北京家族结核分枝杆菌鉴定方法的研究进展

结核病仍是严重威胁人类健康的全球公共卫生问题之一。北京家族结核分枝杆菌是我国大部分地区流行的主要菌株。作者论述了插入序列IS6110-限制性片段长度多态性（IS6110-RFLP）、间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）、长序列多态性（LSP）以及单核苷酸多态性（SNP）等多种北京家族结核分枝杆菌分型技术，并讨论了各技术的优缺点，以便对北京家族结核分枝杆菌的鉴定提供可靠依据。

两种分子检测技术快速诊断骨关节结核及其耐药性的研究

目的评价两种分子检测技术——利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（XpertMtb／RIF，简称“Xpert”）和GenoTyp—MTBDRplus线性探针检测技术（简称“MTBDR”）快速诊断骨关节结核及其耐药性的临床应用价值。方法2014年36月连续收集北京胸科医院住院的60例疑似骨关节结核患者的脓标本，每份标本行涂片抗酸杆菌检查、MGIT960分枝杆菌培养、Xpert和MTBDR检测，培养阳性的结核分枝杆菌行绝对浓度法药物敏感性试验（DST）检测。以临床诊断参考标准（CRS）为金标准，评价Xpert和MTBDR检测脓标本中结核分枝杆菌的敏感度和特异度。以DST为金标准，评价Xpert和MTBDR检测脓中结核分枝杆菌耐药性的敏感度和特异度。结果以CRS为金标准，涂片、培养、Xpert和MTBDR的敏感度分别为26．00％（13／50）、48．00％（24／50）、82．00％（41／50）和72．00％（36／50），10例非结核病患者脓标本4种技术检测结果均为阴性。以DST为金标准，6例RFP耐药样本中，Xpert检测RFP耐药全部阳性，MTBDR检测RFP耐药5例阳性；18例RFP敏感样本中2种技术检测结果均为阴性。7例INH耐药样本中，MTBDR检测INH耐药6例阳性；17例INH敏感样本中MTBDR技术检测结果均为阴性。结论Xpert和MTBDR检测脓标本中结核分枝杆菌的敏感度和特异度高，并且可同时检测其耐药性，可用于早期诊断骨关节结核及其耐药性。

分子检测技术诊断骨关节结核及其耐药性的研究进展

骨关节结核约占肺外结核的15％，由于症状不典型，易导致漏诊、误诊。细菌学检查是结核病诊断的金标准，但传统实验室方法诊断骨关节结核的敏感度低、耗时长，不能满足骨关节结核快速诊断的需要。近年来分子诊断技术在结核病诊断中发挥越来越重要的作用，作者综述了基因芯片技术、线性探针技术和XpertMTB／RIF技术诊断骨关节结核及其耐药性的研究进展，以便为选择骨关节结核实验室诊断方法提供依据。

贝达喹啉、氯法齐明和德拉马尼对常见致病性非结核分枝杆菌体外抑菌活性及耐药机制的研究进展

近年来,非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria,NTM)引起的感染呈逐渐上升趋势,严重威胁人类健康。NTM致病的菌种繁多,不同菌种NTM对药品的敏感性各异,使其治疗存在较大困难。因此,寻找NTM病治疗效果较佳的药品非常有必要。NTM种属分布常具有地域特点,在多数地区鸟-胞内分枝杆菌复合群、脓肿分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌为较常见的致病菌种。贝达喹啉(bedaquiline,Bdq)、氯法齐明(clofazimine,Cfz)及德拉马尼(delamanid,Dlm)因对治疗NTM病体现出了良好的治疗潜力而受到广泛关注。为了提高对抗NTM药品敏感性及耐药机制的认识,作者就Bdq、Cfz和Dlm对以上常见致病性NTM的体外抑菌活性及耐药相关机制进行综述。

非结核分枝杆菌的分布和生长影响因素及其传播途径研究

目前文献报道证实的非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria，NTM）及其亚群有170多种。人类接触的环境中NTM无处不在，包括自然界的水环境、城市供水系统、饮用水系统、灰尘和土壤等。环境中的NTM对于人类和动物是重要的条件致病菌。为提高对NTM的认识，作者综述了NTM在环境中的分布和影响因素，以及减少NTM暴露量的方法等。

鸟分枝杆菌临床分离株亚种组成及耐药谱研究

目的 分析我国鸟分枝杆菌临床分离株的亚种组成及其耐药谱,为治疗鸟分枝杆菌感染疾病提供科学依据.方法 通过hsp65基因可变3'端测序对50株鸟分枝杆菌临床分离株进行亚种分析,采用微孔板Alamar Blue微量稀释法测定鸟分枝杆菌对15种药物的最低抑菌浓度(MIC),以确定其药物敏感性.结果 hsp65基因可变3'端序列分析结果显示,50株鸟分枝杆菌临床分离株均属于hominissuis亚种.药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果显示,克拉霉素(98.0％,49/50)和莫西沙星(86.0％,43/50)在体外对鸟分枝杆菌具有较好的抗菌活性;其次,80.0％(40/50)、70.0％(35/50)和58.0％(29/50)的鸟分枝杆菌分别对阿米卡星、利福平和利奈唑胺敏感;除1株菌株外,其余菌株均对乙胺丁醇耐药;3种注射类抗结核药物的MIC5o和MIG90值的顺序为:阿米卡星≤链霉素＜卷曲霉素;5种氟喹诺酮类药物的MIC5o和MIG0值的顺序为:莫西沙星＜环丙沙星＜左氧氟沙星＜安妥沙星=氧氟沙星.15株对利福平耐药的菌株中仅有1株鸟分枝杆菌在rpoB基因的81 bp核心区发生了非同义突变,10株对阿米卡星耐药的菌株均未发生rrs基因突变.结论 我国鸟分枝杆菌临床分离株主要是hominissuis亚种,克拉霉素和莫西沙星在体外对鸟分枝杆菌具有较好的抗菌活性.

非结核分枝杆菌的分布和生长影响因素及其传播途径研究

非结核分枝杆菌（Nontuberculous Mycobacteria，NTM）系指除结核分枝杆菌复合群（包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、BCG、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、山羊分枝杆菌、canettii分枝杆菌、pinnipedii分枝杆菌和mungi分枝杆菌）和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。NTM按其生长速度，可分为快速生长型（菌落形成时间短于7d）和缓慢生长型（菌落形成时间等于或长于7d）。

胞内分枝杆菌临床分离株耐药谱及基因型特征研究

目的分析我国胞内分枝杆菌临床分离株的耐药谱及基因型特征,为治疗胞内分枝杆菌感染性疾病提供科学依据。方法纳入2013-2015年北京胸科医院150株胞内分枝杆菌临床分离株,采用微孔板Alamar Blue法测定胞内分枝杆菌对15种药物的最低抑菌浓度(MIC),以确定其药物的敏感度;对16个可变数目串联重复序列(VNTR)位点进行PCR扩增和产物电泳分析,使用BioNumerics软件对菌株进行聚类分析,以确定其基因型特征。使用SPSS19.0软件对结果进行统计分析,应用Х^2检验分析不同组间耐药率的差别。结果药敏试验结果显示,克拉霉素(97.3%,146/150)、莫西沙星(94.0%,141/150)和阿米卡星(90.0%,135/150)对胞内分枝杆菌具有较好的抗菌活性;75.3%(113/150)、64.0%(96/150)、52.7%(79/150)和8.7%(13/150)的菌株对利福平、利奈哩胺、卷曲霉素和乙胺丁醇敏感;3种注射类抗结核药物的MIC50与MIC90值为:阿米卡星4和16mg/L,链霉素4和16mg/L,卷曲霉素8和16mg/L;5种氟座诺酮类药物的MIC50与MIC90值为:莫西沙星0.5和2mg/L,环丙沙星1和8mg/L,左氧氟沙星1和8mg/L,安妥沙星2和16mg/L,氧氟沙星2和16mg/L。采用16位点VNTR方法对胞内分枝杆菌进行基因分型,150株胞内分枝杆菌共分为21个簇,121种基因型,总Hunter-Gaston指数为0.997。结论克拉霉素、莫西沙星和阿米卡星在体外对胞内分枝杆菌具有较好的抗菌活性;16位点VNTR方法对胞内分枝杆菌临床分离株的分辨率较高;胞内分枝杆菌的耐药谱与菌株是否成簇并无明显相关性。

不同技术联合检测痰液和胸腔积液对结核性胸膜炎的诊断价值

目的研究不同技术联合检测痰液和胸腔积液对结核性胸膜炎的诊断价值。方法收集2014年1月至2017年3月首都医科大学附属北京胸科医院收治的临床诊断为结核性胸膜炎的1955例患者，其中1232例（63．02％）有肺部实质病变，723例（36．98％）无肺部实质病变，通过抗酸杆菌涂片镜检（简称“涂片法”）、改良固体培养法和BACTECMGIT960液体培养（简称“培养法”）和XpertMTB／RIF技术（简称“Xpert法”）单独及联合检测患者痰液和胸腔积液中结核分枝杆菌的阳性检出率，并分析肺部实质病变对结核分枝杆菌检测阳性率的影响。结果1955例结核性胸膜炎患者同时采用涂片法进行痰液和胸腔积液检测者中有535例（27．37％）患者、353例（18．06％）采用培养法、294例（15．04％）采用Xpert法，188例（9．62％）患者同时进行了涂片法＋培养法＋Xpert法检查。涂片法、培养法和Xpert法单独检测胸腔积液结核分枝杆菌的阳性率[3．18％（17／535）、15．30％（54／353）、19．05%（56／294）]明显低于3种方法联合检测痰液＋胸腔积液的阳性率[21．87％（117／535）、43．63％（154／353）、47．62％（140／294）]（x^2值分别为85．31、68．16、54．00，P值均〈0．01）。在有肺部实质病变的患者中，涂片法、培养法、Xpert法单独检测胸腔积液中结核分枝杆菌的阳性率[3．82％（13／340）、16．30%（37／227）和23．91％（44／184）]明显低于3种方法单独检测痰液的阳性率[30．29％（103／340）、51．10％（116／227）、60．33％（111／184）]（x^2值分别为84．19、61．53、50．04，P值均〈0．01）和联合检测痰液＋胸腔积液的阳性率[分别为32．06％（109／340）、55．95％（127／227）、67．93％（125／184）]（y。值分别为92．06、77．32、71．79，P值均〈0．01）。以培养为金标准，涂片法、培养法和Xpert法检测痰液＋胸腔积液的敏感度E48．36％（59／122）、79．38％（77／97）、80．49％（66／82）]明显高于单独检测胸腔积液的敏感度[8．20％（10／122）、26．80％（26／97）、26．83％（22／82）]（x^2值分别为48．52、53．84、47．47，P值均〈0．01）；检测痰液＋胸腔积液的特异度较单独检测胸腔积液有所下降，其中涂片法检测的差异无统计学意义（x^2=3．65，P=0.056）；而Xpert法和涂片法＋Xpert法检测的差异均有统计学意义（x^2=4．71，P=0．030；x^2=5．67，P=0．017）。结论联合检测痰液和胸腔积液中结核分枝杆菌的阳性检出率高于单独检测，对于疑似结核性胸膜炎的患者，应尽量进行痰液标本的检测，以提高对结核性胸膜炎诊断的参考价值。

中国首株副瘰疬分枝杆菌临床分离株的生物学特征和毒力研究

目的 对中国肺病患者体内首次分离到的1株副瘰疬分枝杆菌进行了生物学特征与毒力研究,以提高对该分枝杆菌的认识.方法 2013年对源于2007 2008年全国耐药基线调查的140株非结核分枝杆菌（NTM）,通过联合测定16S rRNA、16S～23S rRNA间隔区（ITS）和hs筇5基因序列进行菌种鉴定,分离到1株副瘰疬分枝杆菌.通过开展一系列标准生化试验,包括生长试验、硝酸还原酶测定、芳基硫酸酯酶测定、碲酸钠还原试验、吐温水解试验、尿素酶试验,以及在50 mg/ml对硝基苯甲酸（PNB）、10 mg/ml噻吩-2-羧酸肼（TCH）、5％ NaCl和麦康凯琼脂上进行生长试验,阐明其生物学特征.通过Alamar blue微量稀释法测定其对利福平、乙胺丁醇、异烟肼、阿米卡星、磺胺甲恶唑、氧氟沙星、对氨基水杨酸、利福喷丁、卷曲霉素、头孢西丁、亚胺培南、米诺环素、多西环素、克拉霉素、阿奇霉素、美罗培南、甲氧苄氨嘧啶、利福布汀、利奈唑胺、链霉素、丙硫异烟胺、莫西沙星和左氧氟沙星共23种抗生素的药物敏感性.为了研究副瘰疬分枝杆菌的毒力,通过尾静脉和腹腔注射两种途径感染C57BL/6小鼠,在小鼠感染后的第2、4、8周取肺脏和脾脏检测细菌载量和病理组织学变化,确定其对小鼠的致病性.结果 该株副瘰疬分枝杆菌在37℃生长旺盛,菌落光滑并呈半球形,呈黄至橘黄色.在体外对利福布丁、利福喷丁、克拉霉素、阿奇霉素、头孢西丁和莫西沙星敏感.在C57BL/6小鼠感染后的第2周,病理组织学结果显示小鼠肺组织出现局限性炎症反应,表现为外周支气管炎性渗出.在感染后的第4和第8周,肺组织表现为外周支气管炎性渗出伴有大量炎性细胞聚集,部分组织有肉芽肿生成,但无坏死.在小鼠感染的8周时间内,肺组织和脾组织中细菌载量呈逐渐上升趋势.结论 该副瘰疬分枝杆菌在体外对利福布汀、利福喷丁、克拉霉素、阿奇霉素、头孢西丁和莫西沙星敏感;可在小鼠体内感染扩增,并可引起小鼠肺组织病变.

第二次实时荧光定量核酸扩增检测在结核病诊断中的增值成本效益分析

目的探讨第二次实时荧光定量核酸扩增(Xpert MTB/RIF,Xpert)检测在结核病诊断中的增值成本效益。方法连续纳入2015年3月至2018年3月在1周内连续进行了2次Xpert检测的2 896例疑似结核病患者,其中包括2 402例疑似肺结核患者(肺结核组),男1 523例,女879例,年龄平均46岁。收集患者临床检测标本,其中痰标本2 144例,BALF 258例。疑似肺外结核494例(肺外结核组),男318例,女176例,平均年龄42岁,收集胸腔积液标本157例,脑脊液标本106例,尿液标本34例,骨结核脓液标本197例。所有标本进行2次Xpert检测并行涂片镜检、液体快速培养(BACTEC MGIT 960),培养阳性菌进行药敏试验。肺结核组和肺外结核组标本分别根据涂片检查结果,分为肺结核涂阳组、肺结核涂阴组和肺外结核涂阳组、肺外结核涂阴组。使用χ2检验比较第1次和第2次Xpert检测的增值成本效益,t检验评估不同群体成本之间差异的显著性。结果2 896例疑似结核病患者标本中,2次Xpert检测结果中任一次阳性者1 639例(包含2次检测均为阳性者,全文同),第1次Xpert检测阳性1 502例(91.6%),第2次检测阳性者增加了137例(8.4%)。第2次Xpert检测的增值效能涂阴组(108/727, 14.9%)显著高于涂阳组(29/912, 3.2%),两组比较差异有统计学意义(χ2=221.404, P<0.001);肺外结核组(23/206, 11.2%)高于肺结核组(114/433, 8.0%),差异有统计学意义(χ2=2.422, P=0.012)。药敏试验结果显示,2 896例标本中371例为利福平耐药,其中91.4%(339/371)由第1次Xpert检出,第2次Xpert检出率增加了8.1%(30/371)。第2次检测的增值成本效益显著:以650元/次测算,肺结核组第1次和第2次检测的平均成本分别为0.12万元和0.22万元(P<0.001),增值成本为1.37万元;肺外结核组第1次和第2次检测的平均成本分别为0.18万元和0.31万元(P<0.001),增值成本为1.40万元(与同肺结核组增值成本比较,P<0.001)。在肺结核和肺外结核患者标本检测中,涂阴患者第2次Xpert检测的增值成本效益低于涂阳患者。结论第2次Xpert检测对结核病诊断有显著的增值成本效益。

胞内分枝杆菌临床分离株耐药谱及基因型特征研究

目的分析我国胞内分枝杆菌临床分离株的耐药谱及基因型特征，为治疗胞内分枝杆菌感染性疾病提供科学依据。方法纳入2013—2015年北京胸科医院150株胞内分枝杆菌临床分离株，采用微孔板Alamar Blue法测定胞内分枝杆菌对15种药物的最低抑菌浓度（MIC），以确定其药物的敏感度；对16个可变数目串联重复序列（VNTR）位点进行PCR扩增和产物电泳分析，使用BioNumerics软件对菌株进行聚类分析，以确定其基因型特征。使用SPSS 19.0软件对结果进行统计分析，应用χ2检验分析不同组间耐药率的差别。结果药敏试验结果显示，克拉霉素（97.3%，146/150）、莫西沙星（94.0%，141/150）和阿米卡星（90.0%，135/150）对胞内分枝杆菌具有较好的抗菌活性；75.3%（113/150）、64.0%（96/150）、52.7%（79/150）和8.7%（13/150）的菌株对利福平、利奈唑胺、卷曲霉素和乙胺丁醇敏感；3种注射类抗结核药物的MIC50与MIC90值为：阿米卡星4和16 mg/L，链霉素4和16 mg/L，卷曲霉素8和16 mg/L；5种氟喹诺酮类药物的MIC50与MIC90值为：莫西沙星0.5和2 mg/L，环丙沙星1和8 mg/L，左氧氟沙星1和8 mg/L，安妥沙星2和16 mg/L，氧氟沙星2和16 mg/L。采用16位点VNTR方法对胞内分枝杆菌进行基因分型，150株胞内分枝杆菌共分为21个簇，121种基因型，总Hunter－Gaston指数为0.997。结论克拉霉素、莫西沙星和阿米卡星在体外对胞内分枝杆菌具有较好的抗菌活性；16位点VNTR方法对胞内分枝杆菌临床分离株的分辨率较高；胞内分枝杆菌的耐药谱与菌株是否成簇并无明显相关性。