新型冠状病毒PLpro负调控DDX3诱导的β干扰素抗病毒免疫通路

目的发现严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)木瓜样蛋白酶(PLpro)的宿主互作分子,探索其生物学意义。方法邻近蛋白标记结合质谱分析筛选宿主互作分子DEAD-box解旋酶3(DDX3);免疫荧光法分析PLpro与DDX3的胞内共定位;免疫共沉淀法分析PLpro与DDX3的相互作用,以及PLpro对DDX3与IκB激酶ε(IKKε)和TANK结合激酶1(TBK1)、DDX3与线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)互作的影响;荧光素酶报告基因法检测PLpro对β干扰素(IFN-β)通路的影响和对底物的酶切效率。结果DDX3能够与PLpro发生细胞内共定位和相互作用;PLpro可能抑制DDX3-MAVS复合体形成,抑制DDX3-IKKε-TBK1之间的相互作用,负调控Ⅰ型干扰素通路;DDX3过表达情况下,PLpro/PLP-TM对底物位点的切割效率显著升高,而DDX3表达降低时,切割效率则显著降低。结论DDX3可能是PLpro的宿主相互作用分子之一;PLpro负调控DDX3活化的IFN-β表达,为病毒复制提供有利的免疫环境,提升蛋白酶切割活性,共同促进病毒复制。

基于多参数流式细胞术精细化分析外周血免疫细胞亚群的中国专家共识

免疫细胞亚群检测在多种良恶性疾病的临床诊疗及健康管理中都起着非常重要的作用。为了更好地开展不同功能性免疫细胞亚群的深入研究和建立克隆性相关指标参考区间,建立免疫衰老、个体化动态监测和治疗恢复期特殊参考区间,发现淋巴细胞以外其他免疫细胞的临床意义等,迫切需要精细化分析外周血免疫细胞亚群。多参数流式细胞术是检测免疫细胞精细化亚群、进行免疫功能评价的重要技术方法,为规范外周血免疫细胞亚群的流式细胞术精细化检测方法和方案,进一步促进其在临床疾病诊疗和健康管理中的应用,中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织专家制定了此专家共识。