HCV NS5A反式调节蛋白13研究进展

HCV NS5A反式调节蛋白13(HCV NS5A trans-regulated protein13,NS5ATP13)又称核螺旋体磷酸化蛋白1(nucleolar and coiled-body phosphoprotein1,NOLC1)或核仁磷酸化蛋白140(nucleolar phosphoprotein140,Nopp140),

转化生长因子β在肝细胞癌中的免疫调节作用及研究进展

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,大多数患者确诊时已为晚期,失去手术治疗机会。HCC的生长、侵袭、转移及免疫耐受与肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)密切相关。TME是肿瘤细胞赖以生存的细胞环境,包括肿瘤间质、邻近细胞、血管、周边多种免疫细胞和免疫相关介质等组分。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一组能调节细胞生长和分化的细胞因子,通过调节TME维持肝脏免疫耐受和免疫激活间的平衡。TGF-β参与HCC免疫抑制性微环境的建立,肿瘤细胞及其微环境可通过TGF-β调节免疫细胞的表型及功能,促进HCC免疫耐受实现免疫逃逸。阐明TGF-β在TME中的免疫调节作用有望为HCC免疫治疗提供新的靶向途径和生物标志物。

自然杀伤性T细胞在肝脏疾病中的作用与机制研究进展

自然杀伤性T细胞(natural killer T cell,NKT cell)是一种非传统T淋巴细胞,既表达自然杀伤性细胞(natural killer cell,NK cell)的相关受体,也表达T细胞受体.近年来,不断有新的NKT细胞亚群被发现,不同亚群的结构、功能和调节机制不尽相同.在肝脏疾病中,活化的NKT细胞功能和作用复杂多变,其机制尚未十分明确,有待进一步研究.深入探讨NKT细胞在肝脏疾病中的作用及机制对延缓肝病病理进程至关重要.

乌司他丁对体外循环术后外周血单核细胞亚群的影响

目的:通过动态监测体外循环前后单核细胞各亚群表型及数量变化,研究乌司他丁对体外循环患者免疫功能的影响。方法:收集择期行心脏瓣膜置换术患者20例,随机分成乌司他丁组(U+组)和对照组(U-组),每组10例。于麻醉后CPB前(T1)、CPB停机0h(T2)、术后1d(T3)及3d(T4)四个时间点采取外周抗凝血。采用流式细胞仪结合绝对计数法,观察乌司他丁的应用对于CPB术后患者单核细胞各亚群比例和数目,及不同单核细胞亚群表面免疫功能相关分子Toll样受体-4(toll-like recep-tor-4,TLR-4)和人白细胞抗原-DR(human leukocyte antigen DR,HLA-DR)表达动态变化的影响。结果:U-组和U+组单核细胞亚群Mo1、Mo2和Mo3数目在停机0h均有所下降;术后1d,Mo1和Mo2数量有不同程度升高;术后3d,Mo1及Mo2数目均有所下降,但U+组的细胞数目明显低于U-组(P<0.05)。结论:在CPB围术期使用乌司他丁可减少外周血单核细胞亚群数量,从而减弱CPB诱发的炎症反应。

Glt25d1基因敲低对刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎小鼠巨噬细胞和中性粒细胞的影响

目的研究Glt25d1基因在刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝炎中的作用及其对巨噬细胞和中性粒细胞的影响。方法随机抽取6~8周无特定病原体雌性Glt25d1+/-小鼠及与其同窝出生的野生型(wild type,WT)小鼠,体质量(20±2)g,分为WT对照组、Glt25d1+/-对照组、WT造模组和Glt25d1+/-造模组,每组8只。造模组通过内眦静脉注射Con A,剂量为10 mg/kg,对照组给予相同剂量生理盐水注射。造模12 h后处死小鼠。检测小鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase,AST)水平,观察肝组织病理。采用流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏和肝脏中巨噬细胞和中性粒细胞的比例。采用定量逆转录PCR(quantitative reverse transcriptase-mediated PCR,qRT-PCR)检测肝脏中单核-巨噬细胞趋化蛋白-1(monocyte/macrophage chemotaxis proteinⅠ,MCP-Ⅰ)、巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophage inflammatory proteinⅠα,MIP-Ⅰα)、巨噬细胞炎性蛋白2(macrophage inflammatoryproteinⅡ,MIP-Ⅱ)及淋巴细胞抗原6G(lymphocyteantigen6complexlocusG,Ly6G)等mRNA的相对表达量。结果 WT对照组和Glt25d1+/-对照组小鼠ALT [(52.00±18.19)U/L vs (45.00±6.85)U/L]和AST [(168.17±21.33)U/L vs(276.17±83.37)U/L]水平差异无统计学意义(t值分别为0.360、1.255,P值分别为0.7263、0.2589)。Con A造模12 h后,WT造模组小鼠ALT和AST水平分别为(3089.67±663.92)U/L、(3099.50±519.15)U/L,Glt25d1+/-造模组小鼠ALT和AST水平分别(11565.17±1381.38)U/L、(10875.17±1558.68)U/L,均显著高于未造模组(P均<0.05),Glt25d1+/-造模组小鼠ALT和AST水平均显著高于WT造模组(t值分别为5.530、4.733,P值分别为0.0003、0.0032)。肝组织HE染色示:WT对照组和Glt25d1+/-对照组小鼠肝组织未见明显损伤,Con A诱导12 h后,与WT Con A造模组小鼠相比,Glt25d1+/-造模组小鼠肝脏坏死面积更广、汇管区炎性细胞浸润更显著。Glt25d1+/-对照组小鼠脾脏中巨噬细胞比例显著高于WT对照组[(5.04±0.32)%vs(3.48±0.31)%],差异有统计学意义(t=2.954,P=0.0131),外周血[(0.26±0.09)%vs(0.63±0.16)%]和肝脏[(1.58±0.11)%vs(2.83±0.43)%]中差异无统计学意义(t值分别为1.456、1.626,P值分别为0.1733、0.1351)。Con A诱导12h后,与WT造模组相比,Glt25d1+/-造模组小鼠外周血中巨噬细胞比例显著降低[(0.12±0.21)%vs (0.43±0.10)%,t=2.955,P=0.0144],肝脏中巨噬细胞比例显著升高[(8.34±0.30)%vs (1.03±0.53)%,t=6.992,P=0.0002],脾脏中巨噬细胞比例无显著差异[(3.98±0.39)%vs (3.82±0.21)%,t=0.372,P=0.7173]。与WT对照组小鼠相比,Glt25d1+/-对照组小鼠脾脏中中性粒细胞比例显著升高[(5.20±0.76)%vs (2.46±0.35)%,t=3.836,P=0.0028],外周血[(0.67±0.26)%vs (1.96±0.77)%]和肝脏[(3.68±1.33)%vs (3.76±1.12)%]中中性粒细胞比例无显著差异(t值分别为1.078、0.039,P值分别为0.3040、0.9698)。Con A诱导12 h后,与WT造模组小鼠相比,Glt25d1+/-造模组小鼠外周血中性粒细胞比例显著降低[(1.37±0.22)%vs (14.40±2.72)%,t=4.782,P=0.0088],肝脏中巨噬细胞比例显著升高[(8.08±1.93)%vs (1.64±0.71)%,t=3.788,P=0.0043],脾脏中差异无统计学意义[(5.81±0.84)%vs (5.96±0.42)%,t=0.176,P=0.8621]。WT对照组小鼠MCP-Ⅰ、MIP-Ⅰα、MIP-Ⅱ及Ly6G mRNA相对表达量分别为0.66±0.31、1.08±0.23、1.04±0.17、1.05±0.19,Glt25d1+/-对照组小鼠上述指标分别为0.60±0.13、1.56±0.11、0.77±0.07、0.92±0.16,差异均无统计学意义(P均> 0.05)。WT造模组小鼠MCP-Ⅰ、MIP-Ⅰα、MIP-Ⅱ及Ly6G mRNA相对表达量分别为1.29±0.41、1.11±0.18、1.16±0.19、0.90±0.20,Glt25d1+/-造模组小鼠上述指标分别为2.51±0.26、4.72±0.45、2.62±0.36、2.36±0.59,Glt25d1+/-造模组均显著高于WT造模组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 Glt25d1基因敲低可加重小鼠Con A诱导的自身免疫性肝炎,降低外周血巨噬细胞和中性粒细胞比例,升高肝脏中巨噬细胞和中性粒细胞比例,并诱导肝脏细胞因子如MCP-Ⅰ、MIP-Ⅰα、MIP-Ⅱ及Ly6G转录水平升高。

糖基因GLT25D1和GLT25D2缺失对APAP诱导的急性药物性肝损伤的影响

目的 研究糖基因Glt25D1和Glt25D2在对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的急性药物性肝损伤中的可能作用及机制.方法 抽取6~8周雄性糖基因Glt25D1和Glt25D2敲除小鼠(Glt25D1^(Δhep) Glt25D2^(-/-))及野生型小鼠(Wild type,WT),构建药物性肝损伤模型.实验组腹腔内注射500 mg/kg APAP,对照组给予相同剂量生理盐水.造模6 h后处死小鼠.检测小鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,观察肝组织病理.分离提纯小鼠肝原代细胞,分别加APAP和衣霉素(Tunicamycin,Tm)刺激6 h后收取细胞,提取细胞蛋白和RNA.q-PCR、Western印迹检测小鼠肝脏组织及原代肝细胞Glt25D1和Glt25D2、内质网应激相关蛋白、凋亡相关蛋白、炎性因子的表达变化趋势.结果 Glt25D1^(Δhep) Glt25D2^(-/-)造模组小鼠ALT和AST水平均显著高于WT造模组.小鼠肝脏HE染色可见,Glt25D1^(Δhep) Glt25D2^(-/-)造模组小鼠肝损伤程度比WT造模组更严重.Glt25D1^(Δhep) Glt25D2^(-/-) APAP造模组GRP78、chop以及cleaved caspase-12、cleaved caspase-3等内质网应激相关蛋白的表达量高于WT造模组,同时伴有线粒体细胞色素C的释放.结论 Glt25D1和Glt25D2基因敲低加重小鼠APAP诱导的急性肝损伤,促进内质网应激,促进肝细胞凋亡.

十色流式检测HIV/AIDS患者外周血中T淋巴细胞亚群及活化状态

目的建立十色流式方案检测HIV/AIDS患者外周血中T淋巴细胞亚群及活化状态。方法按多色流式配色原则,初步确立抗人CD3、CD4、CD8、CD45RA、CD25、CCR7、CD28、CD38、HLA-DR抗体及7-AAD的配色方案。采用1例HIV/AIDS患者外周血PBMC标本进行最适电压调节、荧光补偿设定和FMO对照;设定条件后,检测5例HIV/AIDS患者的外周血样本。结果建立检测人外周血中T淋巴细胞亚群及活化状态的最优十色流式染色方案,采用此方案检测5例HIV/AIDS患者外周血标本,分析T淋巴细胞各亚群比例及活化程度,发现不同细胞亚群中活化分子HLA-DR、CD38、CD28的表达模式存在显著差异。结论十色流式方案可检测HIV/AIDS患者外周血中T淋巴细胞亚群及其活化状态操作简便,结果可靠。

电视胸腔镜肺叶切除术的临床应用

微创外科（minimally ivasion surgery，MIS）是现代外科发展的趋势，应用电视胸腔镜技术（videoassisted thoracic surgery，VATS）进行肺叶切除术是近年来微创胸外科的热点之一[1]。自20世纪90年代胸腔镜逐步应用于临床以来，胸腔镜肺叶切除术已成为早期非小细胞肺癌（non—small cell lungcancer，NSCLC）治疗的主要手术方式[2-3]。

甲型流感病毒感染者CD160^+CD8^+T淋巴细胞亚群分析

目的研究甲型流感病毒(IAV)感染者外周血中CD160^+CD8^+T淋巴细胞亚群的特征。方法收集2018年12月至2019年3月流感季就诊于北京大学地坛医院教学医院感染二科IAV感染者共37例及同期体检的健康对照者51例,应用多色流式细胞检测平台,检测外周血不同分化阶段CD160^+CD8^+T淋巴细胞的比例。结果与健康对照相比,IAV感染者外周血T细胞中CD160^+CD8^+T细胞比例下降[24.50%(14.70%,44.10%)vs.8.85%(5.14%,18.15%)],差异有统计学意义(U=326.00、P<0.001)。IAV感染者与健康对照相比,其CD8^+T中初始T细胞(TN)[3.88%(1.28%,9.48%)vs.0.22%(0.12%,0.60%)]、中央记忆性T细胞(TCM)[8.70%(4.43%,15.80%)vs.1.51%(0.69%,2.54%)]、效应记忆性T细胞(TEM)[22.30%(13.80%,30.40%)vs.7.71%(5.23%,16.25%)]和终末效应记忆T细胞(TEMRA)[(46.99±22.91)%vs.(21.60±13.38)%]4个亚群中CD160^+细胞的比例均下降,差异有统计学意义(U=238.50、81.50、412.00,t=6.03;P均<0.001)。IAV感染者出院时较入院时CD160^+CD8^+T细胞比例上升[(8.92±7.84)%vs.(16.40±9.43)%](t=4.09、P=0.001),但仍低于正常水平[24.50%(14.70%,44.10%)vs.(16.40±9.43)%],差异有统计学意义(U=209.50、P=0.0029)。结论甲型流感病毒感染者外周血中T淋巴细胞CD160^+CD8^+T细胞亚群比例显著降低,可能是免疫失衡的重要表现。

肝细胞癌免疫生物治疗的策略和挑战

肝细胞癌是中国常见的恶性肿瘤,严重威胁人民的生命和健康。近年来,免疫生物治疗给肝细胞癌的治疗提供了新的选择。细胞免疫治疗、肿瘤疫苗、溶瘤病毒以及免疫检查点抑制剂等多样化的新兴免疫生物治疗技术也逐步向临床应用推进。肝细胞癌的免疫生物治疗应针对不同患者的免疫特征,制定不同的个体化治疗策略。策略制定过程中需要关注逆转T淋巴细胞耗竭、突破肝癌微环境的免疫抑制、提高免疫治疗的特异性、辅助以免疫佐剂以增强抗肝癌免疫应答、及时和准确的疗效和安全性评估等关键性问题。总之,个体化、特异性、安全和高效,是肝细胞癌免疫生物治疗的必然发展趋势。