氢饱和生理盐水对重症急性胰腺炎大鼠肾损伤的保护机制

目的 探讨氢饱和生理盐水（H RS）对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肾损伤的保护机制.方法 采用实验研究方法.将72只大鼠采用随机数字表,分为假手术（SO）组、SAP组、HRS组3组,每组24只.SO组大鼠开腹,仅翻动胰十二指肠后关闭腹腔.SAP组和HRS组大鼠经胰胆管逆行注射5％牛磺胆酸钠（l mL/kg）,制备SAP模型.SO组和SAP组大鼠造模成功后5 min,经尾静脉注射普通生理盐水（6 mL/kg）,并皮下注射普通生理盐水（20 mL/kg）补液;HRS组大鼠经尾静脉注射HRS（6 mL/kg）,并皮下注射HRS（20 mL/kg）补液.处理后3、12、24 h分批处死大鼠,每个时相点8只.（1）检测血清Cr、BUN、IL-1β、IL-6水平和肾脏组织中髓过氧化物酶（MPO）.（2）对肾损伤进行病理学分级.（3）采用免疫组织化学染色检测肾脏组织中3-硝基酪氨酸及核因子-κB （NF-κB）.（4）采用Western blot法检测肾脏组织中核因子-κB抑制因子（IκB）、TNF-α蛋白.正态分布的计量资料以-x±s表示,成组设计的多个样本均数比较采用重复测量的方差分析,两组间比较采用t检验.计数资料比较采用x2检验.结果 （1）SO组、SAP组、HRS组大鼠血清Cr在处理后3h分别为（30±6）μmol/L、（51 ±8） μmol/L、（46 ±5） μmol/L,12 h分别为（32±6）μmol/L、（80±10） μmol/L、（42±7）μmol/L,24 h分别为（28±5）μmol/L、（100±11） μmol/L、（58±12） μmol/L.SO组、SAP组、HRS组大鼠血清BUN在处理后3h分别为（5.1±0.6）mmol/L、（9.0±1.1） mmol/L、（8.1±1.3）mmol/L,12 h分别为（5.0±0.7）mmol/L、（14.9±2.9）mmol/L、（8.4±1.2） mmol/L,24 h分别为（4.6±1.0） mmol/L、（22.6±1.9） mmol/L、（13.7 ±2.6）mmol/L.SO组、SAP组、HRS组大鼠血清IL-1β在处理后3h分别为（71±9）pg/mL、（192±11） pg/mL、（126±19） pg/mL,12 h分别为（67±11） pg/mL、（279±18） pg/mL、（170±16） pg/mL,24 h分别为（72±12） pg/mL、（322±24） pg/mL、（203±30） pg/mL.SO组、SAP组、HRS组大鼠血清IL-6在处理后3h分别为（121±9）pg/mL、（249±26） pg/mL、（153±16） pg/mL,12h分别为（114±19） pg/mL、（408±23） pg/mL、（252±21） pg/mL,24 h分别为（118±10） pg/mL、（452±29） pg/mL、（285±26） pg/mL.SO组、SAP组、HRS组大鼠肾脏组织MPO在处理后3h分别为（0.44 ±0.04） U/g、（0.79±0.08） U/g、（0.56±0.05） U/g,12 h分别为（0.49±0.07） U/g、（1.45±0.10）U/g、（0.84±0.06） U/g,24 h分别为（0.48±0.07） U/g、（1.85±0.20） U/g、（1.21±0.05） U/g.SO组、SAP组、HRS组大鼠血清Cr在处理后不同时相点（3、12、24 h）比较,差异均有统计学意义（F=23.013,84.858,109.080,P＜0.05）;BUN在处理后不同时相点（3、12、24 h）比较,差异均有统计学意义（F=32.830,59.338,205.494,P＜0.05）;IL-1β在处理后不同时相点（3、12、24 h）比较,差异均有统计学意义（F=156.462,384.787,231.659,P＜0.05）;IL-6在处理后不同时相点（3、12、24h）比较,差异均有统计学意义（F=105.129,309.131,413.937,P＜0.05）;肾脏组织MPO水平在处理后不同时相点（3、12、24 h）比较,差异均有统计学意义（F=72.305,658.698,237.924,P＜0.05）.①大鼠血清IL-1β水平：处理后3、12、24 h SAP组与SO组比较,差异均有统计学意义（t=24.500,28.140,26.150,P＜0.05）;HRS组与SO组比较,差异均有统计学意义（t=7.399,15.000,11.470,P＜0.05）;HRS组与SAP组比较,差异均有统计学意义（t=8.519,12.620,8.570,P＜0.05）.②大鼠血清IL-6水平：处理后3、12、24 h SAP组与SO组比较,差异均有统计学意义（t=24.080,28.425,26.352,P＜0.05）;HRS组与SO组比较,差异均有统计学意义（t=4.930,11.086,16.956,P＜0.05）;HRS组与SAP组比较,差异均有统计学意义（=8.811,14.370,12.220,P ＜0.05）.③肾脏组织MPO水平：处理后3、12、24 h SAP组与SO组比较,差异均有统计学意义（t=11.070,22.240,18.290,P＜0.05）;HRS组与SO组比较,差异均有统计学意义（=5.301,10.738,24.000,P＜0.05）;HRS组与SAP组比较,差异均有统计学意义（t=6.895,14.790,8.781,P＜0.05）.（2）SO组大鼠处理后12h肾损伤病理学分级0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为8、0、0、0只,SAP组分别为0、0、3、5只,HRS组分别为0、2、6、0只,3组比较,差异有统计学意义（x2=19.957,P＜0.05）.SAP组、HRS组分别与SO组比较,差异均有统计学意义（x2=13.472,13.714,P＜0.05）;HRS组与SAP组比较,差异有统计学意义（x2=7.361,P ＜0.05）.（3）免疫组织化学染色检测结果显示：SO组大鼠肾脏组织中3-硝基酪氨酸阳性表达量为0.001 0±0.0003,SAP组为0.053 0±0.012 0,HRS组为0.015 0±0.005 0,3组比较,差异有统计学意义（F=128.452,P＜0.05）.SAP组、HRS组分别与SO组比较,差异均有统计学意义（t=13.699,8.838,P＜0.05）;HRS组与SAP组比较,差异有统计学意义（t=9.244,P＜0.05）.SO组大鼠肾脏组织中NF-κB阳性表达量为0.003 0±0.001 5,SAP组为0.491 0 ±0.108 0,HRS组为0.170 0±0.042 0,3组比较,差异有统计学意义（F=138.726,P＜0.05）.SAP组、HRS组分别与SO组比较,差异均有统计学意义（t=14.367,12.769,P＜0.05）;HRS组与SAP组比较,差异有统计学意义（t=8.760,P＜0.05）.（4）Westernblot检测结果显示：处理后12 h SO组大鼠肾脏组织中IκB相对表达量为0.816±0.153,TNF-α相对表达量为0.124±0.033;SAP组分别为0.030±0.009和0.959 ±0.113;HRS组分别为0.404±0.090和0.523±0.094.3组大鼠肾脏组织中IκB、TNF-α相对表达量比较,差异均有统计学意义（F =44.037,69.172,P＜0.05）.SAP组、HRS组IκB相对表达量分别与SO组比较,差异均有统计学意义（t=8.883,4.020,P＜0.05）;HRS组与SAP组比较,差异有统计学意义（t=7.162,P＜0.05）.SAP组、HRS组TNF-α相对表达量分别与SO组比较,差异均有统计学意义（t=12.286,6.937,P＜0.05）;HRS组与SAP组比较,差异有统计学意义（t =5.138,P＜0.05）.结论 HRS对SAP肾损伤的保护机制可能与其清除自由基,抑制IκB的硝基化、降解,以及抑制NF-κB的激活,从而减少下游炎症因子产生有关.