汉族家族性高胆固醇血症患者永生化细胞株的构建及其LDL-R功能的研究

目的:构建汉族家族性高胆固醇血症(FH)患者永生化细胞株;分析细胞表面低密度脂蛋白受体LDL-R活性。方法:将研究对象20例分为3组:(1)FH纯合组6人,为临床确诊的家族性高胆固醇血症纯合患者;(2)FH杂合组12人,为纯合患者的父母;(3)正常对照组2人,为血脂正常者;采用EB病毒转化外周血淋巴细胞;免疫组化法观察细胞表面LDL-R分布;流式细胞技术观察淋巴细胞LDL-R功能,4℃时检测其对LDL结合能力,37℃时检测其对LDL内化功能。结果:免疫组织化学法,在光镜下可见淋巴细胞表面散在分布的LDL-R,呈现棕褐色颗粒样;流式细胞技术对3组细胞株检测证实LDL-R功能存在差异,EB病毒转化的细胞株具有永生化特性;正常组LDL-R平均表达量111.35,高于杂合组(97.17)及纯合组(60.62);纯合组37℃内化量228.61,4℃结合量95.20,结合量为正常人的41.6%,杂合组37℃内化量91.28,4℃结合量67.42,结合量为正常人的73.8%。结论:采用EB病毒转化外周血淋巴细胞,成功地构建了汉族家族性高胆固醇血症患者的永生化细胞株,此细胞株的功能研究表明其具有稳定的永生化特性,完整地保存了FH患者的细胞种质。

活血解毒中药对动脉粥样硬化小鼠斑块稳定性、血脂及DNA甲基化水平的影响

目的研究血府逐瘀胶囊、四季三黄胶囊及其联合应用对动脉粥样硬化(As)小鼠主动脉斑块稳定性、血脂及血清DNA甲基化水平的影响。方法对ApoE基因敲除小鼠予高脂饮食喂养13周后随机分组,后再继续喂养13周,同时给予药物治疗。处死采血,检测血脂、血清DNA甲基化及甲基化转移酶(DNMTs)水平,并取出心脏及主动脉,石蜡包埋,取主动脉根部的第3切面,行HE染色,经IPP图像分析,测量并计算主动脉As斑块纤维帽的平均厚度及斑块内细胞外脂质占斑块面积的百分比。结果与模型组相比,辛伐他汀组、血府逐瘀胶囊组、四季三黄胶囊组和联合应用组小鼠主动脉斑块的平均纤维帽厚度明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与血府逐瘀胶囊组和四季三黄胶囊组相比,联合应用组的平均纤维帽厚度明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,辛伐他汀组、血府逐瘀胶囊组、四季三黄胶囊组和联合应用组小鼠主动脉斑块内细胞外脂质成分占斑块面积的百分比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,辛伐他汀组、血府逐瘀胶囊组、四季三黄胶囊组和联合应用组小鼠甘油三酯(TG)水平明显降低(P<0.05)。仅辛伐他汀组血清LDL-C和TC水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),其余给药组差异均无统计学意义(P>0.05)。经ELISA法检测,给药13周后,辛伐他汀组、血府逐瘀胶囊组、四季三黄胶囊组和联合应用组小鼠血清DNA甲基化水平和DNMTs水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血府逐瘀胶囊、四季三黄胶囊及其联合应用均具有降低血清TG水平,稳定As斑块的作用,其机制可能与提高血清中DNA甲基化水平和DNMTs水平有关。

凝血素样氧化低密度脂蛋白受体结构与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化(As)早期改变是内皮功能紊乱,新型受体—植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的内皮功能紊乱过程中起关键性作用。LOX-1主要在内皮细胞表达,其结构和功能与其他可吞噬ox-LDL的清道夫受体显著不同,但与自然杀伤细胞受体却高度一致。目前对LOX-1基因和蛋白结构以及功能尚不完全清楚。因此,进一步研究LOX-1的功能及其表达的调控机制,不仅有助于了解脂代谢和As发病机制,对心血管病防治也有十分重要的意义。本文对LOX-1其结构、功能及其调控因素等最新研究进行综述。

β_1-肾上腺素受体自身抗体通过促进肝细胞凋亡参与小鼠肝损伤

目的探讨β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)对小鼠肝功能的影响。方法用杂交瘤细胞株融合的方法产生具有生物活性的β_1-AA;构建β_1-AA长期被动免疫小鼠模型;血清生化仪检测肝脏血清学指标变化;超声检测小鼠肝脏结构和功能的改变;Tunel染色、annexin V/PI染色和caspase 3活性检测肝细胞凋亡水平。结果具有生物活性的β_1-AA和被动免疫模型小鼠建立成功;在被动免疫过程中,免疫组小鼠肝脏谷丙转氨酶ALT(62.00±0.01 vs37.00±0.02)和谷草转氨酶AST(290.00±0.05 vs 205.00±0.02)水平明显升高,白蛋白ALB显著下降(35.00±0.03vs 43.00±0.05);门静脉、肝静脉流速降低;β_1-AA长期存在诱导肝细胞凋亡水平增加(8.00%±0.02%vs 2.30%±0.03%,P<0.05),β_1-肾上腺素受体特异性抑制剂metoprolol可以部分逆转此效应。结论β_1-AA可以通过β_1-肾上腺素受体致肝细胞凋亡,参与肝损伤的发生发展。

肾胺酶在长期高脂喂养的载脂蛋白E基因敲除小鼠组织中的表达分布及缬沙坦的干预作用

目的研究肾胺酶在长期高脂喂养的载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠组织中的表达分布及肾素一血管紧张素受体拮抗剂缬沙坦的干预作用。方法采用高脂饲料和普通饲料喂养ApoE-/-小鼠和C57小鼠26周，并同步进行辛伐他汀和缬沙坦灌胃给药13周，然后处死取材，取小鼠的心脏、主动脉、肝脏、肾脏、肺脏、睾丸和肾上腺。采血，保留血清。检测血脂和采用ELISA检测小鼠血清中的Renalase水平，采用免疫组化检测各组织中Renalase表达，HE染色观察各组小鼠主动脉斑块病理形态变化。结果与普通饲料喂养的C57小鼠相比，Renalase在高脂喂养26周ApoE-/-小鼠的心脏、肝脏、肾脏、肺脏、睾丸和肾上腺中的表达强度均有降低，以肾上腺降低最为明显。Renalase在高脂喂养组小鼠主动脉内的表达明显低于普通饲料喂养组，在高脂喂养26周小鼠主动脉斑块中的表达明显低于高脂喂养13周小鼠。Renalase在主动脉班块的平滑肌细胞和M2型巨噬细胞内表达。与模型组相比，缬沙坦可明显降低主动脉斑块内细胞外脂质占斑块面积的百分比，增厚斑块纤维帽的平均厚度，并且可明显增加斑块纤维帽处Renalase的表达。结论Renalase是由平滑肌细胞和M2型巨噬细胞分泌的一种具有稳定动脉粥样硬化斑块作用的单胺氧化酶，并且可能与动脉粥样硬化伴随的多种组织病变有关。而肾素一血管紧张素受体拮抗剂缬沙坦可通过靶向Renalase起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。

家族性高胆固醇血症的腹腔外周动脉血管病理改变

目的 应用高分辨率彩色多普勒超声观察家族性高胆固醇血症(FH)患者腹部及外周动脉血管改变,以便为FH患者临床治疗提供有价值的依据。方法 采用彩色多普勒超声分别对5例FH家系中6名子女(先证者)及6名正常者进行血管超声检查,观察动脉内中膜厚度(IMT),管腔狭窄程度以及血液动力学改变。结果 FH组与对照组的左颈外动脉起始部后壁IMT、右颈总动脉近段后壁IMT与右颈总动脉中段前、后壁IMT以及左颈外动脉起始部、右颈总动脉近段与右颈总动脉中段的直径狭窄率差异均有统计学意义(P=0. 015);而FH组与对照组中椎动脉、锁骨下动脉、腹主动脉、肾动脉、髂动脉、腘动脉均未见明显动脉IMT增厚。结论 FH患者血脂水平不能准确地反映FH患者动脉粥样硬化的恶化程度,定期的超声检查有可能为FH患者个体化治疗提供有意义的依据。

肾上腺素受体自身抗体通过上调趋化因子CXCL16诱导心功能不全

目的 利用标记法芯片技术筛选β1肾上腺素受体自身抗体（β1-AA）致心功能不全的细胞因子,并对其中参与的信号通路进行分析.方法 收集67例冠心病患者和42例健康体检者血清,ELISA法检测血清中β1-AA水平;建立β1-AA被动免疫小鼠模型,采用小动物超声动态监测小鼠心脏功能及结构变化;苏木精-伊红（HE）及马松（Masson）染色观察小鼠心肌组织形态改变;标记法芯片技术筛选被动免疫模型鼠外周血清中β1-AA致心肌损伤的相关细胞因子;GO分析和KEGG通路富集分析对差异表达的细胞因子进行功能分类;ELISA法检测冠心病患者血清中该细胞因子水平,并进一步分析其与β1-AA之间的相关性.结果 冠心病患者血清中β1-AA滴度及阳性率明显高于对照组（P〈0.001）;β1-AA被动免疫8周诱导小鼠心功能不全;标记法芯片技术筛选出37个差异表达的细胞因子,其中趋化因子CXCL16的表达明显高于对照组（改变倍数〉20）;GO分析显示该细胞因子主要参与正向调节细胞死亡、迁移、运转及细胞组分改变等重要的生命过程,KEGG通路富集显示CXCL16显著富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路及趋化因子信号通路;ELISA结果显示,β1-AA阳性冠心病患者血清中CXCL16的水平显著高于β1-AA阴性组（P〈0.01）,且与β1-AA之间成正向相关（P〈0.01,r=0.43）.结论 趋化因子CXCL16可能是β1-AA诱导心功能不全的关键细胞因子.

黄连提取物对动脉硬化小鼠斑块胶原类型及MMP-9/TIMP-1比值的影响

目的:探讨黄连提取物对高脂喂养ApoE-/-小鼠主动脉AS斑块内胶原类型及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1)比值的影响,探讨黄连提取物稳定斑块的可能作用机制。方法:33只6-8周龄的ApoE基因敲除小鼠予高脂喂养13周后,待其形成成熟的AS斑块后,随机分为3组:模型组、黄连提取物组、辛伐他汀组(阳性对照组),每组11只。继续高脂喂养,并按体重比折算给予小鼠临床推荐剂量的相应药物治疗13周,处死动物,每只小鼠取主动脉根部的4个切面,行天狼猩红染色,检测各组小鼠主动脉斑块内Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,以及斑块内MMP-9和TIMP-1的表达,计算MMP-9/TIMP-1比值。结果:给药13周后,图像分析结果显示,黄连提取物组小鼠主动脉斑块内Ⅰ型胶原含量与模型组比较有所增加,但无显著差异(P>0.05);辛伐他汀组和黄连提取物组小鼠主动脉斑块内Ⅲ型胶原含量与模型组比较显著降低(P<0.01)。Ⅲ型/Ⅰ型胶原比值,两给药组与模型组比较均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,黄连提取物和辛伐他汀组小鼠主动脉斑块内MMP-9的阳性表达均明显减少(P<0.01),黄连提取物组主动脉斑块内TIMP-1的阳性表达与模型组相比明显增加(P<0.01),辛伐他汀组TIMP-1表达有所增加,但无统计学差异(P>0.05),两给药组之间比较无显著差异(P>0.05)。各给药组中MMP-9/TIMP-1比值均有所降低,与模型组比较具有显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论:在临床推荐剂量下,黄连提取物可明显改善ApoE-/-小鼠主动脉AS斑块内胶原类型,调整斑块内MMP-9/TIMP-1比值,从而促进斑块稳定。