DiI标记的大鼠骨髓间充质干细胞与乳鼠心肌细胞在聚己内酯薄膜上接触共培养制作心肌补片的实验研究

目的探讨在聚己内酯薄膜上将DiI标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞接触共培养制作心肌补片的可能机制。方法选取5~6周龄SD大鼠2只,分离培养获得SD大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定表面抗原。选取乳鼠15只,分离培养获得乳鼠心肌细胞。BMSCs培养至3代,使用DiI染料标记BMSCs。在聚己内酯薄膜上将DiI标记的BMSCs与心肌细胞接触共培养并设为实验组,对照组中将心肌细胞替换为等量未标记的BMSCs。共培养后24 h在荧光显微镜下观察细胞生长情况,并用扫描电镜观察共培养情况。共培养后7 d对细胞进行免疫荧光染色检测心肌标志物表达,在荧光显微镜下观察聚己内酯薄膜上BMSCs表达心肌标志物的情况。共培养的第1、7天使用流式细胞术分析BMSCs的干细胞分化率。使用钙黄绿素单独对心肌细胞染色,再在聚己内酯薄膜上将其与DiI标记的BMSCs接触共培养,观察细胞间染料转移,并对细胞进行免疫荧光染色,检测缝隙连接蛋白43的表达,观察缝隙连接与接触共培养之间的关系。结果流式细胞术鉴定示BMSCs表面CD90、CD44H强阳性,CD11b/c、CD45阴性。共培养后24 h,荧光显微镜下观察到细胞依附于聚己内酯薄膜上,DiI标记的BMSCs发红光,未标记的心肌细胞不发光;扫描电镜下观察到聚己内酯薄膜上细胞数量多,细胞状态正常。共培养第7天,部分DiI标记的BMSCs表达心肌肌钙蛋白T、α-心肌肌动蛋白。流式细胞术分析示第7天实验组的干细胞分化率高于对照组[(20.12±0.15)%比(3.49±0.20)%,P<0.05]。共培养后第2天,缝隙连接蛋白43免疫荧光染色结果示部分BMSCs可见明显绿色点状荧光;共培养后第3天,染料转移试验示部分BMSCs发出明显绿色荧光。结论DiI标记的BMSCs与心肌细胞在聚己内酯薄膜上接触共培养可以制作心肌补片,并且接触共培养促进分化形成心肌补片的机制可能与缝隙连接以及缝隙连接介导的细胞间信号通路有关。

术前合并脏器灌注不良对A型主动脉夹层手术早期预后的影响

目的分析术前合并脏器灌注不良(OMP)对A型主动脉夹层(TAAD)手术早期预后的影响。方法收集2019年1月至2020年1月因TAAD于首都医科大学附属北京安贞医院接受手术治疗的405例患者的围手术期临床资料进行回顾性分析。按照是否合并术前OMP分为OMP组(140例)和无OMP组(265例)。比较2组一般资料和围手术期结果,分析术后死亡及主要不良事件(MAE)的危险因素。结果OMP组体外循环时间明显长于无OMP组,接受全主动脉弓置换联合支架象鼻植入术和下肢动脉转流术比例高于无OMP组[197(173,221)min比185(154,214)min、85.0%(119/140)比74.0%(196/265)、8.6%(12/140)比0.4%(1/265)](均P<0.05)。2组手术死亡率差异无统计学意义(P>0.05),但OMP组的MAE发生率明显高于无OMP组[44.3%(62/140)比24.2%(64/265)](P<0.001)。此外,OMP组术后机械通气时间和重症监护病房滞留时间明显长于无OMP组,术后急性肾损伤、脑卒中及脊髓损伤的发生率明显高于无OMP组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析发现,OMP个数≥2是TAAD患者术后死亡的独立危险因素(比值比=3.989,95%置信区间:1.307~12.176,P=0.015)。女性、体外循环时间>180 min和OMP是发生MAE的独立危险因素,而且随着OMP个数的增加MAE事件的发生风险增加(均P<0.05)。结论合并OMP的TAAD患者术中需要更长的体外循环时间、接受更高比例的主动脉弓部修复及下肢转流术,术后发生肾脏及神经系统并发症的比例更高。同时,OMP还延长了患者术后机械通气时间和重症监护病房滞留时间。虽然OMP不增加TAAD患者手术死亡率,但增加了MAE发生率。而且,随着OMP累及数量的增加,MAE的发生风险增加。

国人肥厚型心肌病基因型表型相关性的初步探索

目的初步探索国人肥厚型心肌病（HCM）患者的基因突变谱以及不同基因型表型相关性。方法对首都医科大学附属北京安贞医院心脏外科中心2013年至2016年收录的51例无血缘关系的HCM患者（男35例，女16例）进行外周静脉血采集并进行人类全外显子基因测序，分析7种主要突变基因：B肌球蛋白重链（MYH7）、肌球蛋白结合蛋白c（MYBPC3）、心肌肌钙蛋白T2（TNNT2）、心肌肌钙蛋白13（TNNI3）、原肌球蛋白1（TPM1）、重组人心室肌球蛋白轻链2（MYL2）和肌动蛋白C1（ACTC1）的突变情况，并将结果与临床特征比对并评估。结果共发现24例（47．1％）存在22种致病性或可能致病性的突变。90．9％（20／22）的突变只出现1次，而MYH7基因663位氨基酸和TNNI3基因157位氨基酸的突变均分别出现2次。突变基因MYBPC3、MYH7、TNNT2、TNN13、MYL2、TPM1和ACTC1分别占总突变例数的45．8％（11／24）、20．8％（5／24）、12．5％（3／24）、8．3％（2／24）、8．3％（2／24）、4．2％（1／24）和0。未发现致病或者可能致病的双突变。基因型阳性（24例）与阴性患者（27例）进行临床特征的比较后发现，晕厥史发生比例（19．6％对7．8％，P〈0．05）、最大左心室壁厚度[（22．8±2．6）mm对（20±3．4）mm，P〈0．05]、HCM家族史（20．8％对0，P〈0．05）和心尖肥厚患者数量（25．5％对11．8％，P〈0．05）差异均有统计学意义；两种主要突变基因MYBPC3与MYH7患者间临床特征对比后发现，左心室流出道梗阻发生率MYH7更高（80．0％对18．2％，P〈0．05）。结论MYBPC3是国人HCM患者中最常见的突变基因。基因型阳性的患者较基因型阴性的患者HCM表型更严重。特定基因的突变与临床表型的具体关系还需要更进～步的研究。

成人先天性房间隔缺损或室间隔缺损合并升主动脉扩张的治疗

目的探讨成人先天性房间隔缺损（ASD）或室间隔缺损（VSD）同时合并升主动脉扩张患者的临床特征和手术治疗预后结果。方法回顾性分析2010年2月至2017年1月在首都医科大学附属北京安贞医院接受外科手术的先天性房间隔缺损或室间隔缺损合并升主动脉扩张成人患者的临床资料，24例患者中男19例，女5例；年龄（40．7±14．4）岁。结果所有患者均接受外科手术治疗，术后症状均改善，无死亡。随访6-90个月，无置人起搏器、主动脉球囊反搏和真菌感染患者；未发生卒中和急性肾功能衰竭。所有患者生存良好。结论外科手术治疗成人先天性房间隔缺损或室间隔缺损合并升主动脉扩张患者安全、可行，适当的围手术期治疗和密切监测是手术成功的关键。