目的:以自发性2型糖尿病模型(dbdb)小鼠复制主动脉缩窄模型,观察糖尿病对心力衰竭的促进作用。方法:实验组选择7周龄的雄性dbdb小鼠,对照组选择同周龄雄性C57BL/6 J小鼠各15只,均通过主动脉缩窄术构建小鼠心力衰竭模型;采用血压计检测...目的:以自发性2型糖尿病模型(dbdb)小鼠复制主动脉缩窄模型,观察糖尿病对心力衰竭的促进作用。方法:实验组选择7周龄的雄性dbdb小鼠,对照组选择同周龄雄性C57BL/6 J小鼠各15只,均通过主动脉缩窄术构建小鼠心力衰竭模型;采用血压计检测小鼠心率及血压改变,小动物超声心动仪检测心脏结构和功能变化,于术后8周收取小鼠心脏组织,Masson法观察心脏间质中胶原的沉积,苏木精-伊红观察心脏炎症浸润以及麦胚凝集素染色法检测心肌细胞肥厚面积。结果:基础条件下, dbdb小鼠的血糖明显高于C57小鼠,主动脉缩窄术后8周,与对照组相比, dbdb小鼠的心脏射血分数明显降低[野生型(WT)vs. dbdb:(41±2.3)%vs.(32±1.8)%,P<0.05],心功能显著恶化,心肌纤维化程度明显加重[WT vs. dbdb:(4.07±0.37)%vs.(5.85±0.48)%,P<0.05],以及心脏炎症浸润显著加重,dbdb小鼠的心肌细胞明显增大[WT vs. dbdb:(151±21)vs.(223±17),P<0.05)]。结论:糖尿病促进了主动脉缩窄术诱导小鼠心功能进一步加重。展开更多
目的:本研究改进基于脱氧核糖核酸(DNA)连接酶的中低通量基因分型方法,并用此方法进行核苷酸结合寡聚结构域(NOD)样受体基因NOD1和NOD2与冠心病的关联分析。方法:通过多重聚合酶链式反应(PCR)预扩增增加连接模板分子数量,提高特异性连...目的:本研究改进基于脱氧核糖核酸(DNA)连接酶的中低通量基因分型方法,并用此方法进行核苷酸结合寡聚结构域(NOD)样受体基因NOD1和NOD2与冠心病的关联分析。方法:通过多重聚合酶链式反应(PCR)预扩增增加连接模板分子数量,提高特异性连接效率,优化DNA探针设计,摸索连接反应温度、时间、循环圈数及连接酶种类实现等位基因特异性连接,通过荧光掺入PCR和毛细管电泳实现多种等位基因特异性产物一次性检测。Sanger测序验证此方法准确性后,利用此方法对NOD1和NOD2基因上的单核苷酸多态性(SNP)位点在1 555例冠心病患者和1887例对照受试者中进行分型和关联分析。结果:通过优化反应条件和等位基因特异性探针设计原则,实现10 ng DNA样本一次性分型30个等位基因多态性位点。基于改进的DNA连接酶中低通量基因分型方法,NOD1、NOD2基因与冠心病的关联分析发现,NOD2基因上rs1861759和rs751271位点在非高血压条件下与冠心病相关(P均<0.05),经Bonferroni多重检验校正后,相关性仍然显著(P均<0.05)。结论:本研究优化了DNA连接酶链式反应技术在设计上的关键点,联合使用多重PCR和毛细管电泳,建立了一种高准确性、低成本、满足基于中低通量位点分型的临床分子诊断和科研需求的基因分型新方法,并用该方法发现NOD2基因上的位点rs1861759和rs751271在非高血压条件下与冠心病相关。展开更多
文摘目的:以自发性2型糖尿病模型(dbdb)小鼠复制主动脉缩窄模型,观察糖尿病对心力衰竭的促进作用。方法:实验组选择7周龄的雄性dbdb小鼠,对照组选择同周龄雄性C57BL/6 J小鼠各15只,均通过主动脉缩窄术构建小鼠心力衰竭模型;采用血压计检测小鼠心率及血压改变,小动物超声心动仪检测心脏结构和功能变化,于术后8周收取小鼠心脏组织,Masson法观察心脏间质中胶原的沉积,苏木精-伊红观察心脏炎症浸润以及麦胚凝集素染色法检测心肌细胞肥厚面积。结果:基础条件下, dbdb小鼠的血糖明显高于C57小鼠,主动脉缩窄术后8周,与对照组相比, dbdb小鼠的心脏射血分数明显降低[野生型(WT)vs. dbdb:(41±2.3)%vs.(32±1.8)%,P<0.05],心功能显著恶化,心肌纤维化程度明显加重[WT vs. dbdb:(4.07±0.37)%vs.(5.85±0.48)%,P<0.05],以及心脏炎症浸润显著加重,dbdb小鼠的心肌细胞明显增大[WT vs. dbdb:(151±21)vs.(223±17),P<0.05)]。结论:糖尿病促进了主动脉缩窄术诱导小鼠心功能进一步加重。
文摘目的:本研究改进基于脱氧核糖核酸(DNA)连接酶的中低通量基因分型方法,并用此方法进行核苷酸结合寡聚结构域(NOD)样受体基因NOD1和NOD2与冠心病的关联分析。方法:通过多重聚合酶链式反应(PCR)预扩增增加连接模板分子数量,提高特异性连接效率,优化DNA探针设计,摸索连接反应温度、时间、循环圈数及连接酶种类实现等位基因特异性连接,通过荧光掺入PCR和毛细管电泳实现多种等位基因特异性产物一次性检测。Sanger测序验证此方法准确性后,利用此方法对NOD1和NOD2基因上的单核苷酸多态性(SNP)位点在1 555例冠心病患者和1887例对照受试者中进行分型和关联分析。结果:通过优化反应条件和等位基因特异性探针设计原则,实现10 ng DNA样本一次性分型30个等位基因多态性位点。基于改进的DNA连接酶中低通量基因分型方法,NOD1、NOD2基因与冠心病的关联分析发现,NOD2基因上rs1861759和rs751271位点在非高血压条件下与冠心病相关(P均<0.05),经Bonferroni多重检验校正后,相关性仍然显著(P均<0.05)。结论:本研究优化了DNA连接酶链式反应技术在设计上的关键点,联合使用多重PCR和毛细管电泳,建立了一种高准确性、低成本、满足基于中低通量位点分型的临床分子诊断和科研需求的基因分型新方法,并用该方法发现NOD2基因上的位点rs1861759和rs751271在非高血压条件下与冠心病相关。
