性别判定基因突变与男性不育症相关性的研究

采用两对引物的多重聚合酶链反应(mPCR)技术,对28例镜下无精子、先天性睾丸发育不良男性不育症患者性别决定基因(SRY基因)扩增。一对引物特异于SRY基因序列称为引物对A,扩增片段长为280bp,另一对引物B,可从X染色体及Y染色体分别扩增出两个DNA片段,分别为590bp、355bp。在确定SRY基因无大缺失情况下,用引物对A行单链构象多态性分析(PCR/SSCP),检测有无基因突变。结果发现有7例患者SSCP与正常男性不同,可能有突变。进而用Sanger氏的双脱氧末端终止法测该7例患者280bp片段DNA序列,有3例在128密码子发现A→T突变;使原赖氨酸的密码子突变为终止密码(AAG→TAG)。结果提示部分镜下无精子、先天睾丸发育不良男性不育症患者可能与性别决定基因突变有一定的相关。

新生儿谷胱苷肽S转移酶μ1基因缺失状况的研究

谷胱苷肽S转移酶μ1（glutathioneStransferasesμ1，CSTμ1）对解毒香烟烟雾中的苯并（a）芘等致癌物有重要作用。现已证实正常人中约有50％缺失这种基因，这暗示将增加了肺癌发病的危险性。为了达到早期预防与预测，给新生儿以优育指导。本文采用双重PCR技术对106例新生儿脐血DNA进抒GSTμ1基因检测，并以健康人为对比，研究其缺失率为44．7％，同时新生儿与健康成人不同年龄组、新生儿男、女性别与成人男、女性别缺失率比较，经统计学卡方检验均无显著差异。提示GSTμ1基因缺失是新生儿自身遗传性不良因素，他（她）们如生活在香烟烟雾环境中，发生肿瘤危险性比无GSTμ1缺失的新生儿可能性大。并且通过本研究建立一种快速、准确的基因检测方法，有利于广泛群体筛查，应用临床及科学地指导优育有一定重要意义。

白血病p16基因纯合子缺失的研究

为探讨白血病ｐ１６基因缺失的发生率及其与疾病预后的关系。对４８例初发的白血病患者用多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法扩增ｐ１６基因外显子１及外显子２，进行ｐ１６基因缺失研究。４８例患者中有ｐ１６基因缺失者４例，分别为：Ｍ２２例，非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）并发急性Ｂ淋巴细胞白血病（ＢＡＬＬ）、慢性髓性白血病（ＣＭＬ）急淋变各１例。有ｐ１６缺失的４例患者均病情进展迅速，治疗效果差，患者在短期内死亡。提示：ｐ１６基因缺失在部分白血病的发生、发展中起重要作用；

鼻咽癌肿瘤c-myc基因表达及p16基因失活的研究

目的 以原发性鼻咽癌为研究对象 ,探讨p16抑癌基因 ,myc家族癌基因在鼻咽癌发生、发展及其生物学行为的变化规律。方法 用多重聚合酶链反应 (multiplepolymerasechainreaction ,MPCR)、限制性内切酶PCR、免疫组化及逆转录PCR(reversetranscriptasePCR ,RTPCR)方法 ,检测 6 9例鼻咽癌活检肿瘤组织中 ,P16基因纯合缺失、甲基化、p16基因蛋白表达 (免疫组化 )、c myc基因表达等情况。结果 P16基因纯合缺失 7例 ,甲基化 11例 ,总失活率为 2 6 .1% (18/6 9)。免疫组化检测p16基因蛋白表达阴性 6 0 9% (4 2 /6 9) ;阳性 39.1% (2 7/6 9)。RTPCR ,myc基因检测表达结果 73.9% (5 1/6 9) ,无表达者 2 6 .1% (18/6 9)。结论 研究表明鼻咽癌发生与p16抑癌基因失活、癌基因激活有着密切关系。

苯丙氨酸脱氨酶cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达及酶法合成L-苯丙氨酸

利用基因重组技术 ,在大肠杆菌中克隆并表达苯丙氨酸脱氨酶 (PAL) (EC4 .3 .1 .5) ,并应用此酶转化肉桂酸生成L 苯丙氨酸。方法是将欧芹苯丙氨酸脱氨酶cDNA亚克隆到组成型表达载体pMG3 6e启动子P3 2下游 ,以菌落PCR法鉴定插入片段的大小和方向都正确的克隆 ,进而以HPLC检测肉桂酸浓度的方法鉴别重组质粒有催化肉桂酸生成L 苯丙氨酸的酶活力。结果获得能表达PAL酶活性的阳性克隆 ,在pH1 0 ,含 1 .0 %肉桂酸、8.0mol/L氨的转化液中 ,3 0℃反应 2 0h ,肉桂酸重量转化率可达 60 %。该基因工程菌有希望用于工业化生产L 苯丙氨酸。

肥厚型心肌病患者血管紧张素转化酶基因型分布

为探讨血管紧张素 1转化酶 (ACE)基因插入 /缺失 (I/D)多态性与国人肥厚型心肌病 (HCM)和高血压合并左心室肥厚 (HH)的相关情况 ,采用PCR方法检验 4 0例HCM患者 ,50例HH患者和 61例对照组的基因型。结果HCM组D等位基因频率为 0 .51 3,显著高于对照组 ( 0 .34 4,P <0 .0 5)和HH组 ( 0 .360 ,P <0 .0 5) ,II基因型频率为0 .30 0 ,明显低于对照组 ( 0 .50 8,P <0 .0 5)。提示国人ACE基因D等位基因频率在肥厚型心肌病中明显增高 ,II基因型频率较低。

应用多重PCR技术检测性器官异常患者的性别决定基因

采用针对人SRY基因及X与Y染色体同源序列的两对引物进行多重聚合酶键反应技术检测204例新生儿脐血DNA，男性均显示590bp、355bp及280bp3条扩增带，女性只有590bp1条扩增带，性别鉴定准确率为100％。又检测47例性器官异常患者，13例社会性别为女性者只出现590bp扩增带，与核型性别结果一致。34例社会性别为男性者中，有2例SRY基因检测结果明性，只出现590bp带，核型为46,XX，证明这两例患者社会性别不相符，经病理证实后应诊断为女性假两性畸形。

应用多重聚合酶链反应技术检测微嵌合现象

目的 为器官移植中微嵌合现象的检测提供简便可靠的实验方法。方法 应用多重聚合酶链反应 (PCR)技术检测肾移植术后微嵌合现象 ,并对 89例男性供肾的女性肾移植患者术后微嵌合现象的发生进行检测分析。结果 多重PCR法灵敏度为 1:10 4 ,89例男性供肾的女性病人按时间分组后嵌合发生率分别为 37.0 %、5 1.5 %、75 .9% ,随生存时间延长微嵌合发生率升高。结论 应用多重PCR法检测微嵌合现象特异性好、灵敏度高 (1:10 4 )、操作简便 ,为临床应用和科学研究微嵌合现象提供简便可行的操作方法。

重组人Flt3配体在大肠杆菌中的表达、纯化与功能鉴定

目的 建立重组人Flt3配体 (rhFL)的原核高效表达系统及目标蛋白的纯化途径 ,为大规模获得rhFL产品 ,促进干细胞体外扩增、移植等新技术在临床的应用创造条件。方法 将FL胞外段cDNA与pProEXHT载体连接 ,重组体引入大肠杆菌并在异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导下表达 ;提取包涵体 ,经变性、复性等处理 ,用金属离子螯合层析纯化表达产物 ;观察纯化所得rhFL刺激CD3 4+ 细胞的增殖情况。结果 rhFL的表达量约占菌体蛋白总量的 15 % ,经亲和纯化纯度达 90 %以上 ;rhFL +G CSF +Epo刺激CD3 4+ 细胞增殖约 40 0倍。结论 获得了rhFL在大肠杆菌中的高效表达 ,并初步建立了产物纯化途径 ,纯化后的rhFL具有较强的刺激造血干