色氨酸-犬尿氨酸代谢中间产物对结核病患者T细胞免疫的影响

目的 明确结核病患者T细胞亚群的失衡状况，以期发现色氨酸（TRP）-犬尿氨酸（KYN）代谢中间产物对T细胞亚群的影响，以解释结核病患者T细胞亚群发生变化的可能机制。 方法 结核病患者来源于首都医科大学附属北京胸科医院2012年9月至2012年12月期间，经细菌学、病理学和影像学检查明确诊断为肺结核的患者，无合并糖尿病等其他合并疾病，共104例，经数字表法随机抽样选取45例作为试验组；健康对照患者来源于同期北京市昌平区结核病防治所的健康体检志愿者，共100名，经数字表法随机选取其中39名作为健康对照组。采用流式细胞分析方法检测试验组和健康对照组的血细胞中调节性T细胞（Treg细胞）和T辅助细胞17（Th17）的水平；进一步通过体外添加TRP及其代谢中间产物KYN和喹啉酸（QA）来刺激CD4^＋和CD8^＋ T淋巴细胞，观察其对细胞凋亡的影响，分析TRP及其代谢中间产物对T细胞分化的影响。采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，流式细胞分析结果所获数据符合方差齐性和正态分布，以“x±s”表示，采用t检验进行统计学分析，P〈0.05为差异有统计学意义。 结果 与健康对照组［（0.41±0.26）%］相比，试验组的Treg细胞的比率［（1.49±0.82）%］显著上升（t=33.64，P=0.000），而Th17的比率［健康对照组（0.73±0.43）%、试验组（1.04±0.72）%］虽有所上升，但差异无统计学意义（t=44.46，P=0.071）。体外细胞刺激试验发现：高浓度的KYN（2.0 mmol/L）对CD4^＋ T淋巴细胞［健康对照组（8.40±3.28）%、试验组（30.07±7.37）%；t=7.49，P=0.000］和CD8^＋ T淋巴细胞［健康对照组（15.31±1.88）%、试验组（26.36±1.09）%；t=4.89，P=0.003］具有明显的诱导凋亡作用。对CD4^＋ T淋巴细胞而言，添加高浓度的TRP（2.0 mmol/L）和 QA（2.0 mmol/L）后，试验组TRP和 QA的细胞凋亡比率分别为（6.66±0.96）%和（6.85±0.43）%，与健康对照组（8.40±3.28）%和（8.40±3.28）%相比略有减少，但差异无统计学意义（t=6.42，P=0.189；t=8.21，P=0.107）；对CD8^＋ T淋巴细胞而言，添加高浓度的TRP（2.0 mmol/L）和QA（2.0 mmol/L）后试验组的细胞凋亡比率分别为（16.48±4.75）%和（17.18±2.07）%，与健康对照组（15.31±1.88）%和（15.31±1.88）%相比，凋亡比率略有增加，但差异无统计学意义（TRP：t=7.41，P=0.238；QA：t=8.02，P=0.121）。 结论 Treg细胞的含量在结核病患者中有明显的升高。TRP-KYN途径代谢中间产物KYN能够影响CD4^＋ T和CD8^＋ T淋巴细胞凋亡，推测通过这种细胞凋亡的途径促进了T细胞分化。

CDG-3荧光探针检测结核分枝杆菌的初步研究

目的探讨CDG-3荧光探针[β-内酰胺酶（BlaC）特异性绿色荧光探针]用于结核病诊断的潜在可能性。方法为明确CDG-3荧光探针的特异性，选取结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）标准株H37Rv，牛和非洲分枝杆菌标准株，35种临床相对常见的不同非结核分枝杆菌（nontuberculousm ycobacteria，NTM）标准株和6种呼吸道感染病原菌标准株，与CDG-3荧光探针反应后进行检测；为初步了解CDG-3荧光探针临床应用效果，收集2016年1月至9月于北京胸科医院门诊就诊的200例疑似肺结核患者的痰标本分别进行金胺O荧光染色法、培养法（罗氏固体培养联合MGIT960液体培养，二者只要有一种结果为阳性即认为培养阳性）和CDG-3荧光探针检测，并对检测结果进行分析。结果以H37Rv为标准，CDG-3荧光探针检测牛和非洲分枝杆菌标准株结果均为阳性。试验的35种NTM标准株中，CDG-3荧光探针检测结果阳性的菌株仅有3株，分别是堪萨斯分枝杆菌、玛尔摩分枝杆菌和草分枝杆菌；其余32株的检测结果为阴性。6种呼吸道感染病原菌中，5种检测结果为阴性，1种（诺卡菌）为阳性。在临床痰标本实验中，CDG-3荧光探针对痰MTB的阳性检出率为53．0%（106／200），高于金胺O荧光染色法（29．5％，59／200）与培养法（35．0％，70／200）的阳性率，差异有统计学意义（x^2值分别为33．587、21．121，P值均为0．000）。以培养法结果为标准，CDG-3荧光探针检测的敏感度为84．3％（59／70），高于金胺O荧光染色法（70．0％，49／70）；特异度为63．8％（83／130），低于金胺O荧光染色法（92．3％，120／130）；以临床诊断为标准，CDG-3荧光探针检测的敏感度为64．4％（96／149），高于金胺O荧光染色法（39．6％，59／149）和培养法（44．3％，66／149）；特异度为95％（19／20），低于金胺O荧光染色法（100％，20／20），高于培养法（90％，18／20）。结论CDG-3荧光探针对MTB的选择性较好，受NTM干扰较小，与呼吸道感染病原菌的反应还需进一步研究；CDG-3荧光探针技术具有快速、简便、检出效率高等优势，但特异度有待进一步提高。