不同品种马驹粪便菌群多样性及丰度的分析研究

本试验旨在研究3个品种(伊犁马、哈萨克马和纯血马)断奶马驹粪便菌群多样性及丰度的差异,为不同品种断奶马驹肠道微生物多样性的深入研究提供基础数据。试验选择伊犁马、哈萨克马和纯血马断奶马驹15匹,平均体重分别为(145.28±1.69)、(126.75±5.58) kg和(184.65±9.54) kg,以品种为单位,分为3个组进行试验。断奶前同一品种马驹与母马一起饲养,通过直肠采样法采集马驹粪便样品,采用高通量测序技术测定分析马驹粪便菌群多样性。结果显示:(1)哈萨克马粪便细菌observed_species、goods_coverage、PD_whole_tree、ACE和Chao1结果极显著高于伊犁马和纯血马马驹(P <0.01),纯血马马驹PD_whole_tree指标极显著高于伊犁马马驹,提高了3.99%(P <0.01);(2)门水平前10的物种中3个品种相同的菌有7种,分别是厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、疣微菌门、放线菌门、软壁菌门和螺旋体门,伊犁马和纯血马马驹粪便厚壁菌门丰度比哈萨克马提高63.50%和70.37%,差异极显著(P <0.01);拟杆菌门丰度各品种之间差异极显著(P <0.01),哈萨克马>纯血马>伊犁马;(3)科水平马驹粪便前10的物种中,相同的菌有瘤胃球菌科、毛螺旋菌科和克里斯滕森菌科;(4)属水平前10的物种中3个品种相同的细菌有链球菌属。因此,在本研究条件下,3个品种马驹中哈萨克马粪便细菌多样性显著性最高;厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、疣微菌门、放线菌门等是3个品种门水平相同的优势菌;在科水平和属水平3个品种马驹细菌组成和丰度差异较大。

中国马业主产区马产业的发展趋势

本文叙述了面对新世纪,我们必须充分发挥中国马业主产区的地区特点、民族特色,从国际视角出发对马产业进行多层面、多方位的研究,制定出中国马业主产区马产业综合开发与利用的中、长期发展规划、马业科技人才队伍的建设规划、培养教育、马业科研项目的申请立项和成果的取得等。在此基础上本文提出了中国马业主产区马业发展需要转型升级"六个转变"的新设想,转变观念。为中国马业主产区畜牧业产业调结构、转方式献计献策,努力使马产业综合开发像我国的奶牛业、肉牛业及肉羊业一样,成为中国畜牧业经济发展的新的经济增长点。

不同强度遛马对伊犁马900 m测试赛成绩及血气指标的影响

【目的】分析使用遛马机监测不同强度遛马对伊犁马机体状态及900 m速度赛运动的影响,为确定伊犁马赛前最佳遛马程度提供理论依据。【方法】选取8匹2岁训练成熟的速度型伊犁马母马,采用遛马机监测,分别在2、3和4 m/s下遛马15、30、45和60 min,共12个遛马强度,每次遛马后进行900 m速度赛,对遛马即刻的血气指标及速度赛成绩进行差异性分析。【结果】12组遛马强度中,Ⅻ组遛马后900 m途程比赛成绩显著高于Ⅷ组、Ⅸ组(P<0.05)。Ⅸ组Glu浓度极显著高于Ⅰ组、Ⅹ组(P<0.01),显著高于Ⅲ组、Ⅶ组、Ⅻ组(P<0.05);Ⅰ组、Ⅸ组Hb浓度极显著高于Ⅲ组(P<0.01),显著高于Ⅳ组(P<0.05);Ⅸ组Hct浓度显著高于Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅶ组、Ⅻ组(P<0.05);Ⅸ组PvO 2浓度极显著高于Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.01),显著高于Ⅶ组(P<0.05);Ⅸ组SvO 2浓度极显著高于Ⅰ组(P<0.01),Ⅵ组、Ⅶ组pH浓度显著高于Ⅰ组、Ⅸ组、Ⅹ组(P<0.05),Ⅴ组pH浓度显著高于Ⅸ组、Ⅹ组(P<0.05),Ⅳ组pH浓度显著高于Ⅸ组(P<0.05);Ⅰ组Lac浓度极显著高于Ⅴ组、Ⅵ组、Ⅶ组、Ⅷ组、Ⅹ组、Ⅺ组(P<0.01),显著高于Ⅸ组、Ⅻ组(P<0.05);Ⅳ组BE(ecf)浓度极显著高于Ⅴ组、Ⅸ组(P<0.01),显著高于Ⅵ组、Ⅹ组、Ⅻ组(P<0.05);Ⅳ组BE(b)浓度极显著高于Ⅴ组、Ⅸ组、Ⅹ组(P<0.01)。【结论】伊犁马900 m速度赛竞赛马匹在Ⅸ组(4 m/s 15 min)遛马程度下热身,血液中血糖浓度升高,机体携氧能力增强,有效提高后续竞赛水平。

母马补喂支链氨基酸对哺乳马驹生长性能和粪便菌群的影响

[目的]本试验旨在探究泌乳期伊犁马母马补喂不同剂量的支链氨基酸(BCAAs)对哺乳期马驹生长性能和粪便菌群的影响,为保障马驹哺乳期生长及健康提供参考依据。[方法]选择泌乳期母马及其马驹各20匹(哺乳期马驹在2~3月龄之间,初始体重为97.60 kg±13.24 kg;泌乳期母马体重为392.90 kg±12.18 kg),随机分成4组,每组母马及其马驹各5匹,分别为对照组和试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,在相同饲养管理条件下饲养67 d(预饲期7 d,试验期60 d)。试验期间,对照组与试验组母马每天补喂精料补充料2 kg,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组母马分别额外补喂38、76、114 g/d BCAAs。试验前1 d和第60天测量马驹的体尺和体重数据,第60天采用直肠取粪法采集马驹粪便,分析马驹粪便菌群多样性。[结果]试验第60天,试验Ⅲ组马驹的胸围和体重显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅱ组马驹的体重显著高于对照组(P<0.05);试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和对照组粪便菌群OTUs数量分别为4553、4483、4607和3839。各组间Alpha多样性指数以及观测到的物种数均无显著差异(P>0.05)。试验Ⅱ组马驹粪便螺旋体菌门相对丰度显著高于对照组和试验Ⅰ组(P<0.05),毛螺旋菌科相对丰度显著高于对照组和试验Ⅲ组(P<0.05);试验Ⅰ和Ⅱ组的瘤胃球菌科相对丰度均显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅲ组的理研菌科相对丰度显著高于对照组(P<0.05)。在属水平上,试验Ⅱ组密螺旋体属的相对丰度最高且显著高于试验Ⅰ组(P<0.05),且瘤胃球菌属相对丰度显著高于其他3个组(P<0.05);试验Ⅲ组普氏菌科未分类菌004相对丰度极显著高于对照组和试验Ⅰ组(P<0.01)。LEfSe分析与PICRUSt2功能预测所表现的差异项目均与肠道发酵代谢、短链脂肪酸的生产、氨基酸的代谢相关。[结论]给伊犁马母马补喂不同剂量的BCAAs可促进哺乳马驹胸围和体重的增长,提高其肠道有益菌群的丰度,降低有害菌群的丰度,以母马补喂76 g/d BCAAs效果最佳。

伊犁马与哈萨克马背最长肌脂质代谢与转录组分析

本研究旨在通过比对伊犁马与哈萨克马背最长肌的差异表达基因,筛选与马脂质代谢相关的候选功能基因。以伊犁马和哈萨克马为研究对象,采集所选马匹背最长肌样本,对所采样本进行脂质代谢和转录组检测,筛选脂质代谢差异代谢物及差异表达基因,并对筛选出的差异表达基因进行富集分析。结果显示,与哈萨克马相比,伊犁马背最长肌中共筛选出21种显著下调的脂质差异代谢物;两组肌肉样本中共筛选出718个差异表达基因,与哈萨克马相比,伊犁马中有300个基因表达显著上调,418个基因表达显著下调;差异表达基因显著富集在78个GO条目中,其中与脂质代谢相关的主要有蛋白质转运、有机物运输、细胞质、钙离子结合和ATP酶活性等;KEGG显著富集在41条通路中,其中与脂质代谢相关的通路主要有脂质与动脉粥样硬化、糖尿病性心肌病、丙酸代谢和EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等。本研究初步确定了APOA1、MPC1、ACOX1、EGF、VLDLR、GAS6和ABCA1等7个基因参与了马脂质代谢,为马脂质代谢的分子机制研究提供了数据参考。

伊犁地区马媾疫的诊断与治疗效果的观察

【目的】为研究新疆伊犁地区马媾疫的发病情况和药物治疗效果,【方法】对疑似有马媾疫的马匹,通过ELISA方法检测马匹血清中马媾疫抗体,采用PCR方法检测马匹生殖道黏膜拭子中马媾疫锥虫,伊氏锥虫PCR检测排除假阳性,对确诊马媾疫的马匹使用抗锥虫药物治疗并监测治疗效果。【结果】21匹临床表现疑似马媾疫的马匹,ELISA抗体检测结果显示阳性率为19.05%(4/21);用PCR检测出3匹马呈阳性,同时该3匹马均为抗体检测呈阳性马匹,PCR与ELISA检测阳性符合率75%;抗体阳性而PCR阴性马匹使用伊氏锥虫PCR检测呈阴性,结合流行病学分析该马匹也为马媾疫。4匹阳性马经抗锥虫药物治疗后,2匹马痊愈,1匹联合抗菌药物巩固治疗后痊愈,1匹死亡。【结论】马媾疫ELISA抗体检测联合PCR分子检测可提高马媾疫的检出率,诊断时需排除伊氏锥虫感染。早期发现马媾疫通过药物治疗后易痊愈,疾病进展至后期难以治愈成功。本研究为新疆伊犁地区马媾疫的诊断和治疗提供科学依据。

马乳、驴乳、驼乳对小鼠生长性能、免疫及抗氧化指标的影响

文章探究马乳、驴乳、驼乳对小鼠生长、免疫和抗氧化能力的影响。以4周龄小鼠32只为研究对象,随机分为对照组、马乳组、驴乳组和驼乳组,每天根据体质量分别灌胃10g/kg体质量蒸馏水、马乳、驴乳和驼乳,在第29天处死小鼠后采集肝脏组织,测定小鼠的免疫和抗氧化指标。结果表明,与对照组相比,马乳组和驼乳组15~21d和22~28d时平均日采食量极显著降低,马乳组脾脏指数、白介素1β、超氧化物歧化酶活性显著升高,白细胞介素-6、丙二醛浓度显著降低;驴乳组脾脏指数、蛋白质浓度、超氧化物歧化酶活性显著升高,白细胞介素-6、丙二醛浓度显著降低;驼乳组脾脏指数、白介素1β、蛋白质浓度、超氧化物歧化酶活性显著升高,丙二醛浓度显著降低。灌灌胃马乳和驼乳能够降低小鼠日采食量,灌胃马乳、驴乳、驼乳能够改善小鼠的免疫和抗氧化能力。

马家柚叶绿体基因组特征及其密码子偏好性分析

【目的】为了明确马家柚叶绿体基因组结构特征及其与同属类群的系统发育关系,阐明马家柚在柑橘属中的分类地位,对马家柚叶绿体基因组的特征及其密码子的偏好性进行分析。【方法】采用DNBSEQ-T7测序平台对马家柚进行测序,采用Noveplastys、CAP3、GeSeq和tRNAscan-SE软件对马家柚叶绿体基因组进行组装、注释;采用CGViewServer、MISA、REPuter、CodonW、Gview、IRscope、NADnaSP6.0软件对马家柚叶绿体基因组特征进行分析;采用MAFFT 7.0和FastTree 2.1.10软件对马家柚及其85个同科种和山小橘属3个外群种叶绿体基因组进行序列比对和建树。【结果】马家柚叶绿体基因组全长160186 bp,包括1个大单拷贝(LSC)区、1个小单拷贝(SSC)区和2个反向重复(IR)区,为典型闭合环状双链结构。马家柚叶绿体基因组共注释到133个功能基因,包括88个编码蛋白(CDS)基因、8个核糖体RNA(rRNA)基因和37个转运RNA(tRNA)基因。马家柚叶绿体基因组共检测到79个简单序列重复(SSR)和34个长序列重复(Longrepeat)。马家柚叶绿体基因组非编码区的变异程度高于基因编码区,LSC区的变异性>SSC区>IR区,SC/IR边界较为保守。马家柚叶绿体基因组平均ENC值为48.02,密码子偏好性较弱。马家柚叶绿体基因组密码子使用偏好性主要受自然选择的影响,受内部突变的影响小。马家柚叶绿体基因有10个最优密码子(AAU、UGU、AAA、UUU、GCU、GGA、CCA、ACU、CGU、AGU),均以A、U结尾。马家柚与西双版纳东试早柚(KY055833,来源地:云南)、日本夏橙(ON193075,来源地:韩国)、福建六月早蜜柚(MT527726,来源地:福建)、福建琯溪蜜柚(MN782007,来源地:福建)有亲缘关系。【结论】马家柚是一个柑橘属中较为独特的品种,该研究结果为进一步研究马家柚的遗传资源、物种资源鉴定和系统发育分析提供了理论依据。

压缩感知在斜轴式马达声强成像中的应用研究

斜轴式轴向柱塞马达内部噪声源距离较近,如马达配流盘进、出油口间的距离为38 mm,且马达噪声源存在同频及倍频现象。斜轴式马达内部密集复杂的噪声源,导致频谱分析方法难以准确识别同频及倍频信号,传统声强测量的最高分辨率为50 mm,无法满足马达内部噪声源的辨识精度要求。针对传统方法难以准确辨识马达噪声源的问题,文中提出了一种基于压缩感知的声强测量方法,将压缩感知理论运用于声强云图高精度重构中,获取马达高分辨率的声强重构图像。首先,通过对斜轴式马达进行噪声辐射仿真分析,获取其外表面声场特性;然后,以马达外表面声强云图为先验信息,设计应用于马达声场的压缩感知框架,获取高精度重构马达声强云图;最后,通过马达传统声强测量与压缩感知声强测量的对比实验验证压缩感知理论对于提高马达噪声源辨识精度的可行性。结果表明,基于压缩感知的声强测量方法将马达噪声源辨识尺度从原来的70 mm提升至30 mm,提高了马达噪声源的辨识精度,实现了马达噪声源的高精度定位。

补喂乙酸钠对放牧伊犁马母马和马驹血液生化指标的影响

试验旨在探究放牧条件下给伊犁马母马补喂乙酸钠对母马和马驹血液生化指标的影响。选择产驹日期相近,年龄5~8岁,胎次2~4胎,产驹后30 d的伊犁马母马及其马驹各12匹,共24匹,母马随机分为2组,每组6匹,分别为对照组和试验组,马驹分组与母马保持一致。在相同的放牧条件下,对照组母马不进行任何脂肪酸补喂,试验组母马每天每匹补喂乙酸钠85 mg/kg·BW,进行为期90 d的补喂试验,定期采集母马和马驹血液,测定血液生化指标。结果显示:①试验组母马血中尿素含量和对照组相比显著提高4.27%(P<0.05)。②试验组母马血中总胆红素、直接胆红素和总胆固醇含量分别比对照组极显著提高111.33%、127.50%和11.39%(P<0.01),三酰甘油含量比对照组极显著降低39.29%(P<0.01)。③试验组母马血中谷丙转氨酶、碱性磷酸酶和γ-谷氨酰转移酶活性分别比对照组极显著提高34.35%、23.48%和61.17%(P<0.01),谷草转氨酶比对照组显著提高5.10%(P<0.05);试验组马驹血中谷草转氨酶活性比对照组极显著提高21.59%(P<0.01)。综上所述,在放牧条件下,给伊犁马母马补喂乙酸钠,对母马和马驹血液氮、糖、脂代谢和酶活性具有一定的改善作用。

不同品种孕马血浆生化指标比较

【目的】研究妊娠后期母马血液常规生化指标的变化,为妊娠母马的健康养殖和科学饲养提供参考依据。【方法】选择平均年龄(7.50±1.50)岁、胎次相近(3~4)胎、膘情、健康状况一致的伊犁马18匹,哈萨克马21匹,纯血马21匹,杂交马(伊犁马♀×奥尔洛夫马♂)19匹。以品种为单位,分为4个试验组,在相同日粮营养水平和管理条件下,饲养试验90 d。试验期结束当天,早晨空腹颈部静脉采集孕马血液并测定相关指标。【结果】(1)纯血马血浆中总蛋白、甘油三酯和低密度脂蛋白分别高于其他三个品种58.39%(P<0.05)、44.01%(P<0.01)和32.16%(P<0.01)。(2)其中伊犁马、哈萨克马和纯血马血浆总胆红素极显著高于杂交马(P<0.01),分别提高了84.51%、131.35%和93.17%,伊犁马和哈萨克马直接胆红素分别高于杂交马82.50%和89.83%(P<0.05)。(3)伊犁马和纯血马葡萄糖水平分别高于哈萨克马106.93%和148.18%(P<0.01)。【结论】在相同营养水平和饲养管理条件下,因其品种差异,纯血马妊娠期与其他品种的蛋白质、肝功能酶活力及血糖水平都较为优异。而杂交马在妊娠期间肝功能代谢及血糖水平方面相较于其他3个品种马较低。

马常见繁殖障碍症的诊治

公母马生殖系统疾病是造成马繁殖率低的重要原因。本综述就母马子宫内膜炎、卵巢囊肿和持久黄体,公马睾丸炎、精囊炎和尿道炎进行探讨,目的是为马匹养殖者提供简单可行的生殖系统疾病诊治方法,降低母马的空怀率,减少损失。

肉用型伊犁马的血液转录组比较分析

旨在通过对伊犁马不同肉用性能血液转录组进行研究,筛选并分析差异表达基因,为后续伊犁马肉用性能相关研究提供分子基础。本研究从112匹肉用型伊犁马核心群中选取4~5岁健康状况良好的伊犁马母马12匹,依据背膘厚4.4 mm,眼肌面积31.5 cm^(2)以上为肉用性能较好组马匹(HW组),平均体重为528.67 kg;背膘厚度2.2 mm,眼肌面积19.5 cm^(2)以下为普通组马匹(LW组),平均体重为327.00 kg,每组各6匹,采集血样进行转录组测序。生物信息学分析结果表明,筛选出差异表达基因共370个(P<0.05),其中上调基因158个,下调基因212个。GO功能富集分析显示,伊犁马肉用性能可能与G-蛋白偶联受体信号通路过程、细胞外区域、跨膜信号受体活性等条目有关。KEGG通路分析显示,伊犁马肉用性能可能与蛋白质的消化和吸收、甲状腺激素合成、皮质醇的合成和分泌等通路有关。CTSH、SSTR1、APOA1和ITM2A等是影响伊犁马肉用性能的候选基因,研究结果为肉用型伊犁马生长发育的分子调控机制提供参考。

巴马县定马林场主要森林病虫害防治对策

我国国有林场肩负者提高森林覆盖率、守护绿水青山、助力乡村振兴的责任与义务。但就目前而言,我国部分国有林场受病虫害侵蚀严重,导致林场的社会效益、经济效益均遭受不同程度的影响。基于此,以广西巴马县定马林场为例,以茎腐病、根腐病、青枯病、两点褐鳃金龟、桉扁蛾及大蟋蟀等为切入点,分析森林病虫害的防治对策,旨在为其他国有林场提供参考。

调教训练对伊犁马2000 m速步赛血气指标的影响

【目的】研究调教训练对伊犁马2000 m速步赛血气指标的影响,为制定科学调教训练方案提供数据参考。【方法】选取未经专项速步赛调教训练的健康伊犁马(2岁)12匹,进行为期12周的速步专项训练,训练期间每4周组织一次速步测试赛,记录比赛成绩,并采集马匹赛前、赛后即刻、赛后30 min及赛后60 min的血液测定血气指标。【结果】优秀组和普通组马匹训练中期和训练后期的比赛用时极显著低于训练前期(P<0.01)。pH训练中期显著低于训练前期(P<0.05)。乳酸(lactic acid,Lac)训练中期极显著高于训练前期(P<0.01)。Na+训练中期极显著低于训练前期和后期(P<0.01)。Ca^(2+)训练后期极显著低于训练前期(P<0.01),显著低于训练训练中期(P<0.05)。Cl^(-)训练后期显著低于训练前期(P<0.05),训练中期极显著低于训练前期(P<0.01)。阴离子间隙(anion gap,AG)训练后期显著高于训练前期(P<0.05)。血糖(glucose,Glu)训练后期极显著高于训练前期和训练中期(P<0.01)。肌酐(creatinine,Crea)训练中期极显著高于训练前期和训练后期(P<0.01)。【结论】调教训练后2000 m伊犁马速步赛的成绩、酸碱平衡能力、气体交换能力及葡萄糖供应能力均显著提高。在训练过程中,适当补充电解质来维持机体离子水平。血气指标可以作为马匹运动训练中的健康监测手段。

肢体成角畸形马驹及其母马的血液生理生化、炎性因子和激素变化研究

本研究旨在调查罹患肢体成角畸形(angular limb deformities,ALDs)的新生马驹发病率,在此基础上对ALDs马驹及其母马的血液生理生化、炎性因子和激素指标与肢体正常马驹及其母马进行比较研究。在新疆伊犁昭苏县对460匹2~28日龄的新生马驹进行临床调查和诊断,通过形态检查和影像学检查,诊断筛查ALDs马驹和其母马。以肢体正常马驹及其母马作为对照,测定其血液生理指标、生化指标、炎性因子和激素含量。临床调查发现肢体异常马驹30匹,占所调查马驹的6.52%。确诊罹患ALDs马驹16匹,占肢体异常马驹总数的53%,ALDs的发病率为3.48%。ALDs马驹的单核细胞、嗜酸性粒细胞显著高于正常马驹,ALDs母马的平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量显著高于正常母马。ALDs马驹的血钙、血磷、血糖、肌酐、镁水平显著低于正常马驹,而碱性磷酸酶、总蛋白、白蛋白显著高于正常马驹;ALDs母马的血钙、血磷、血糖、总胆红素、甘油三酯、总胆固醇、镁水平显著低于正常母马,而天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、白蛋白显著高于正常母马。ALDs母马的肿瘤坏死因子、白细胞介素6水平显著高于正常母马,而白细胞介素10水平显著低于正常母马。ALDs马驹的甲状旁腺激素、1,25-二羟基维生素D3水平显著高于正常马驹。其余指标无显著变化。本研究探明了新疆伊犁昭苏县新生马驹的ALDs发病率现状。结果提示,ALDs马驹及其母马在钙磷代谢、血脂水平以及特定激素水平与正常对照组的显著差异变化与新生马驹骨骼发育异常及ALDs的发生密切相关。本研究为揭示ALDs的病因提供了血液生理生化数据支撑,对ALDs的早期辅助诊断具有重要临床参考价值。

利用微卫星多态性鉴别不同马品种试验

【目的】选取3个马匹品种(柯尔克孜马、俄罗斯速步马、纯血马),对其5个微卫星DNA座位AHT4、ASB2、HMS3、HMS7、LEX3进行多态性分析,利用SPASS分析软件,对3个马品种进行初步鉴别。【方法】以柯尔克孜马、俄罗斯速步马、纯血马为实验对象,分别采集血样10 mL,枸橼酸钠抗凝,实验室中对所选取的5个微卫星DNA座位进行非变性丙烯酰胺电泳(PAGE)检测,用Popgene32分析数据。比较品种间有效等位基因数(Ne)、等位基因频数分布间的差异,辅以各品种特有的基因型条带对三个马品种进行初步鉴别。【结果】对5个微卫星标记的有效等位基因数(Ne)数值进行分析,发现纯血马与俄罗斯速步马、柯尔克孜马与俄罗斯速步马呈显著差异关系(P<0.05),成为初步鉴别三个马品种的重要依据;对5个微卫星标记进行非变性丙烯酰胺电泳(PAGE)检测,发现ASB2微卫星标记的基因型中,柯尔克孜马有区别于其他两个品种马的基因型:CC、CD、EG、EH基因型,纯血马所特有的基因型为BI、JJ、KK基因型;AHT4微卫星标记的等位基因型中,柯尔克孜马所特有的基因型为DF、EF、GG基因型,纯血马所特有的基因型为BC基因型;HMS3微卫星标记的等位基因型中,纯血马所特有的基因型为CC基因型;HMS7微卫星标记的等位基因型中,纯血马所特有的基因型为AA基因型。【结论】3个马品种的鉴别可以通过筛选出的微卫星位点的有效等位基因数(Ne),以及所选微卫星标记的等位基因,辅以各品种特异的基因型电泳条带,从而达到初步鉴别三个马匹品种的目的。

稳定表达马NLRP3 HEK293T细胞系的构建及用于马NLRP3炎性小体的研究

为构建稳定表达马NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(eqNLRP3)的细胞系,并用于eqNLRP3炎性小体激活的研究,本研究采用同源重组的方法将经PCR扩增的eqNLRP3和GFP基因克隆至pLPCX中,构建重组表达质粒pLPCX-Flag-eqNLRP3-GFP,经PCR和测序鉴定正确后与pCGP、pVSV-G共转染HEK293T细胞,48 h后获得携带eqNLRP3的慢病毒。将该慢病毒感染HEK293T细胞,并采用嘌呤霉素筛选携带绿色荧光(GFP+)的单克隆细胞。采用western blot鉴定该细胞中eqNLRP3蛋白的表达、反应原性及细胞遗传稳定性。Western blot结果显示在146.1 ku处出现特异性条带,且传至1、4、7、10代的细胞均出现该条带,表明获得稳定表达eqNLRP3蛋白的HEK293T细胞系HEK293Teq NLRP3(2G1细胞)。采用NLRP3特异性激活剂尼日利亚菌素(Nig)处理2G1细胞1 h;将表达质粒pCDNA3.1-eqASC-HA转染2G1细胞,加入Nig处理1 h,采用激光共聚焦显微镜分别观察上述细胞中e NLRP3的聚化状态,及在2G1细胞中表达eqASC后能否形成ASC斑点(eqNLRP3-eqASC的复合物,即NLRP3炎性小体激活的典型特征)。结果显示,正常2G1细胞中呈绿色荧光的eqNLRP3弥散分布于细胞质中,加入Nig后弥散的eqNLRP3在细胞质中形成典型绿色荧光的点状聚集。转染表达eqASC质粒的2G1细胞中出现的红色荧光(eqASC)主要在细胞质中呈弥散性分布;转染表达eqASC的2G1细胞用Nig处理后形成2.5μm的中间呈绿色荧光四周呈红色荧光的典型ASC斑点。上述结果表明2G1细胞可以响应特异性激活剂并诱导eqNLRP3的聚化,招募ASC形成ASC斑点。将本实验室构建的iGLuc报告系统中的4种表达炎性小体蛋白质粒分别与EIV各蛋白对应质粒共转染HEK293T细胞,24 h后利用该报告系统检测各组细胞中的荧光素酶活性;采用western blot检测各共转染细胞中各EIV蛋白的表达对该系统中4种炎性小体蛋白表达的影响,通过上述两个试验筛选能够激活eqNLRP3炎性小体的EIV蛋白。iGLuc报告系统检测结果显示,仅表达EIV M2蛋白质粒的细胞上清中荧光素酶活性显著高于阳性对照组(P<0.05);western blot结果显示,EIV M2蛋白的表达对4种炎性小体蛋白的表达均无明显影响,表明EIV M2蛋白激活了eqNLRP3炎性小体。将表达EIV M2蛋白及表达eqASC的质粒共转染2G1细胞,24 h后经激光共聚焦显微镜观察以进一步验证上述结果。结果显示,该组细胞中带绿色荧光的eqNLRP3出现点状聚集,并招募细胞质中带红色荧光的eqASC形成了ASC斑点,与i GLuc报告系统筛选结果一致。上述结果表明,EIV感染对HEK293Teq NLRP3细胞系中的eqNLRP3产生了聚化效应,并招募ASC形成ASC斑点。本研究建立了稳定表达eqNLRP3蛋白的HEK293T细胞系,为马属动物病原感染激活NLRP3炎性小体的评价奠定了物质基础。

1株马源马红球菌的分离鉴定及耐药性与致病性分析

【目的】马红球菌(Rhodococcus equi,R.equi)感染可导致宿主发生致命的化脓性肺炎。本研究拟对从新疆地区1例死亡马驹肺脓汁中分离获得的马红球菌临床菌株进行生物学特性分析,旨在为其临床诊疗提供指导。【方法】采集死亡马驹肺脓汁样本进行细菌分离培养。通过菌落形态观察、革兰染色、生化反应、16S rRNA PCR扩增测序鉴定菌株种属并分析其遗传进化关系;使用药敏纸片扩散法鉴定分离菌株药物敏感性;利用小鼠感染试验评估菌株致病性。【结果】分离菌株在NANAT平板上生长状态良好,菌落呈灰黑色、黏稠样,在TSA培养基上呈奶白色、黏液状,革兰染色镜检可见两头钝圆的球杆状或棒状的革兰阳性球杆菌。生化反应结果显示,分离菌株不发酵糖类,不产生靛基质、不液化明胶,氧化酶阴性,分解尿素。16S rRNA测序结果显示,分离菌株与马红球菌分离株WGC11为同一分支,亲缘关系较近。药敏试验结果显示,分离菌株对多黏菌素B及β-内酰胺类药物耐药,对其余所选抗菌药物均敏感。小鼠致病性试验结果显示,小鼠腹腔攻毒4 d内死亡率为33.3%(2/6),剩余存活小鼠剖检可见肺部出现脓肿及出血,肝脏及脾脏肿大、出血淤血;组织病理学观察可见脾脏、肝脏、肺脏组织均发生不同程度病变。【结论】本研究从新疆地区马驹肺样本中分离鉴定出1株致病性马红球菌,该菌株具有较强致病能力且存在天然耐药,试验结果为马红球菌致病机制的研究与防控奠定了理论基础。

阜阳三河马的饲养管理技术及马术发展

阜阳三河马是我国的一种传统名马,体质结实干燥,结构匀称,外貌俊美,肌肉结实丰满,气质属平衡稳定型,富有悍威,性情温驯,而且其耐力持久,适应力强,被誉为“中华第一名马”。近几年,阜阳当地极其重视三河马的饲养管理,注重提供优质的饲料和水源,提升其品质和竞技水平,推动阜阳三河马在现代马术运动中的发展和应用。