产胶原酶的琥珀葡萄球菌分离鉴定及其培养优化研究

针对胶原蛋白难消化利用的现状,自烟台近海分离筛选产胶原蛋白降解酶的微生物,获得高产菌株SM12,并经形态观察、生理生化试验和16S rDNA鉴定,确定菌株SM12为琥珀葡萄球菌(Staphylococcus succinus)。通过单因素试验确定最佳培养基成分及发酵条件为20 g/L葡萄糖,15 g/L牛肉膏,20 g/L NaCl,10 g/L明胶,初始p H 7.5,培养温度37℃,接种量7.5%(V/V),装液量100 m L/500 m L。在此最佳条件下,筛选的菌株SM12在发酵24 h后获得最大胶原酶活力185.32 U/m L,具备在水产加工下脚料高值化加工领域的应用潜力。

固定化重组细胞催化非天然二肽合成

采用溴化十六烷基三甲基氯化铵(CTAB)处理增加细胞通透性;处理后细胞以聚乙烯醇为载体包埋,然后用2%(体积分数)戊二醛交联制得固定化重组细胞。选取有代表性的6种游离L-氨基酸为酰基受体,以D-苯甘氨酰胺为酰基供体、固定化A.faecalis PGA重组细胞为催化剂,进行了非天然二肽合成研究。结果显示,A.faecalis PGA催化反应速率较快,除D-Phenylglyl-L-glycine二肽开始时反应速率稍慢(液相得率20%)外,其余5种二肽的合成在反应15 min时液相得率均超过50%,应用潜力较好。批反应结果表明,固定化酶活相对较稳定,可以重复使用,且底物稳定性优于E.coli PGA。