高原反应的脑病理与水通道蛋白-4(AQP4)的相关性实验研究

目的研究高原反应的脑病理变化及发病机制.方法Wistar大白鼠56只,分正常对照和实验组,实验组进入模拟5 000 m高原环境饲养,取4、24、48 h、3 d、2、4周各组各时相点动物活杀取脑作光、电镜一般形态学观察,硝酸镧示踪血管通透性观察,水通道蛋白(AQP4)和mRNA光、电镜免疫组化和原位杂交,GLU(glutamate,谷氨酸),GABA(gamm-aminobutyric,γ氨基丁酸)含量检测.结果光、电镜观察显示实验组早期(4～72 h)脑毛细血管内皮细胞出现吞饮泡增多、线粒体肿胀、紧密连接松弛、胶质足肿胀以及(24、48 h)硝酸镧漏出血管腔等病理改变,神经细胞无明显病理变化;免疫组化和原位杂交显示AQP4在血管内皮细胞、胶质纤维阳性表达,AQP4 mRNA在毛细血管内皮细胞核和胶质细胞核呈阳性表达,二者的表达情况在实验组早期增高.结论BBB病变是动物进入高原出现较早的病理变化;早期胶质细胞肿胀可能是一种保护性调节;AQP4 mRNA的表达变化可能是调节BBB通透性并维持水平衡的分子机制.

血管性痴呆大鼠的记忆行为改变与突触结构参数的关系

目的 研究大鼠在慢性脑灌注不足状态下的记忆行为改变以及大脑皮层和海马的突触结构参数改变 ,探讨记忆行为改变和突触结构参数的关系。方法 采用老年大鼠持久双侧颈总动脉结扎造成慢性脑缺血动物模型 ,分为正常对照组、缺血 2月组、缺血 4月组。电脑控制穿梭箱系统观察大鼠记忆行为改变。电镜下观察突触超微结构改变 ,应用体视学方法和图像分析 ,对突触结构参数 (突触数密度、突触活性带长度、圆盘面积、表面密度 )进行分析。并分析两者关系。结果 电脑控制穿梭箱系统观察大鼠主动回避反应 (AAR)及被动回避反应 (PAR)在缺血 2月及 4月组均下降。皮层及海马在缺血 2月组、缺血 4月组突触数密度 (Nv)均明显下降。海马在缺血 2月组、缺血 4月组突触活性带长度 (L)、突触连接带圆盘面积 (S)及突触表面密度 (Sv)均下降 ;皮层在缺血 2月组、缺血 4月组未见明显改变。结论 在慢性脑灌注不足状态下的突触数密度下降、突触活性带长度减小与记忆行为改变有关。

皮下滑膜囊动物模型的建立及其生物学特性实验研究

目的 建立动物皮下滑液囊模型 ,研究其功能结构特点 ,探讨形成的可能机制。方法 在兔皮下埋置硅胶气囊 ,经扩张按摩刺激 ,逐渐形成包裹囊腔 ,通过对大体形态、组织学和超微结构、细胞表型、UDPGD功能性酶以及滑囊液HA浓度的研究 ,与正常滑膜囊比较。结果 术后 2周时 ,皮下形成“滑囊腔”结构 ,肉眼见囊腔内表面光滑 ,扫描电镜见囊壁内表面有微绒毛结构 ,囊壁表层有A、B型细胞的超微结构特征 ;细胞分别表达CD68、VCAM 1和UDPGDmRNA ,囊壁表层UDPGD酶活性高于深部 (P <0 .0 1) ;囊内液体清亮透明 ,未发现细胞成分 ,透明质酸近似浓度 160ng ml,高于血清水平 (P<0 .0 1)而接近关节滑液 (P >0 .0 5 )。结论 皮下形成的滑囊腔模型 ,其功能结构在一定程度上类似关节滑囊腔 ,囊壁表层细胞具有滑膜细胞的表型特征。

hBD_2修饰真皮多能干细胞促进感染创面修复的初步实验研究

目的观察人β防御素2(humanβdefensin2,hBD2)修饰的大鼠真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)移植后对细菌感染创面修复的影响。方法制作大鼠全层皮肤切割伤伴感染模型,点状注射的方法将hBD2腺病毒载体转染修饰的dMSCs移植到伤口,通过测定痂下菌量及创面愈合面积百分率和创面愈合时间等评价hBD2修饰的dMSCs局部移植的促愈效果。结果和局部单纯移植dMSCs组和单纯损伤组相比,hBD2修饰的dMSCs移植组痂下菌含量低(P<0.05),且创面愈合时间明显缩短(P<0.05)。结论hBD2修饰的dMSCs可有效地促进大鼠感染创面的修复。

核心蛋白聚糖抑制兔屈趾肌腱术后粘连的实验研究

目的探讨核心蛋白聚糖(decorin,DCN)抑制兔屈趾肌腱术后粘连的效果。方法日本大耳白兔18只,其后肢第2趾供实验用,将伸屈趾肌腱横断,作改良的Kessler缝合,不缝合腱鞘,右侧腱鞘内肌腱缝合位点直接注射DCN100μl(0.25mg/ml)作为实验趾;左侧直接注射PBS100μl作对照趾。术后2、4及8周取材,行大体观察、生物力学检测和组织学观察。结果大体观察,术后各时间点实验趾的粘连程度明显小于对照趾。生物力学检测显示各时间点实验趾肌腱滑移距离和关节总屈曲度明显大于对照趾,差异有统计学意义(P<0.05)。组织学观察见实验趾术后2周成纤维细胞增生不明显,4周增生明显,8周胶原纤维排列规则,直径大小均一;对照趾2周成纤维细胞增生,4周成纤维细胞增生减少,8周胶原纤维排列不规则,直径大小不一。结论核心蛋白聚糖能明显减少屈趾肌腱损伤的术后粘连,调节胶原纤维的形成,促进肌腱愈合。

无滑膜肌腱在体滑膜化实验研究

目的 探讨无滑膜肌腱在皮下滑囊腔内滑膜化的可行性。方法 将兔腓长肌腱段放入预制的自体皮下滑囊腔进行在体培养 ,通过大体、组织学、超微结构以及免疫组化等观察 ,对无滑膜肌腱滑膜化改造情况进行研究。结果 无滑膜肌腱在人造皮下滑囊腔存活游离状态 ,呈其表面形成光滑的膜样结构 ,超微结构显示滑膜化肌腱表面光滑 ,有微孔样结构 ,表层细胞具有滑膜A、B型细胞的超微结构特点 ,免疫组化显示表达VCAM 1和CD68阳性 ,UDPGD酶高活性。

去甲二氢愈创木酸对活体血管生成作用的实验研究

目的 观察去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对在体血管生成的影响。方法 采用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)试验 ,检测NDGA对血管生成的影响。结果 2 .5× 1 0 -6mmol以上量的NDGA均对血管生成有抑制作用 ,在实验剂量 ( 0 .5～ 5 0 )× 1 0 -6mmol范围内 ,随给药量的增加 ,其抑制作用愈加明显。采用Bouin’s液原位固定后取膜、DAB染色、普通显微镜下观察或用图像分析方法可使结果更具可信性与可比性。结论 NDGA可抑制血管生成 。

细胞培养实验带教体会

细胞培养是生物医学一项常见的实验技术,实验带教的质量直接决定着本课程的教学质量.根据参与医学本科学生的实验带教过程中的一些经验体会,从如何引入设置问题的角度,探讨运用启发式教学提高细胞培养实验带教的质量,进行了一些尝试.

细胞培养实验带教体会

细胞培养是生物医学一项常见而重要的实验技术，与其它学科不同，细胞培养作为一项实验技术教学，其实验教学部分是课程教学的中心内容，所以实验带教的质量直接决定着本课程的教学质量，作者参与医学本科学生的实验带教过程中的一些经验体会，从如何引入设置问题的角度探讨运用启发式教学提高细胞培养实验带教的质量，进行了一些偿试。

树突状细胞扫描电镜样本制备方法

目的 探讨具有特殊结构的悬浮树突状细胞的扫描电镜制样方法。方法 对比观察细胞离心成团与自然沉降法制备扫描电镜样品对细胞形态学的影响。结果 自然沉降法能很好地显示树突状细胞的形态结构。结论 自然沉降法是制作具有特殊结构悬浮细胞的扫描电镜制样方法。

维甲酸诱导神经管畸形发生过程中神经干细胞的变化研究

目的 了解维甲酸 (Retinoicacid ,RA)诱导神经管缺陷 (Neuraltubedefect ,NTD)小鼠神经发育过程中神经干细胞的变化规律。方法 分别取不同胚胎时段及新生、成年的正常及NTD小鼠的神经组织 ,采用神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白 (Nestin)间接免疫荧光抗体标记和DNA定量荧光染色 ,以流式细胞术检测。结果 ①正常小鼠神经组织中Nestin阳性细胞数目在E8.5d时呈高峰 ,此后逐步下降 ,新生期仍保持较高水平 ;NTD小鼠神经组织中Nestin阳性细胞数在胚胎各期均低于正常小鼠 ,尤以E8.5d下降显著 ;出生后与正常组无显著差别。②NTD小鼠胚胎期神经组织G0 G1 期细胞数百分比明显高于正常组 ,S期细胞数百分比则明显低于正常组。

人羊膜负载猪角朊细胞重建表皮的形态学研究

目的 采用细胞组织工程技术 ,将人羊膜 (Humanamnioticmembrane ,HAM)负载培养猪角朊细胞构建皮肤表皮替代物 ,并观察猪角朊细胞在HAM上生长增殖的形态特点。方法 将贵州小香猪的角朊细胞原代培养 ,传代扩增后 ,接种于HAM基质面 ,逐日于倒置显微镜下观察角朊细胞的生长增殖变化情况 ,并于培养 3～ 15d进行光镜、电镜观察 ,检测角朊细胞在HAM上的生长情况。结果 接种后 3 0min内就明显见到角朊细胞在HAM上贴附 ,2 4h内大部分贴附生长 ,3d形成单层完全覆盖HAM。结论 HAM是角朊细胞在体外培养的良好载体 。

创伤应激大鼠甲状腺肾上腺皮质形态学研究

目的 探讨创伤应激情况下应激器官甲状腺和肾上腺的形态与功能变化。方法 对大鼠爆炸伤后不同时相点的肾上腺和甲状腺进行光、电镜观察。结果 爆炸损伤后引起动物强烈应激反应 ,应激器官肾上腺和甲状腺发生一系列病理变化 ,病理过程表现为 3期 :伤后早期 (第 1～ 3天 )为过度应激期 ,表现为细胞内颗粒大量排空 ,甚至引起细胞破裂 ,皮质激素和甲状腺素过度释放 ;继之 (第 7天 )为功能衰竭期 ,滤泡塌陷、细胞退变和萎缩 ;以后 (第 2 0～ 2 6天 )出现修复改变。结论 爆炸伤后引起动物过度应激反应 ,创伤后应激性疾病 (PTSD)

大鼠半胸照射致肺纤维化模型的病理学观察

目的观察辐射致鼠肺纤维化病变发生过程的病理特征及其规律。方法35只雄性SD大鼠分为实验组21只和对照组14只。实验组用8MV直线加速器给予大鼠右半胸20Gy单次照射,对照组佯装照射。在照射后1、3、7、14、28、84、164d共7个时相点,分批活杀大鼠(照射组3只,对照组2只),观察其全肺大体形态改变,取右肺中叶组织进行光镜及电镜病理组织形态观察。结果照射后1、3、7d可见肺实质细胞的损伤,内皮细胞核损伤出现最早;照射后14、28d肺泡间隔渐加宽,并有胶原和成纤维细胞的增生;照射后84、164d出现典型的肺纤维化病灶,肺实变区域有新生的血管内皮细胞和较多的肺泡Ⅱ型上皮细胞,肺泡腔内可见大量吞噬细胞。结论血管内皮细胞可能为辐射损伤最敏感的肺实质细胞。

血管性痴呆大鼠的突触超微结构改变及结构参数分析

目的 研究血管性痴呆时大脑的皮层、海马的突触超微结构和结构参数改变 ,探讨血管性痴呆的病理机制。方法 采用老年大鼠持久双侧颈总动脉结扎造成慢性脑缺血动物模型。分为正常对照组、缺血 2、4月组。电镜下观察突触超微结构改变 ,应用体视学方法和图像分析 ,对突触数密度、突触活性带长度、圆盘面积、表面密度和三种突触弯曲型比率进行分析。结果 皮层及海马在缺血 2、4月组突触数密度 (Nv)均明显下降 ,而缺血 2与 4月组之间无显著性差异。海马在缺血 2、4月组突触活性带长度 (L)、突触连接带圆盘面积 (S)及突触表面密度 (Sv)均下降 ,缺血 2与 4月组之间无显著性差异 ;皮层在缺血 2、4月组未见明显改变。三种突触弯曲型比率在缺血后未见明显改变。结论 血管性痴呆的突触数密度。

手掌部分解剖结构可视化的初步研究

目的:建立手的可视化模型。方法:采用新鲜成人手标本的冰冻薄层断面切片(0.2mm),在PC机上对手部骨骼、指屈肌腱、掌部筋膜间隙以及手的外形进行三维重建。结果:初步建立了基于解剖结构的可视化手模型并精确显示手掌部主要解剖结构。结论:可视化手模型为手部某些疾病的诊断和治疗提供了三维的形态学资料,也为虚拟现实技术提供了数字模型。

免疫荧光双重染色的激光共聚焦显微镜样品制备及观察

目的详尽介绍免疫荧光双标染色方法,为激光共聚焦显微镜观察提供理想的样品。方法大鼠腹腔注射Brdu,40 g/L多聚甲醛灌注固定,取脑组织冰冻切片,用抗GFAP多克隆抗体孵育和FITC荧光标记二抗染色,再用抗Brdu单克隆抗体孵育和Cy3荧光标记二抗染色,在激光共聚焦显微镜下连续断层扫描,图像叠加。结果清晰可见处于增殖期(S期)细胞胞核呈红色荧光,星形胶质细胞胞质呈绿色荧光。结论影响免疫荧光双重标记样品效果的环节和因素很多,其中最重要的因素是2个一抗的搭配和协调。

三七总皂苷对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响及意义。方法通过电镜观察大鼠肝脏的超微结构,以不同剂量PNS分别对肝纤维化大鼠进行预防和治疗。结果肝纤维化大鼠可出现肝细胞胞浆内肿胀空泡和脂滴、微绒毛稀少、窦内皮细胞肥胖、细胞器增多、Disse间隙内胶原纤维增生等超微结构改变。PNS可减轻大鼠肝纤维化模型肝细胞内脂滴形成、内质网增生、线粒体肿胀及间质胶原增生。结论无论治疗和预防组,PNS均可有效减轻肝纤维化大鼠肝脏超微结构的损伤。