重视分子病理诊断新技术提高结核病病理学诊断水平

中国是结核病高负担国家,在结核病诊断中面临很多问题。分析2018年WHO发布的全球结核病报告中国结核病诊断在以下3个方面需要继续加强:(1)肺结核细菌学确诊率低,仅为31%,远低于世界平均水平57%;(2)耐药结核病发现率低,不到20%耐多药或利福平耐药患者被发现;(3)肺外结核发现率低,全球报告的结核病患者中15%为肺外结核,但中国报告的肺外结核患者仅占5%。

结核病分子病理学诊断技术临床应用进展

结核病(tuberculosis, TB )已经存在数千年.仍然是全球十大死因之一,死亡率在传染性疾病中排名第一,严重威胁人类健康[1]。病理学是诊断结核病的重要途径.尤其在痰菌阴性肺结核和肺外结核等疑难患者的诊断中发挥了重要作用[2]。传统的结核病病理学诊断主要依靠常规病理学及抗酸染色,可与其他常见的肿瘤和感染性疾病进行鉴别[3];但与其他一些肉芽肿性疾病,例如非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria, NTM )病的鉴别诊断中遇到很多困难。

肺结核患者肺组织微生物组特征研究

目的探讨肺结核患者肺部病灶坏死区、肉芽肿区和正常肺区的微生物组基本特征.方法选取2016-2017年首都医科大学附属北京胸科医院10例临床及病理确诊为肺结核患者的福尔马林周定石蜡包埋(FFPE)的组织标本.通过显微切割技术分别获得FFPE组织的坏死区、肉芽肿区和正常肺区。采用高通量测序的方法,检测其微生物组特征.结果肺结核患者肺部切除标本中主要的微生物类群(门水平,相对丰度>1%)有Proteobacteria、Actinobacteria、Firmicutes、TM7和Bacteroidetes。在门水平上,坏死区、肉芽肿区和正常肺区的微生物群落组成未见差异。在属水平上,主要有7个类群(相对丰度>1%):坏死区、肉芽肿区、正常肺区相对丰度Ochrobactrum分别为( 50.70 ±6.76)%,(56.18 土 7.50 )%、( 61.31 ±7.95 )%;Sphingomonas 分别为(7.50 ±2.07 )%、(7.69 ±1.29 )%、( 3.81 ±2.08 )%;Corynebacterium 分别为(5.39 ± 2.39 )%、(5.23 ± 1.39 )%、( 7.43 ± 3.56 )%;Brevundimonas 分别为(1.67 ± 0.42 )%、(1.75 ± 0.67 )%、( 2.09 ± 0.34 )%;Brevibacterium 分别为(2.38 ± 2.23 )%、(2.60 ± 2.60 )%,(2.29 ±0.64)%;Sphingobacterium 分别为(0.72 ± 0.31 )%、( 0.78 ± 0.26)%,( 1.20 ± 0.38 )%和Enhydrobacter 分别为(1.25 ± 1.28 )%.(0.31 ±0.19)%.(0.67 ±0.80)%..基于Bray-Curtis距离的Adonis分析结果表明,在属水平上,坏死区和正常肺区,肉芽肿区和正常肺区中微生物群落组成差异有统计学意义(F值分别为3.94和4.76,P值分别为0.005和0.002 )。Mycobacterium的相对丰度非常低,主要存在于肺结核病灶的坏死区[(0.81 ± 1.92 )%].配对样品检验结果表明Mycobacterium的相对丰度在坏死区[(0.81 ± 1.92 )%]和肉芽肿区[(0.01 ±0.01 )%]、坏死区和正常肺区[(0.01 ±0.02)%]中差异有统计学意义(Z值分别为2.10和-2.37, P值分别为0.036和0.018 ).结论结核病患者肺部自坏死区、肉芽肿区到止常肺的组织变化中,Sphingomonas. Enhydrobacterx Kocuria和Mycobacterium的相对丰度整体呈下降趋势.而Ochrobactrum和Sphingobacterium的相对丰度总体呈上升趋势。肺结核患者肺部菌群的变化特征可能与肺结核的发病有重要关系。

小细胞肺癌患者骨髓肿瘤细胞的检测及其临床价值

目的探讨小细胞肺癌(SCLC)患者骨髓肿瘤细胞的检测与临床特征及疗效和预后的关系。方法前瞻性纳入2018年1月至2022年10月首都医科大学附属北京胸科医院诊断的初治SCLC患者113例,治疗前抽取骨髓液分别采用液基细胞学检测肿瘤细胞、采用差相富集-免疫荧光原位杂交(SE-iFISH)平台检测播散肿瘤细胞(DTCs)。采用χ^(2)检验分析两种方法检测结果与患者临床特征及疗效的相关性,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用Cox比例风险回归模型进行生存分析。结果骨髓液基细胞学阳性率为15.93%(18/113),液基细胞学阳性患者中肝及骨转移率均高于阴性患者(肝转移率分别为55.56%和11.58%;P<0.001;骨转移率分别为77.78%和16.84%,P<0.001),血小板减低更多见(16.67%和2.11%,P=0.033)。SE-iFISH检测DTCs阳性率为92.92%(105/113),DTCs≥111个/3 ml的患者中肝及骨转移率均明显高于DTCs<111个/3 ml的患者(肝转移率分别为37.93%和11.90%,P=0.002;骨转移率分别为44.83%和20.23%,P=0.010),血小板减低发生率明显升高(13.79%和1.19%,P=0.020)。疾病控制组和疾病进展组的骨髓液基细胞学阳性率分别为12.00%(12/100)和46.15%(6/13),差异有统计学意义(P=0.002),骨髓SE-iFISH检测DTCs分别为29(8,110)个/3 ml和64(15,257)个/3 ml,差异无统计学意义(P=0.329)。骨髓液基细胞学阳性患者中位无进展生存时间(PFS)为6.33个月,低于阴性患者(中位PFS为9.27个月,P=0.019),中位总生存时间(OS)为8.03个月,亦低于阴性患者(中位OS为19.50个月,P=0.033)。骨髓SE-iFISH检测DTCs≥111个/3 ml患者的中位PFS为6.83个月,低于DTCs<111个/3 ml患者(中位PFS为9.50个月,P=0.004),中位OS为11.20个月,也低于DTCs<111个/3 ml患者(中位OS为20.60个月,P=0.019)。多因素Cox回归分析显示,疾病分期(HR=2.806,95%CI:1.499~5.251,P=0.001)和骨髓SE-iFISH检测DTCs数量(HR=1.841,95%CI:1.095~3.095,P=0.021)是SCLC患者PFS的独立影响因素,疾病分期是SCLC患者OS的独立影响因素(HR=2.538,95%CI:1.169~5.512,P=0.019)。结论骨髓液基细胞学检测肿瘤细胞和SE-iFISH检测DTCs两种方法临床可行,液基细胞学阳性或DTCs≥111个/3ml均与患者远处脏器转移相关,DTCs≥111个/3 ml是SCLC患者较差PFS的独立影响因素。

微滴数字聚合酶链反应法检测晚期肺腺癌患者血浆循环肿瘤DNA表皮生长因子受体基因突变的临床价值研究

目的 探讨微滴数字聚合酶链反应法（ddPCR）检测晚期肺腺癌患者血浆循环肿瘤脱氧核糖核酸（ctDNA）中表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的临床价值.方法 收集2015年5月至2017年4月在北京胸科医院确诊的初治晚期肺腺癌患者共136例,突变扩增系统（ARMS）检测肺癌肿瘤组织中EGFR基因突变情况;ddPCR和ARMS技术检测血浆中EGFR的基因突变情况.EGFR敏感突变患者均接受比较不同检测技术的符合率.EGFR敏感突变患者一线接受EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）口服治疗.通过生存分析比较不同技术检测EGFR基因突变患者无进展生存时间（PFS）.结果 136例肺癌肿瘤组织样本中,共检测到111例EGFR敏感突变（81.6％）,其中含Exon21 L858R突变48例（43.2％）,含Exon19 del突变59例（53.2％）,其他突变4例（3.6％）.ARMS检测血浆EGFR基因突变的敏感度为58.6％,特异度为96.0％.ddPCR检测血浆EGFR突变的敏感度为79.3％,特异度为100％,与肿瘤组织检测的符合率达83.1％（Kappa=0.685,P〈0.001）.Kaplan-Meier生存分析显示,在组织检测EGFR基因突变的亚组分析中,与单一技术检测阳性的病例相比,ddPCR和ARMS两种技术均为阳性的患者无进展生存时间最短（11.6个月比14.8个月,χ^2=2.517,P=0.026）.结论 作为一种可靠的、高敏感度和特异度的技术,ddPCR有望应用于检测血浆ctDNA EGFR基因突变情况,血液检测EGFR基因突变可预测患者对EGFR-TKI的疗效.