重组结核分枝杆菌11kDa蛋白鉴别潜伏性结核感染与卡介苗接种的研究

目的评价重组结核分枝杆菌11kDa(相对分子质量为11000)蛋白(简称"重组11kDa蛋白")在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种鉴别中的应用。方法由首都医科大学附属北京胸科医院联合北京市昌平区结核病防治所、北京市怀柔区结核病防治所和北京市大兴区结核病防治所,于2014年7月至2016年3月在以上3个区的高校和工厂招募健康志愿者。共计招募3001名志愿者,所有志愿者体检合格,均签订知情同意书。对所有志愿者采用Mantoux法进行重组11kDa蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)同体双臂皮肤试验,分别于不同前臂皮内注射0.1ml重组11kDa蛋白(10μg/ml)和0.1ml TB-PPD(50U/ml),观察注射后72h后的皮肤反应。于皮肤试验前采集所有志愿者的静脉血,进行体外γ-干扰素释放试验(IGRA)检测。采用"一致率(%)"和"一阶一致性系数(the first-order agreement coefficient,AC1)比较重组11kDa蛋白皮肤试验、TB-PPD试验及IGRA结果的差异。3001名志愿者均接受3种方法检测,其中475名3种检测结果均为阴性的受试者,采用数字表法按随机双盲的原则,以2∶1的比例接种卡介苗(318名;失访8例)和安慰剂(147名;失访2例),接种3个月后再次进行重组11kDa蛋白皮肤试验、TB-PPD皮肤试验及IGRA,采用"一致率(%)"和"AC1"比较其结果差异。结果健康志愿者潜伏性结核感染筛查中,IGRA阳性率(34.4%,1033/3001)明显高于重组11kDa蛋白(32.2%,966/3001),差异有统计学意义(χ^2=22.787,P<0.001);IGRA与重组11kDa蛋白的一致率为93.4%(2804/3001),AC1值为0.882(95%CI=0.866~0.898),两者有较好的一致性。TB-PPD阳性率(47.7%,1430/3001)明显高于重组11kDa蛋白(32.2%,966/3001),差异有统计学意义(χ^2=182.146,P<0.001);TB-PPD与重组11kDa蛋白的一致率为60.6%(1819/3001),AC1值为0.243(95%CI=0.207~0.279),两者的一致性较差。卡介苗接种鉴别研究中,接种卡介苗的志愿者重组11kDa蛋白的阳性率(1.3%,4/318)与IGRA(3.1%,10/318)比较,差异无统计学意义(χ^2=2.571,P=0.109);一致率为95.6%(304/318),AC1值为0.954(95%CI=0.929~0.979),两者有较好的一致性。重组11kDa蛋白的阳性率(1.3%,4/318)低于TB-PPD(56.3%,179/318),差异有统计学意义(χ^2=167.350,P<0.001);TB-PPD与重组11kDa蛋白的一致率为42.5%(135/318),AC1值为0.025(95%CI=-0.106~0.155),两者的一致性较差。接种安慰剂的志愿者重组11kDa蛋白的阳性率(4.1%,6/147)与IGRA(1.4%,2/147)比较,差异无统计学意义(χ^2=2.667,P=0.109);一致率为95.9%(141/147),AC1值为0.957(95%CI=0.921~0.993),两者有较好的一致性。TB-PPD的阳性率(17.7%,26/147)高于重组11kDa蛋白(4.1%,6/147),差异有统计学意义(χ^2=15.385,P<0.001),一致率为82.3%(121/147),AC1值为0.781(95%CI=0.690~0.871),两者有较好的一致性。结论重组11kDa蛋白在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种方面与IGRA有很好的一致性,可作为潜伏性结核感染者筛查与卡介苗接种鉴别的候选诊断试剂。

脑脊液检测在结核性脑膜炎早期诊断中的研究进展

结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)是肺外结核中最严重的临床表现类型,具有较高的病死率及致残率,故早期、快速诊断及鉴别诊断TBM对疾病的治疗和预后至关重要。笔者通过综述近年来脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)检测在TBM早期诊断及与化脓性脑膜炎、病毒性脑膜炎(viral meningitis,VM)和新型隐球菌性脑膜炎(cryptococcul neoformans meningitis,CNM)的鉴别诊断方法,旨在为TBM的早期诊断与鉴别诊断提供一定的诊疗思路。

脑脊液检测在结核性脑膜炎早期诊断中的研究进展

结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的以脑膜为主的非化脓性炎性疾病。虽然TBM仅占结核病的1%左右[1],但却是结核感染最严重的表现形式,具有较高的发病率和死亡率[2]。由于TBM早期症状不典型,误诊率多在30%左右[3],常被误诊为化脓性脑膜炎、新型隐球菌性脑膜炎(cryptococcul neoformans meningitis,CNM)和病毒性脑膜炎(viral meningitis,VM)等,导致早期诊断困难,延误治疗,显著降低患者预后质量。有研究表明,50%的TBM患者最终导致死亡或遗留严重的神经系统后遗症[1],多发生在起病的6个月内[4],认为与诊断和治疗的延迟有关[3]。

糖皮质激素辅助治疗血行播散性肺结核的临床效果观察

目的探讨急性血行播散性肺结核早期应用糖皮质激素辅助治疗的临床疗效观察。方法2010年3月至2013年5月首都医科大学附属北京胸科医院急诊科收治的72例急性血行播散性肺结核患者，按病历号设立随机种子，建立伪随机函数，随机分为治疗组（36例）和对照组（36例），两组均给予标准抗结核方案治疗[3HR（L2）ZE／6～9HR（L2）E]，治疗组在强化期应用泼尼松治疗4周。本研究采用SPSS13．0统计学软件，临床症状改善时间采用t检验；胸片改善有效率及药物性肝损伤发生率采用χ^2检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果发热症状好转时间在治疗组和对照组分别为（2．5±0．5）d和（7．5±0．5）d，差异有统计学意义（t=-42．43，P〈0．01）；4周后两组胸片的有效率分别为86．1％（31／36）和58．3％（21／36），差异有统计学意义（χ^2=6．92，P〈0．01）；药物性肝损伤发生率分别为5．6％（2／36）和27．8％（10／36），差异有统计学意义（χ^2=6．40，P〈0．05）。结论急性血行播散性肺结核早期抗结核治疗的同时辅助应用糖皮质激素有助于临床症状改善和胸片病变的吸收好转，并能够降低药物性肝损伤的发生率。

针对世界卫生组织对卡介苗两次文件立场观点差异的探讨

对世界卫生组织1995年发布的卡介苗声明与2004年发布的卡介苗接种立场文件中的相关观点进行比较、分析、解读，为重新认识卡介苗提供参考依据。同时，从结核病预防控制策略角度，探讨进行卡介苗对青少年及成年人保护效力临床评价的必要性，并对如何评价提出建议，以期充分发挥卡介苗的作用。

SYBR Green I荧光PCR熔解曲线鉴定鸟分枝杆菌方法的建立及初步应用

目的基于SYBR Green I荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium.MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插人序列ISI311为检测靶标设计引物,在60 C的退火温度下,建立鉴定MA的SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA.检测限为5.6x 102 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列ISI311为基础建立的SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。