三七的18SrRNA,matK基因序列和HPLC化学指纹图谱分析研究

目的分析中药三七Panaxnotoginseng的18SrRNA和matK基因的分子特征和三七的化学指纹特征,为三七的正品药材基原鉴定提供分子和化学依据。方法采用PCR直接测序技术测定三七及其7种伪品的18SrRNA和matK基因部分核苷酸序列以及不同产地三七的DNA分子特征。利用HPLC的化学分析技术,明确产地对三七化学成分的影响,以及三七不同部位的化学指纹特征。结果(1)三七及其7种常见伪品的核糖体18SrRNA基因序列存在很大的差异。(2)不同产地的三七的核糖体18SrRNA和叶绿体matK基因序列特征完全一致,分别与GenBank上已报道的R1型(D85171)和M1型(AB027526)序列吻合。(3)不同产地的三七HPLC指纹图谱相似。(4)三七不同部位均具有其相对稳定的HPLC指纹特征,其中花、叶具有特有的指纹区,根、须根、剪口、筋条等不同商品规格的HPLC指纹图谱比较相似。结论基因序列标记能从分子水平定性分辨三七及其伪品的遗传背景差异,为中药品种标准化提供了先进可行、稳定可靠的分子标准;HPLC指纹图谱分析可以直观地为三七的化学成分定性,三七不同商品规格的特征性指纹有望成为以其为原材料的各种产品的质控标准,而三七不同部位(尤其是花和叶)的HPLC指纹图谱将有望成为制定三七花、三七叶新药用资源质控标准的依据。

植物基因组DNA提取方法学评析与验证

分子生物学实验多以提取研究对象的基因组DNA作为研究的起点,由于材料的来源、部位、形态等外在性质的不同,以及化学成分、组织结构等内在特点的差异,常会需要在提取基因组DNA时选择不同的方法,或作一些特殊的处理,如有的植物组织含有较多的多糖及酚、酯、萜等次生代谢产物,从而会影响到所提DNA的纯度及随后的实验分析。因而选择一种简单、快速而高效提取基因组DNA的方法常常成为实验中关键的一步。近几年来已有不少关于通用提取方法的报道,另外一些专属性的方法也有了较大进展。本文拟对这些方法加以总结、比较,以期对它们各自的特点作一剖析,并加以实验改进验证,以期能够在今后的实验中更好地应用。