秀珍菇单孢子菌株原生质体制备条件的优化

以秀珍菇单核菌丝为材料,用溶壁酶进行原生质体的制备,考察各因素对原生质体产量的影响,用单因素试验和正交试验确定最佳条件。结果表明,菌龄为8 d菌丝体,0.6 mol/L甘露醇+10 mmol/L Tris-HCl为稳渗剂,酶解温度29℃、酶浓度1.6%的条件下酶解160 min。原生质体产量达到3.5×10~7 CFU/m L,原生质体再生率达到1.4%。

姬松茸和双孢蘑菇固态发酵对小米蛋白质和多酚的影响

采用姬松茸和双孢蘑菇对小米进行固态发酵,并对发酵产物的蛋白质含量和氨基酸组成以及多酚含量进行了测定。结果显示:与未发酵的小米对照相比,姬松茸小米发酵产物和双孢蘑菇小米发酵产物中的粗蛋白、水溶性蛋白和氨基酸态氮含量均得到了显著提高(P<0.05),其中粗蛋白含量分别提高了6.13%和12.25%,水溶性蛋白含量分别提高了10.37和4.64倍,氨基酸态氮含量分别提高了12.31和1.01倍,且两种小米发酵产物蛋白质的氨基酸评分、必需氨基酸指数(双孢蘑菇小米发酵产物除外)、营养指数以及与鸡蛋蛋白之间的贴近度均高于对照,这说明小米发酵产物的蛋白质质量高于对照;两种小米发酵产物中的游离态多酚和总酚含量显著高于对照(P<0.05),游离态多酚含量达到3.91和1.57 mg GAE/g DW,分别是对照的4.55和1.82倍,总酚含量达到4.03和1.73 mg GAE/g DW,分别是对照的3.87和1.66倍。本实验结果表明,采用姬松茸和双孢蘑菇对小米进行固态发酵,可以提高小米的蛋白质质量和多酚含量。本实验可以为开发利用小米资源,增加小米附加值提供一定的理论依据,也可为开发利用食用菌资源提供一定的参考。

鳞杯伞可溶性蛋白提取工艺的优化及其营养评价

以五台山鳞杯伞子实体为原料,采用响应面分析法对鳞杯伞蛋白提取工艺进行优化,并对其蛋白氨基酸组成与营养价值进行分析。鳞杯伞可溶性蛋白的提取在单因素的基础上,选取料液比、提取液pH值、提取温度3个关键的因素进行响应面试验,最佳提取条件为:液料比31 mL/g、提取液pH 11、提取温度51℃、提取时间60 min,蛋白提取率达(33.65±0.17)%。在此提取条件下,样品蛋白的氨基酸分析表明:鳞杯伞蛋白氨基酸种类齐全,必需氨基酸(essential amino acid,EAA)占氨基酸总量(total amino acid,TAA)的39.35%,必需氨基酸与非必需氨基酸(nonessential amino acid,NEAA)的比值为64.89%,该样品蛋白接近联合国粮农组织(Food and Agriculture Organization,FAO)/世界卫生组织(World Health Organization,WHO)提出的推荐值;因此,可以作为一种优质的蛋白质。

不同干燥方式对猴头菌子实体多酚提取效果及其抗氧化活性的影响

研究热风(60℃)、远红外辐射(50℃、48 h)和真空冷冻(-20℃、12 h,-80℃、12 h,-80℃、1 kPa、48 h)3种干燥方式对猴头菌(Hericium erinaceus)子实体多酚提取效果、体外抗氧化和细胞水平抗氧化活性的影响。结果表明:真空冷冻干燥处理组的游离酚、结合酚的提取得率(0.319%、0.035%)和纯度(20.784%、87.165%)较高。在3种干燥处理组中,游离酚对DPPH自由基的清除率和总抗氧化能力均以热风处理组最佳,而不同处理组的结合酚对DPPH自由基的清除率差异不显著,其总抗氧化能力则以热风处理组最佳;与体外抗氧化检测结果不同,猴头菌子实体游离酚与结合酚对H;O;诱导RAW264.7细胞氧化损伤的修复效果均以真空冷冻处理组最佳。

蛹虫草胞外多糖的提取工艺优化及其抗结肠癌活性研究

[目的]本文旨在通过响应面分析法对蛹虫草(Cordyceps militaris)胞外多糖的提取工艺进行优化,并探究其胞外多糖的抗结肠癌潜力。[方法]分别选取发酵液浓缩比例、乙醇浓度、醇沉时间和发酵液pH进行单因素试验,通过响应面法优化胞外多糖的提取工艺;采用MTT法分析胞外多糖对结肠癌细胞的抑制作用。[结果]结果表明:蛹虫草胞外多糖的最佳提取工艺为发酵液浓缩比例1/5、乙醇浓度85%、醇沉时间24 h、发酵液pH 7.5,在该条件下蛹虫草胞外多糖的提取量为1.712 g·L^-1;蛹虫草胞外多糖对结肠癌细胞HCT-116具有明显的抑制作用,且呈现一定的剂量依赖性,培养时间为48 h时IC50为1.483 g·L^-1。[结论]本研究优化了蛹虫草胞外多糖的提取工艺条件,同时结果表明其在体外可明显抑制结肠癌细胞的活性,进一步提升了蛹虫草的利用价值,为其作为辅助性功能食品的开发提供重要的参考依据。

猴头菌液体发酵产α-半乳糖苷酶工艺优化及其酶学性质

为优化猴头菌(Hericium erinaceus)液体发酵产α-半乳糖苷酶的培养条件,研究其酶学性质。采用单因素实验和Box-Behnken设计原理设计实验,建立以酶活性为响应值的回归方程模型,采用Design-Expert得到最优液体发酵产酶工艺,采用硫酸铵沉淀初步纯化该酶,研究该酶的温度、pH特性及其对蛋白酶的抗性。结果表明:猴头菌发酵产酶的最佳发酵工艺为3%豆粕粉、2.3%葡萄糖、1.9%蛋白胨、0.3%MgCl2,在此条件下猴头菌发酵液中的α-半乳糖苷酶活性提高了48.9%;该酶最适反应温度为60℃,最适pH为6.0,对胃蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶均表现出较好的抗性。

超声波辅助提取绣球菌麦角甾醇的工艺优化

采用超声波辅助提取绣球菌麦角甾醇的方法,通过单因素试验和正交试验,对影响绣球菌麦角甾醇提取效果的主要因素提取溶剂、料液比和超声波处理时间进行研究,并建立了绣球菌中麦角甾醇紫外分光光度法(UV法)快速检测方法。结果表明,对绣球菌麦角甾醇提取量影响的因素按先后顺序依次为提取剂、超声波提取时间和料液比;最佳提取工艺条件为以三氯甲烷为提取剂、料液比1∶20(g/mL)、超声波提取时间80min,在此条件下,得到的麦角甾醇含量最高。UV法测定麦角甾醇的线性范围为5.00~50.00μg/mL,相关系数为0.9945,该方法的精密度、稳定性和重复性都表现良好,适用于绣球菌生产及对生物量的间接测定。

蛹虫草子实体多糖提取工艺及其体外抗氧化性研究

为得到最优的热水浸提蛹虫草子实体多糖的条件以及为后期的纯化、免疫活性研究提供参考依据,以蛹虫草子实体为研究对象,采用新脱蛋白方法,在单因素试验的基础上,利用响应面法对蛹虫草子实体多糖提取工艺参数进行优化研究,并对该多糖进行抗氧化活性研究。响应面优化的最佳提取工艺为浸提温度80℃,浸提时间3.1 h,液料比41:1(mL:g),浸提次数2次。此条件下多糖实际得率为6.3328%,与预测值6.5877%的相对误差小于5%,表明该提取工艺优化参数较为可靠。采用该方法获得的多糖在8 mg/mL时,羟自由基清除能力高达53.8%,铁离子还原力高达1.133,总抗氧化性达0.807;在6 mg/mL时,DPPH自由基清除能力最强,IC50为1.449 mg/mL。试验获得了多糖高提取率、高抗氧化性的提取方法,为后期蛹虫草子实体多糖的分离、纯化、生物活性研究提供参考。

鳞杯伞营养成分及挥发性风味物质的分析

为明确鳞杯伞(Clitocybe squamulosa)子实体的主要营养成分及其独特的挥发性风味物质。为对其基本成分进行测定与分析,通过利用Biochrom-30+全自动氨基酸分析仪对其氨基酸组成进行测定与营养评价,并采用顶空固相微萃取气-质谱联用(HS-SPME-GC-MS)进一步分析与探讨鳞杯伞中主要的挥发性风味物质。结果显示,鳞杯伞子实体中碳水化合物含量40.96%,蛋白质38.57%,脂肪3.27%,粗纤维8.16%,而且富含Mg、Ca、K、Fe、Zn、Cu、Mn等多种人体所需的矿质元素;进一步酸水解氨基酸组成分析检测出17种氨基酸(包含7种人体必需氨基酸)总量为28.37%,EAA/TAA为36.66%,EAA/NEAA为57.87%;而其中挥发性风味化合物主要以酮类、醇类及酸类物质为主,占总量98.72%,对鳞杯伞独特的风味有重要贡献。试验结果为鳞杯伞进一步深加工及其功能性风味食品的研究与开发提供了理论依据。

不同细胞质的金针菇菌丝差异蛋白分析

以黄色金针菇(Flammulina filiformis)单核菌株Y33和白色金针菇单核菌株W8为供试菌株,采用双向核迁移技术,获得一对具有相同细胞核、不同细胞质的双核菌株Y8-33和W8-33(简称异质双核菌株)。采用菌落形态观察、显微镜检查与分子标记对这两个双核菌株进行验证分析,并以菌株W8-33菌丝样品为对照,采用双向凝胶电泳技术对金针菇异质双核菌株菌丝的蛋白质组进行分析。结果表明:异质双核菌株Y8-33和W8-33菌丝均具有锁状联合结构,在菌落形态上呈现明显差异,但ISSR分子标记的PCR扩增产物具有很高的相似性。在Y8-33菌丝样品中共鉴定出17个差异蛋白,包括8个上调蛋白、9个下调蛋白;其中,14-3-3蛋白、微管蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶、果糖二磷酸醛缩酶、ARF/SAR蛋白家族以及热激蛋白HSP90、HSP70和HSS1差异蛋白可能在由于受体细胞不同所导致的不同细胞质环境下,对金针菇的生长生理起到重要的调控作用。

三色雷蘑核糖核酸酶的分离纯化和理化性质

依次采用离子交换层析(DEAE-Cellulose、CM-Cellulose和SP-Sepharose)和凝胶过滤层析(Superdex 75 HR10/300 GL)从三色雷蘑(Leucopaxillus tricolor)子实体中分离纯化得到一种核糖核酸酶(Ribonuclease,RNase)。该酶比活为1406 U/mg,纯化倍数为154,通过HPLC-LTQ-Orbitrap测序得到4条肽段序列,分别为DMAVSYLSR、IGLSSIPR、ILGRFVVDTYK和SGKANAATPK。该核糖核酸酶的相对分子质量为15000,最适反应pH为 9.0,最适反应温度为40 ℃,热稳定性高,80 ℃孵育1 h后能保持90%以上的活性:Cu^2+、Ca^2+、Mn^2+、Cd^2+和Al^3+在1.25~10 mmol/L浓度下对该酶活性具有抑制作用,且抑制作用随着金属离子浓度的升高而变强;Fe^2+在1.25~5 mmol/L的浓度下,Pb^2+、Zn^2+、Mg^2+、Hg^2+、Fe^3+在1.25~2.5 mmol/L 的浓度下对该酶的活性有促进作用。

腓骨杯桩菇基本营养成分和挥发性物质分析及评价

为明确腓骨杯桩菇主要营养成分及挥发性风味物质,分析腓骨杯桩菇的蛋白质、脂肪、灰分、总糖、多糖等基本营养成分,评价其氨基酸组成,并采用顶空-固相微萃取气质联用法对其挥发性风味化合物进行测定。经过形态学和分子生物学鉴定,确定腓骨杯桩菇是“虎皮”台蘑。其蛋白质含量为33.9%,高于香菇和平菇的蛋白质含量,脂肪含量为1.6%,低于香菇和平菇的脂肪含量。氨基酸有17种,包含7种人体必需氨基酸,其中必需氨基酸(essential amino acid,EAA)占氨基酸总量(total amino acid,TAA)的33.06%,占非必需氨基酸(nonessential amino acid,NEAA)含量的49.39%。子实体中挥发性物质有58种,其中醛、醇、酮、烷烃种类比较丰富,分别有12、6、7、7种,含量分别占总挥发物质的31.08%、14.17%、7.42%、5.47%、6.43%,醛类挥发物质是子实体香气的主要来源,其中己醛含量高达15.05%,赋予了子实体独特的油脂和青草气。

醋酸杆菌多酚的提取及其对糙皮侧耳黄斑病的防治研究

[目的]本研究旨在通过响应面分析法对醋酸杆菌发酵液多酚的提取工艺进行优化,并探究其对糙皮侧耳黄斑病的防治效果。[方法]以醋酸杆菌发酵液为供试材料,确定其多酚提取工艺中料液比、乙醇浓度、超声功率和超声时间的基础上,采用响应面分析法,对醋酸杆菌发酵液多酚的提取工艺条件进行优化。采用牛津杯法,确定醋酸杆菌发酵液多酚对黄斑病致病菌解淀粉芽孢杆菌的最小抑菌浓度,并进一步采用子实体涂抹抑制法,对醋酸杆菌发酵液多酚在糙皮侧耳子实体黄斑病的防治作用验证分析。[结果]醋酸杆菌发酵液多酚的最佳提取工艺条件为料液比1∶3、乙醇浓度45%、超声功率250 W和超声时间23 min,在此条件下多酚提取量为0.140 mg·mL^(-1)。牛津杯试验结果表明醋酸杆菌发酵液多酚对解淀粉芽孢杆菌有明显的抑制作用,且抑菌圈随着多酚浓度的降低而减小,最小抑菌浓度为17.5μg·mL^(-1)。子实体涂抹抑制试验结果进一步显示:醋酸杆菌发酵液多酚对黄斑病有明显抑制作用,但对糙皮侧耳子实体的正常生长无明显影响。[结论]本研究优化了醋酸杆菌发酵液多酚的提取工艺条件,同时结果表明醋酸杆菌发酵液多酚对糙皮侧耳黄斑病有明显防治作用,可为糙皮侧耳乃至其他大型真菌生产中细菌性病害的防治提供一个新的思路。

不同包装材料对杏鲍菇货架期保鲜效果的影响

以杏鲍菇为试材,分别用0.030 mm PP袋、0.025 mm PE袋、0.07 mm拷贝纸包装,常温下贮藏,探讨不同包装材料对杏鲍菇货架期保鲜效果的影响。结果表明,货架期杏鲍菇采用0.030 mm PP袋或0.025 mm PE袋包装,有效地减少了杏鲍菇子实体水分的散失,抑制了细胞膜渗透率的上升,延缓了粗纤维含量及可滴定酸含量的增加,较好地保持了杏鲍菇的感官品质,有效地延长了杏鲍菇的货架期;相对PP和PE袋包装,拷贝纸包装的杏鲍菇保鲜效果较差。

香菇产α-半乳糖苷酶的液体发酵工艺优化

以菌丝体干重和发酵液中α-半乳糖苷酶活性为指标,在单因素实验的基础上用响应面法优化香菇(Lentinula edodes)液体发酵工艺。最佳发酵条件为发酵培养基含5.39%葡萄糖、0.6%蛋白胨、0.89%瓜尔豆胶、0.1%磷酸二氢钾、0.05%硫酸镁,培养基初始pH 6,接种量9%,温度26℃,转速160r/min,发酵20d,在此条件下香菇菌丝体干重达1.93g/L,发酵液中α-半乳糖苷酶活性为2.26U/mL,与优化前相比,分别提高了22.15%和29.88%。实验结果为香菇α-半乳糖苷酶的开发提供了科学的数据。

糙皮侧耳黄斑病一种新病原菌的鉴定及生物防治

黄斑病是严重影响糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)产量和品质的一种细菌性病害。本研究从山西省糙皮侧耳生产区采集的黄斑病样品中分离到病原菌菌株HB-1,对其进行了形态观察、分子鉴定与生理生化指标测定并研究了醋酸杆菌菌株BA15发酵液对该病原菌的防治作用。结果表明:该病原菌与公认的糙皮侧耳病原菌托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii)不同,为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);醋酸杆菌BA15发酵液对HB-1具有显著的抑制作用。本研究结果为糙皮侧耳黄斑病病原菌的鉴定及生物防治提供了参考。

高温胁迫下糙皮侧耳胞内钙离子对热激蛋白基因表达的调控

以糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌株CCMSSC00389为材料,研究高温胁迫(40℃、120min)下钙离子的响应及其对热激蛋白的调控。在高温胁迫条件下,在培养基中添加胞内钙离子螯合剂、胞外钙离子螯合剂、钙调蛋白抑制剂、质膜钙通道抑制剂、三磷酸肌醇受体拮抗剂,利用钙离子特异性荧光探针检测菌丝体胞内钙离子含量,采用荧光定量PCR检测热激蛋白的基因表达量。结果表明,高温胁迫促进胞内钙离子浓度升高,增加Hsp60、Grp78、Hsp90、Hsp104等4种热激蛋白的基因表达量;培养基中添加钙离子螯合剂或抑制剂会降低胞内钙离子浓度,抑制这些热激蛋白的基因表达。研究结果表明高温胁迫会诱导糙皮侧耳胞内钙离子浓度升高,参与信号转导,从而调控热激蛋白的表达来缓解高温胁迫引起的伤害。

利用绿色荧光蛋白GFP研究不同启动子在蝉棒束孢菌中的表达活性

利用农杆菌介导转化(Agrobacterium-mediated transformation,ATMT)的方法,将3个来源于蝉棒束孢菌(Isaria cicadae)、2个来源于稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的启动子在蝉棒束孢菌中驱动绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达。通过荧光显微镜观察GFP荧光亮度和荧光定量PCR检测GFP基因的转录水平,比较不同启动子的转录活性,并利用筛选出的高表达活性载体pKD5-GFP观察小G蛋白Rho在蝉棒束孢菌中的定位。结果表明:来源于稻瘟病菌的H3启动子在蝉棒束孢菌中对GFP基因具有较高的起始转录功能,小G蛋白Rho在孢子和新生菌丝阶段均有表达。研究结果可为在蝉棒束孢菌中进行外源基因表达和遗传研究提供参考。

历山国家自然保护区伞菌类大型真菌资源初报

为进一步明确历山国家自然保护区野生伞菌类大型真菌资源状况,采用随机踏查法对该地区进行了资源调查和评价,为历山食(药)用真菌资源开发利用提供基础资料。形态学和分子生物学研究表明,保护区内有伞菌类大型真菌69种,隶属于5目、21科、39属。优势科为红菇科(Russulaceae)、口蘑科(Tricholomataceae),优势属为红菇属(Russula)、丝盖伞属(Inocybe)。地生伞菌类大型真菌56种,木生13种。从经济价值看,保护区内含伞菌类食用菌29种、药用菌3种、食(药)用菌9种、毒菌7种,另有有21种食(药)价值未明。同时,37种为山西省新纪录种,表明以往该地区食用菌资源调查研究相对匮乏,亟需深入研究。

杏鲍菇功能特性及其在食品中研究进展

综述了杏鲍菇的功能特性机理及在食品方面的研究现状,并对杏鲍菇的应用前景进行了展望。