医科大学附属医院基础医学研究生培养中存在问题的探讨

医科大学附属医院基础医学专业研究生在临床和基础研究结合方面具有一定的特点,但随着社会的发展在招生和培养中出现了一些新的变化。结合多年来在医科大学附属医院从事基础医学专业研究生招生和培养的实践提出了一些新见解。

北京地区对卷曲霉素和阿米卡星耐药结核分枝杆菌的rrs和tlyA基因突变研究

目的探讨北京地区结核分枝杆菌卷曲霉素（Cm）和阿米卡星（Am）耐药与rrs基因和ayA基因突变相关性。方法采用比例法对保存的临床菌株进行Cm和Am药敏试验测定，并对其中的临床菌株rrs基因和tlyA基因进行PCR、测序分析。筛选得到了10株Am耐药菌株、25株Cm耐药菌株、15株Am和Cm交叉耐药菌株，并选择了30株敏感菌株作为对照分析。数据采用SPSS17．0进行统计分析，组间率的比较采用Fisher精确概率法检验，P〈0．05为差异有统计学意义。结果tlyA基因突变结果显示，Cm耐药菌株有6株突变（24．0％，6／25），与敏感菌株相比差异有统计学意义（P〈0．05），Am耐药菌株、Am和Cm交叉耐药菌株与敏感菌株相比差异无统计学意义（P〉0．05）；在rrs基因检测中，Am耐药、Cm耐药、Am和Cm交叉耐药突变率分别有30．0％（3／10）、8．0％（2／25）和26．7％（4／15），敏感菌株中也有10．0％（3／30）突变株，3组耐药菌株与敏感菌株比较，差异均无统计学意义（F=2．353、0．06、1．161，P值均〉0．05）。在3组中，rrs基因A1401G突变位点突变比例分别是10．0％（1／10）、8．0％（2／25）和13．3％（2／15），1株在Am和Cm交叉耐药双位点突变，共计6株A1401G位点突变菌株，与敏感菌株比较无统计学意义（P〉0．05）。另一突变位点C1402T在Am、Am和Cm交叉耐药中各1株。结论结核分枝杆菌tlyA基因可能与Cm耐药相关，与Am耐药不相关；rrs基因A1401G和C1402T突变可能与Am和Cm交叉耐药有关。

Toll样受体在结核病免疫应答中的作用

结核病(Tuberculosis)主要是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的重大传染性疾病。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)在宿主的抗结核免疫应答中发挥重要作用。研究表明,TLR1、2、4、6和9与宿主抗MTB感染有关,其中TLR2的作用更为突出。免疫应答的早期阶段,TLR2介导了巨噬细胞的活化,通过产生具有直接杀伤效应的分子或者诱导宿主细胞的凋亡抑制MTB的增殖。然而TLR2介导的信号通路也可通过降低MHC-Ⅱ分子的表达来削弱抗原递呈的能力,促进MTB在宿主内的存活。近几年临床研究发现TLRs多态性位点与结核病易感有关也从侧面证实了TLRs在抗MTB感染中发挥重要作用。

结核分枝杆菌thyA基因突变与对氨基水杨酸钠耐药关系的研究

目的了解Mtb临床分离菌株中对于对氨基水杨酸钠(PAS)的耐药率及PAS耐药性与thyA基因突变的关系。方法从肺结核患者的痰标本中分离并鉴定Mtb 96株,采用比例法、全基因测序的方法检测上述Mtb临床菌株对PAS的耐药性情况及其thyA基因突变情况。结果 96株Mtb中,65株为PAS敏感菌株和31株为PAS耐药菌株。以Mtb标准菌株H37Rv为对照,筛选敏感和耐药菌株中的thyA基因突变率分别是46.15%(30/65)、70.97%(22/31),突变多为单个碱基的缺失和插入突变,其中又以第19位密码子缺失C、第168位密码子缺失C为主,在耐药中所占比率分别是54.84%(17/31)、25.81%(8/31),其在敏感菌株中的比率也分别是35.38%(23/65)、12.31%(8/65)。结论耐药菌株中thyA基因的突变频率明显高于敏感菌株,thyA基因可能是PAS耐药潜在靶点,但未发现其特异性突变位点。

40例肺结核患者病情进展中白细胞介素-8表达变化的初步研究

目的初步探索40例结核病患者外周血IL-8表达变化及其在肺结核病情进展中的表达变化。方法纳入对象为2011年5月至2013年2月首都医科大学附属北京胸科医院的40例初治肺结核患者，以同期本院15名健康体检者作为健康对照，并根据临床诊断信息对肺结核患者进行分组，将其中从诊断、治疗及治愈后复查阶段都拿到血液样品的8例肺结核患者，作治疗前后比较分析，纳人为跟踪调查组；按照细菌学及影像学检查结果，将另外32例分为病情缓和组（痰菌阴性、肺部无空洞，17例）与病情严重组（痰菌阳性、肺部有空洞，15例）。采集8例跟踪调查组患者治疗前、治疗中（治疗开始后2～3个月之间）和治疗结束后（停药后1～3个月之间）抗凝外周血；另外32例病情缓和组与病情严重组患者只收集治疗前抗凝外周血。加入结核分枝杆菌总蛋白刺激培养，再用酶联免疫吸附法检测血浆中的IL-8表达量。用SPSS17．0统计软件进行Mann-WhitneyU检验以分析健康对照组、病情缓和组及病情严重组患者之间IL-8表达是否存在差异，另外用Wilcoxon检验分析肺结核患者治疗前、治疗中及治疗后IL-8表达是否存在差异。1L-8检测数值用伍±s）表示，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果经刺激诱导过的外周血IL-8表达量在病情严重组[（176．7±133．2）ng／m1]及病情缓和组[（39．6±52．2）ng／m1]均显著高于健康对照组[（7．1±6．3）ng／m1]（U=5，P=0．000008；U=62，P=0．013）。并且病情严重组IL-8表达水平也显著高于病情缓和组（U=37，P=0．001）。另外，肺结核患者治愈后IL-8表达水平[（5．9±3．6）ng／ml]与治疗前[（34．9±33．7）ng／m1]和治疗中[（51．7±34．2）ng／m1]相比有显著的降低（Z=-2．240，P=0．025；Z-02．521，P=0．012）。结论IL-8表达水平与肺结核患者病情转归相关。

结核分枝杆菌thyA基因突变与对氨基水杨酸钠耐药关系的研究

目的了解Mtb临床分离菌株中对氨基水杨酸钠（PAS）的耐药率及PAS耐药性与thyA基因突变的关系。方法从肺结核患者的痰液或咽拭子标本中分离并鉴定Mtb96株，采用比例法、PCR的方法检测上述Mtb临床菌株对PAS的耐药性情况及其thyA基因突变情况。结果分离得到的96株Mtb中，65株为PAS敏感菌株和31株为PAS耐药菌株。以Mtb标准菌株H37Rv为对照，筛选敏感和耐药菌株中的thyA突变率分别是46．1％（30／65）、71％（22／31），突变多为单个碱基的缺失和插入突变，其中又以第19位密码子缺失C、第168位密码子缺失C为主，在耐药中所占比率分别是54．8％（17／31）、25．8％（8／31），其在敏感菌株中的比率也分别是35．5％（23／65）、12．3％（8／65）。结论thyA基因可能是PAS耐药潜在靶点，但本研究未发现其特异性突变位点。

中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性与结核病易感性的相关性研究

目的筛选中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性位点，并分析其与结核病易感性的相关性。方法在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点，再用连接酶特异检测技术在大样本中进行SNP分型，并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性的相关性。结果共筛选到4个TIRAP基因编码区多态性位点。G394A位点在结核病人中的突变频率高于健康人，该位点等位基因频率在两组人群中差异具有统计学意义（P〉0．05）。G164A位点跟结核病病情有关，复治病人与健康人该位点等位基因差异具有统计学意义（P〈0．05），同时肺部形成空洞病人与菌阳病人突变率均比健康人要低。结论TIRAP基因编码区多态性可能是中国汉族人群结核病发生发展的危险因素。

中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性与结核病易感性的相关性研究

目的筛选中国汉族人群Toll／白细胞介素1受体结构域衔接蛋白（TIRAP）基因编码区多态性位点，并分析其与结核病易感性的相关性。方法在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点，再用连接酶特异检测技术在大样本中进行单核苷酸多态性（SNP）分型，并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性的相关性。结果共筛选到4个TIRAP基因编码区多态性位点。G394A位点在结核病病人中的突变频率高于健康人，但是该位点等位基因频率在两组人群中的差异没有统计学意义（P〉0．05）。G164A位点跟结核病病情有关，复治病人与健康人该位点等位基因差异具有统计学意义（P〈0．05），同时肺部形成空洞病人与菌阳病人突变率均比健康人要低。结论TIRAP基因编码区多态性可能是中国汉族人群结核病发生发展的危险因素。

结核分枝杆菌ATP结合盒超家族外排泵的研究进展

近年来，结核分枝杆菌的耐药菌株日益增多，使得治疗难度也在加大。其耐药主要是通过细胞壁的阻碍作用和基因突变所导致。但是仅凭这两种因素不能够完全解释分枝杆菌的耐药机制。据研究，分枝杆菌的主动外排是另一种重要的耐药机制。主动外排泵对结核分枝杆菌的耐药方面的影响也越来越受人们的关注，而外排泵的类型有很多，其中ATP结合盒超家族是外排泵家族中的大家族，在外排作用中起到了重大影响，通过总结近年来发表的文献，现对结核分枝杆菌ATP结合盒超家族的抑制剂和作用底物的研究进行了综述。

应用不同引物检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变对结果判定的影响

目的探讨以PCR-SSCP技术为基础,应用不同引物检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变以及固定/终止液的组成对判定结果可能会产生的影响。方法采用2对引物,经PCR-SSCP检测,利用银染显色的方法显现耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变的DNA单链位移。结果对比标准株H37Rv及H37Ra gyrA基因的单链带位置,在被测试的89株菌株中发生位置变化的;对氧氟沙星的耐药程度>10μg/ml的分别有4株与14株,约占89株检测总数的4.49%和87.5%,对氧氟沙星的耐药程度介于≥2且≤10μg/ml之间的26株中,有与标准株gyrA基因的单链带位置发生改变的分别有20株与7株,约占89株检测总数的22.47%和7.87%;对氧氟沙星的耐药程度<2μg/ml的47株中分别有2株与11株,约占89株检测总数的2.25%和12.36%。用含5.0%乙醇和4.5‰冰醋酸配比的固定/终止液可为利用银染法显现核酸凝胶分离DNA提供温和的反应环境,操作过程方便,观测效果较为理想。结论应用不同引物检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变会对结果的判定产生影响,采用含5.0%乙醇、4.5‰冰醋酸的固定/终止液可为应用非变性聚丙烯酰胺凝胶分离核酸检测的银染着色法提供温和的反应环境,并产生清晰可辨的被检测标本的DNA单链条带。