心肌细胞FoxO1特异性敲除对心肌梗死的影响及机制

目的探讨心肌细胞FoxO1特异性敲除对小鼠急性心肌梗死后纤维瘢痕和心功能的影响。方法使用他莫昔芬(0.1mg/g/d)对Myh6-ER-Cre^(+)FoxO1^(loxP/loxP)小鼠连续腹腔注射5 d的方法诱导心肌细胞内FoxO1的敲除。H9C2心肌细胞转染FoxO1的siRNA诱导心肌细胞内FoxO1的表达下调。使用Western Blot法检测FoxO1的蛋白表达水平,以明确敲减效率。选取10周左右的心肌细胞FoxO1特异性敲除(CKO组)和注射玉米油的对照小鼠(对照组)通过前降支结扎的方法制备心肌梗死模型。心脏超声检测各组心功能改变,Masson染色检测各组心脏梗死纤维瘢痕面积。TUNEL和心肌细胞标志蛋白α-Actinin免疫荧光双染法检测心肌细胞凋亡情况。realtime-PCR法检测细胞凋亡相关基因的表达。Caspase3/7活性检测心肌细胞活性。结果Western Blot显示CKO组小鼠心脏组织中FoxO1的表达显著下降,表明敲减成功。术后28 d的生存曲线显示CKO组小鼠的生存率高于对照组。与对照组相比,CKO组的梗死纤维瘢痕的面积显著减小,心功能显著提高(P<0.05)。CKO组心脏组织中促凋亡相关基因Bax和Bim的表达显著降低(P<0.05),梗死交界区心肌细胞凋亡数量也少于对照组(P<0.05)。H9C2心肌细胞使用siRNA抑制FoxO1的表达后,缺氧6 h后的心肌细胞中Caspase3/7的活性显著下降(P<0.05),下调细胞内促凋亡基因(Bim、Bax)的表达和上调抗凋亡基因(Bcl2、Bcl-xL)的表达(P<0.05)。结论心肌细胞特异性敲除FoxO1可减轻心肌细胞缺氧诱导的损伤,从而在小鼠急性心肌梗死时起到心脏保护作用。

谷氨酰胺酶1抑制剂对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的影响

目的 探讨谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)特异性抑制剂BPTES[bis-2-(5-phenylacetamido-1,3,4-thiadiazol-2-yl)ethyl sulfide]对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的小鼠肝纤维化模型肝纤维化的影响。方法 经雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射橄榄油(对照组)、10%CCl4(10μL/g,模型组)或10%CCl4(10μL/g)+BPTES(10 mg/kg,处理组),每组10只,每周注射2次,共4周,构建肝纤维化模型。采用天狼猩红染色法观察小鼠肝脏组织中胶原沉积情况;qRT-PCR和免疫组织化学染色法检测小鼠肝脏组织中肌动蛋白2(actin alpha 2,Acta2)、Ⅰ型胶原a1(collagen typeⅠalpha1,Col1a1)、GLS1基因及GLS1蛋白表达水平。结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠肝脏组织整体增大,表面不光滑,呈颗粒状,同时肝脏质量与胫骨长度比显著增加(t=2.979,P <0.05);与对照组相比,模型组小鼠肝脏组织中天狼猩红染色阳性的胶原沉积面积显著增加(t=7.661,P <0.01),Acta2和Col1a1基因相对表达量均显著增加(t分别为4.335和5.319,P均<0.01),GLS1 mRNA和蛋白表达水平均显著增加(t分别为5.319和9.725,P <0.01);与模型组小鼠相比,BPTES处理组小鼠肝脏质量减轻,肝脏组织中天狼猩红染色阳性的胶原沉积面积显著减少(t=7.427,P <0.01),Atca2和Col1a1基因相对表达量均显著降低(t分别为3.713和2.628,P均<0.05)。结论 抑制GLS1活性可显著改善CCl4诱导的肝纤维化程度,为肝纤维化治疗提供了新思路。