肝癌细胞系中SLIT2、DAPK、RIZ1、CHFR、EDNRB、3-OST-2基因甲基化状态

目的了解SUN449、BEL-7402、SMMC-7721、Hep3B和HepG2 5种肝癌细胞系中SLIT2、DAPK、RIZ1、CHFR、ED-NRB和3-OST-2 6种基因启动子区域甲基化状态。方法体外培养以上5种肝癌细胞系,应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测5种肝癌细胞系中SLIT2、DAPK、RIZ1、CHFR、EDNRB和3-OST-2 6种基因启动子区域的甲基化状态。结果 SLIT2、RIZ1、EDNRB和3-OST-2 4种基因启动子区域在5种肝癌细胞系SUN449、BEL-7402、SMMC-7721、Hep3B和HepG2中为完全甲基化,甲基化率均为100%;DAPK基因在此5种肝癌细胞系中为完全非甲基化,未发现甲基化状态,甲基化率为0;CHFR基因启动子区在SUN449、BEL-7402、SMMC-7721和HepG2细胞系中发生甲基化,甲基化率为80%,在SUN449、SMMC-7721和HepG2中为不完全甲基化,在BEL-7402细胞系中为完全甲基化,在Hep3B中为完全非甲基化。结论肝癌细胞系中SLIT2、DAPK、RIZ1、CHFR、EDNRB和3-OST-2基因启动子区的高甲基化是普遍现象,而DAPK基因呈低甲基化水平。

鼻咽刷片细胞学检查和EB病毒检测在鼻咽癌诊断中的意义

目的 :探讨鼻咽细胞学检查结合DNA核型判断和细胞EB病毒检测在可疑鼻咽癌病人筛查中的作用。方法 :分别对 6 6例可疑鼻咽癌就诊病人作鼻咽刷片细胞学诊断和应用CAS2 0 0图像分析仪测定涂片细胞DNA含量 ,细胞学癌阳性病例同时作EB病毒编码RNA(EBERs)原位杂交。结果 :与组织学诊断相比 ,细胞学诊断和DNA非二倍体诊断癌的敏感性分别为6 6 %和 5 5 % ,两者结合判断不能提高敏感性 ,并且假阴性率高 ;细胞学癌阳性病例的癌细胞核EBERs阳性率 92 .1% ,其中 6例DNA二倍体核型病例均呈EBERs阳性 ,可诊断为鼻咽癌。结论 :鼻咽细胞学检查结合DNA核型判断不能提高可疑鼻咽癌病人的诊断率 ,不适用于鼻咽癌筛查。细胞涂片的EB病毒原位杂交方法 ,在鼻咽癌可疑病人的诊断和鉴别诊断上具有重大实用价值 。

肝细胞癌多基因启动子甲基化与预后关系的研究

目的了解肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中,DAPK、FHIT及SLIT2基因的甲基化状况与病人生存预后的关系。方法应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术,检测50例HCC组织中上述基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化情况和肿瘤复发之间相关性。结果 50例HCC组织中,DAPK、FHIT及SLIT2基因的甲基化发生率分别是82.0%、68.0%和54.0%。其中,一年内未复发组相应基因的甲基化率分别为76.9%、53.8%和50.0%;一年内复发组为87.5%、83.3%和58.3%。FHIT甲基化状态在两组间差异有统计学意义。在一年内复发组中,同时有2～3个基因甲基化者是22例;在一年内未复发组中,同时存在2～3个基因甲基化者是15例;多基因甲基化在两组间差异有统计学意义(P=0.006)。结论在HCC中多基因启动子的异常甲基化是一种普遍存在的现象。肝细胞癌患者,异常的DNA甲基化与预后显著相关。FHIT可能作为判断外科治疗预后的分子标志物。

鼻咽泡状核细胞癌中癌细胞群体的AgNORs定量分析

目的 :通过癌细胞核仁组成区 (NORs)蛋白的图像定量分析 ,评价鼻咽泡状核细胞癌的癌细胞群体增生能力。方法 :对18例鼻咽泡状核细胞癌石蜡切片进行银染 (AgNORs) ,应用CAS2 0 0图像分析仪分别测定泡状核癌细胞群体和梭形癌细胞群体的AgNORs参数值 ,并作比较分析。结果 :与梭形癌细胞群体相比 ,泡状核癌细胞群体具有较高的每核AgNOR计数、每核AgNOR面积和平均AgNOR面积 /粒 ,差异均有显著性 ,而且与泡状核癌细胞群体的增殖细胞核抗原 (PCNA)阳性率明显高于梭形癌细胞群体的前研究结果相一致。结论 :泡状核癌细胞群体的增生能力明显高于梭形癌细胞群体 ,增生能力各异的癌细胞群体存在于同一组织类型鼻咽癌中 ,反映了鼻咽癌细胞群体增殖能力的异质性 。

HE染色褪色后Feulgen染色法在鼻咽癌涂片细胞DNA分析中的应用

ＤＮＡ含量分析与恶性肿瘤的生物学行为、临床预后及治疗密切相关〔１，２〕。细胞学样本常因样本有限及缺乏组织结构，限制了细胞学样本ＤＮＡ含量分析及其实用性研究。笔者采用鼻咽癌鼻咽部刷片，脱落癌细胞涂片样本，与直接Ｆｅｕｌｇｅｎ染色比较，探讨ＨＥ染色褪色后...

鼻咽癌及癌旁上皮细胞的AgNORs定量分析及其生物学意义

目的 通过鼻咽癌及癌旁上皮的细胞核仁组成区蛋白 (NORs)图像定量分析 ,评价其反映细胞群体增生能力及分化程度等生物学意义。方法 对 70例鼻咽癌石蜡切片进行银染 (AgNORs) ,应用CAS2 0 0图像分析仪分别测定 2 9例癌旁正常腺上皮、 19例增生 /异型增生柱状上皮、 10例增生 /异型增生鳞状上皮、 5 4例分化性非角化性癌和 16例未分化癌的细胞群体AgNORs参数值并作比较分析 ;结果 每核AgNOR计数、每核AgNOR面积和平均AgNOR面积 /粒从正常腺上皮至增生 /异型增生柱状上皮至分化性非角化性癌或未分化癌呈现显著增加 ,平均核面积、每核AgNOR面积和平均AgNOR面积 /粒从正常腺上皮至增生 /异型增生鳞状上皮至未分化癌呈现显著增加 ,差异均有显著性 ,但增生 /异型增生鳞状上皮与分化性非角化性癌的AgNOR数值差异没有显著差异 ;与分化性非角化性癌比较 ,未分化癌的平均核面积、每核AgNOR面积和平均AgNOR面积 /粒显著增加。结论 AgNORs形态定量分析反映了鼻咽癌及癌旁不同类型鼻咽上皮的细胞增生活性和组织细胞分化程度 ,但不能反映细胞是否恶性转化 ;不同组织类型鼻咽癌细胞存在增殖能力的差异 ,其增生差异程度可能是影响病人对放射线治疗敏感性及其预后的重要因素之一。

结节性筋膜炎201例临床病理分析

目的 探讨结节性筋膜炎的临床和病理特征。方法 对 2 0 1例结节性筋膜炎会诊病例进行总结分析并结合文献进行讨论。结果 结节性筋膜炎的好发部位为上肢 ,尤其是前臂 ;发病高峰年龄为 2 0～ 2 9岁 ;大多数(82 4% )病变最大径小于 3cm ;病程大多数 (81 6 % )不超过 3个月。具诊断意义的 4个主要的组织学特征为细胞整体排列方式呈长束状S形轻度弯曲 ;小裂隙状空间 ;血管外红细胞及黏液样间质基质。常常可以见到正常核分裂象。结论 诊断结节性筋膜炎应紧密结合其快速生长的临床特点 ,抓住 4个主要的组织学特征及常见正常核分裂象的特点。

细胞DNA倍体分析和EBERs原位检测在鼻咽癌早期诊断中的应用

目的 探讨鼻咽脱落细胞进行DNA倍体和EB病毒编码RNA (EBERs)检测在鼻咽癌诊断中的应用。方法 对 38例经细胞学诊断为鼻咽癌和 8例为正常的鼻咽细胞涂片分别进行图像分析测定细胞DNA含量和EB病毒EBERs原位杂交检测。结果 与病理细胞学诊断相比 ,DNA异倍体分析和EBERs检测诊断癌的敏感性分别为 5 0 %和 92 %,其特异性均为 10 0 %;其阴性预测值分别为 30 %和 72 %。结论 与EBERs检测相比 ,DNA异倍体分析的诊断敏感性和阴性预测值较低 ,差异具有显著性 (分别为P <0 0 0 1和P <0 0 5 )。证明在鼻咽细胞学涂片应用EB病毒原位杂交检测诊断鼻咽癌优于应用DNA异倍体分析诊断。与细胞DNA图像分析相比 ,EB病毒原位杂交检测具有客观、实验条件简单等优点 ,在鼻咽癌可疑病人的早期诊断和鉴别诊断上具有重要的实用价值。

实证医学与中医药研究和开发

临床疗效是衡量一切防治措施价值的最高准则，也是决定一个医疗卫生体系效益的最基本因素。实证医学的核心就是任何有关疾病防治的整体策略和具体措施的制定都应基于现有最严谨的关于其临床疗效的科学证据之一。使用无效甚至有害的防治措施在伦理上是不能接受的，更是对人类宝贵医疗资源的浪费。因此，中医药研究和开发应从临床疗效的验证开始。机理的研究、有效成份的探索和剂型的改进是重要的，但应以证实临床有效为前提。本文从 ４个方面进行了论证： １、一个防治措施若没有防治作用，就没有其相关的作用机理可被发现，也没有其相关的有效成份可被探索，更没有改进剂型的必要。２、中医药临床疗效评价，为从中医药中开发新药提供一个经济的、快捷的途径。因为它节省了用于无临床疗效的药物的临床前研究所需要的大量资源。同时也大大缩短了一个新药从开发到临床使用的时间。３、中医药临床疗效评价具有巨大的经济效益。临床上无效的防治措施被淘汰，而有效的被进一步推广。从而一个医疗体系会因减少使用无效的防治措施而提高效益。４、对中医药临床疗效的评价也是对其理论体系在实践上的检验。

鼻咽鳞癌肿瘤分化与c-fos癌基因表达的关系

目的：探讨鼻咽鳞癌组织分化与ｃ－ｆｏｓ癌基因的关系。方法：采用免疫组化ＡＢＣ法和图象分析技术检测１２５例鼻咽癌的ｃ－ｆｏｓ癌基因表达产物及其阳性胞核面积。结果：非角化性鳞癌ｃ－ｆｏｓ癌基因阳性率（４４．４％）高于角化性鳞癌（１７．７％），前者中低分化鳞癌与未分化癌之间的ｃ－ｆｏｓ阳性率差异没有显著性，而核面积明显增大的未分化泡状癌细胞核未见阳性表达。结论：鼻咽鳞癌细胞的分化程度与ｃ－ｆｏｓ癌基因的表达密切相关。

应用H.E染色的鼻咽癌细胞涂片进行DNA含量测定和EB病毒基因原位杂交的研究

分析鼻咽癌常规 H.E染色细胞涂片分别作 Feulgen染色检测 DNA含量和原位杂交检测 EB病毒编码 RNAs(EBERs)的效果 ;将常规 HE染色的 9例正常鼻咽细胞涂片和 38例鼻咽癌细胞涂片用 1%酸性酒精褪色 ,然后作 Feulgen染色 ,应用图象分析仪测定涂片细胞 DNA含量 ,并将 38例鼻咽癌细胞病例的阳性涂片进行 EBERs原位杂交检测 ;结果显示正常鼻咽细胞均为 DNA二倍体核型 ,38例癌阳性涂片中呈 DNA二倍体者 6例 ,DNA非二倍体者 32例 (84.2 % ) ,癌细胞核 EBERs阳性者 35例 (92 .1% ) ;结果表明 HE染色的鼻咽癌细胞学涂片经褪色后作 Feulgen染色和原位杂交检测 ,能较满意进行 DNA和 EBERs分析 ,表明常规 H.E染色和褪色处理均不影响 Feulgen染色和 EB病毒原位杂交的质量效果。本检测方法可靠、可行 ,适用于常规染色细胞学样本的回顾性研究和随访研究 。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对HepG2中SLIT2甲基化和细胞恶性表型影响的实验研究

目的评估5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dc)对人肝癌细胞系HepG2中抑癌基因SLIT2甲基化状态和细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,探讨SLIT2基因在肝癌中的作用及5-aza-2dc的体外抑制肝癌的效应。方法实验分为对照组和加药组,分别应用MSP、MTT、划痕实验、侵袭实验、Annexin V-FITC/PI双染实验检测细胞中SLIT2基因的甲基化状态和细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡的变化。结果 5-aza-2dc处理后,HepG2细胞株中SLIT2基因甲基化程度得到一定程度逆转,并呈现出剂量依赖性;划痕实验48 h后,对照组肝癌细胞明显向划痕的中央迁移,而药物处理组肝癌细胞迁移受到抑制;侵袭实验24 h后,加药组细胞的侵袭能力较对照组降低(P<0.05);Annexin V-FITC/PI双染实验显示加药组细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论 5-aza-2dc对HepG2细胞有抑制细胞增殖、促进凋亡及抑制细胞迁移和侵袭能力等作用,其中对抑制细胞迁移和侵袭的作用可能是通过逆转SILT2基因甲基化、恢复其表达来实现的。

中大研究者开发成功鼻咽癌基因诊断

香港鼻咽癌发病率甚高．估计每十万男性人口中即有二十七点五人患有此病(女性为十一点二)。相较于世界平均鼻咽癌发病率之十万分之一，本港鼻咽癌之昔遍．令人关注。

肝细胞癌MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因甲基化研究

目的了解肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma, HCC)中MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因的甲基化状况。方法应用甲基化特异性PCR(methylation specificPCR,MSP)技术,检测40例HCC和2例正常肝组织中4种基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化程度和临床参数之间的关系。结果正常肝组织中无基因甲基化。肝癌组织中,MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因的甲基化率分别是15%、77 5%、37 5%和30%。且87 5%的HCC中至少有一种基因甲基化。相应癌旁组织中,MGMT,DAPK,THBS1和RIZ1的甲基化率分别为5%、77 5%、27 5%和5%。RIZ1基因癌组织中的甲基化率明显高于癌旁组织(χ2 =8 658,P<0 05)。有2种基因甲基化的患者年龄较有1种基因甲基化组的年轻(t=2 389,P<0 05 )。有THBS1基因甲基化的患者年龄较无此基因甲基化组的年轻(t=3 047,P<0 05)。结论HCC中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件。

肝细胞癌中脆性组氨酸三联体基因的甲基化状况及其临床意义

目的了解肝细胞癌(HCC)中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的甲基化状况及其临床病理意义。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测45例HCC癌组织及其相应的癌旁组织、14例正常肝组织和4例HCC细胞株中FHIT基因的甲基化状况,并分析其与临床参数之间的关系。结果FHIT基因在HCC癌组织、癌旁组织、正常肝组织及HCC细胞株中的甲基化率分别是71.1%、64.4%、14.3%和75.0%。FHIT基因异常甲基化组与非甲基化组在术后1年无瘤生存率比较中有统计学差异(P=0.0430)。结论HCC中FHIT基因启动子甲基化是一种普遍的早期事件,可能预示着HCC患者预后较差。

肝细胞癌组织中RAS相关区域家族蛋白1A、肿瘤高甲基化基因1和P73基因的异常甲基化

目的探讨肝细胞癌中RAS相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、肿瘤高甲基化基因1(H IC1)和P73基因启动子异常甲基化状况及其与患者临床和病理因素之间的关系。方法收集肝细胞癌组织标本和对应的远癌组织标本各40例及2例健康人的肝组织标本;通过甲基化特异的聚合酶链反应方法检测这些标本中RASSF1A、H IC1和P73基因启动子区的甲基化状况。结果RASSF1A基因在癌和远癌组织中启动子区的甲基化率分别为90.0%和72.5%,癌组织中的甲基化率高于远癌组织(P<0.05)。H IC1基因在癌和远癌组织中的甲基化率分别为77.5%和70.0%。P73基因在癌组织中甲基化率为5.0%,在远癌组织没有发现甲基化。健康人肝组织中未发现任何上述基因的异常甲基化。远癌组织中H IC1基因甲基化患者的年龄[(48±14)岁]比无甲基化患者[(57±11)岁]小(T=2.049,P=0.047)。3个基因甲基化发生情况与患者性别、是否合并乙型肝炎、肝硬化、甲胎蛋白水平、肿瘤大小、有无包膜和门静脉癌栓以及TNM分期之间未发现有统计学相关性。结论肝细胞癌中RASSF1A和H IC1基因启动子的高甲基化是普遍现象,年轻肝细胞癌患者H IC1甲基化现象更常见。

人肝细胞癌染色体1p36.2-p36.3的肿瘤抑制位点的初步鉴定

目的对肝细胞癌（ＨＣＣ）的１号染色体远端可能含有肿瘤抑制基因（ＴＳＧ）的精细缺失片段定位，为克隆新的ＴＳＧ提供位点依据。方法使用１号染色体短臂（１ｐ）的４３个微卫星ＤＮＡ多态性标志，其中３０个标志集中分布在１ｐ３６．２ｐ３６．３，分析了３８例原发性ＨＣＣ的杂合子丢失（ＬＯＨ）。结果７４％（２８／３８例）肿瘤至少有１个位点的ＬＯＨ发生在１ｐ３６．２ｐ３６．３。丢失图排列鉴定了两个独特的最小共同丢失片段（ＳＣＤＲ）。第１个定位在１ｐ３６．３的ＳＣＤＲ位于Ｄ１Ｓ２１４５和Ｄ１Ｓ２８９３位点之间；第２个定位在１ｐ３６．２的ＳＣＤＲ位于Ｄ１Ｓ２４４和Ｄ１Ｓ４８９位点之间。更重要的是应用复合性聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测到第２个ＳＣＤＲ中的Ｄ１Ｓ４３４位点的纯合性丢失。结论高密度位点的ＬＯＨ分析证实的２个独特的丢失片段有力提示，至少有２个肿瘤抑制位点存在１ｐ３６．２ｐ３６．３及在ＨＣＣ的发生中扮演重要角色，并成为进一步克隆新的ＴＳＧ的重要定位基础和捷径。

人肝细胞癌4号染色体高频率杂合子丢失的研究

目的 为克隆新的肝细胞癌 (HCC)相关肿瘤抑制基因提供位点依据。方法 使用 4号染色体的 12个微卫星DNA多态性标志 ,分析了 48例原发性HCC的杂合子丢失 (LOH)。结果 44 %(2 1/4 8)和 6 3% (30 /4 8)的肿瘤组织中至少有 1个位点的LOH分别发生在 4p和 4q。丢失图排列鉴定了两个独立的共同丢失片段 (CDR)。第 1个定位在 4q2 2 q2 5的CDR位于D4S392和D4S16 2 5位点之间 ;第 2个定位在 4q2 7 q31的CDR位于D4S16 2 5和D4S16 5 2位点之间。结论 至少有两个肿瘤抑制位点存在于 4q。

肝细胞癌中抑癌基因的甲基化现象

目的了解肝细胞癌（HCC）中RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73基因的甲基化状况。方法应用甲基化特异性PCR技术，检测40例HCC和4例正常肝组织中5种基因启动子区域的甲基化状况，并分析每种基因甲基化程度和临床参数之间的关系。结果正常肝组织中无基因甲基化。癌组织中，RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73基因的甲基化率分别是：90％、77，5％、70％、30％和5％。相应癌旁组织中，RASSFlA、DAPK、FHIT、RIZ1和p73的甲基化率分别为77．5％、77．5％、62．5％、5％和0％。结论HCC中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件。

弥漫性星形细胞瘤分子生物学研究的新进展

肿瘤的形成和发展与基因改变间的关系是近年来肿瘤学研究的核心问题之一。大量的研究证实，肿瘤的形成起源于单个获得了癌基因和（或）抑癌基因改变的细胞；肿瘤的发展（包括由分化较好的肿瘤转变成分化差的肿瘤，局部浸润和远处转移）则是更多癌基因和抑癌基因受累后作用...