贵州白香猪脂蛋白酯酶基因cDNA的克隆与序列分析

随着生活水平的不断提高,人们对猪的肉质如口感、风味、外观都有相当高的要求。影响猪肉质的因素很多,其中遗传和营养因素对肉质有明显的作用。肌间脂肪与口感呈正相关,当猪的肌间脂肪含量达到2%～3%时,猪的肉质有较好的口感。动物组织脂肪的沉积能力主要受组织中脂肪合成与分解的影响,在很大程度上取决于甘油三酯和脂肪酸的转运速度。脂质代谢中,

pEGFP-N3-LPL重组真核表达载体的构建及在Vero细胞中的表达

目的:构建贵州白香猪LPL基因与增强型绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pEGFP-N3-LPL,转染Vero细胞,观察重组质粒的表达.方法:采用HindⅢ和BamHⅠ两种限制性内切酶获得LPL基因编码区片段和pEGFP-N3线型载体,将目的片段与该载体连接、转化、挑取阳性克隆,进行菌落PCR、双酶切及测序鉴定.使用Lipofectamine2000将重组质粒转染Vero细胞,观察细胞中绿色荧光蛋白的表达并对其进行mRNA检测.结果:成功构建重组真核表达载体pEGFP-N3-LPL,经mRNA检测,实验组在1 500bp处出现特异性条带,说明重组载体已在Vero细胞中获得表达.结论:本试验构建的真核细胞表达载体pEGFP-N3-LPL,为进一步阐明LPL基因与肌内脂肪沉积间的生物学作用机制奠定了基础.