不能作为HPV感染性肿瘤的体外研究模型。