淫羊藿苷对心力衰竭大鼠线粒体自噬及能量代谢的影响

目的探讨淫羊藿苷通过磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)诱导激酶(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)/E3泛素连接酶(E3 ubiquitin ligases,parkin)信号通路对心力衰竭大鼠心肌线粒体自噬和心肌能量代谢的影响。方法40只大鼠建立心力衰竭模型,随机分为模型组、淫羊藿苷组、PINK1组和PINK1+淫羊藿苷组,每组10只,另取10只作为假手术组。术后第2天,淫羊藿苷组和PINK1+淫羊藿苷组大鼠用淫羊藿苷60 mg·kg^(-1)灌胃,其余3组用等量生理盐水灌胃,每日1次,连续14 d;自术后第8天开始,PINK1组和PINK1+淫羊藿苷组大鼠心肌内注射pcDNA3.1-PINK120μL,每隔1d注射1次,其余各组注射生理盐水。用超声心动图检测左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)、左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic dimension,LVESD)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD)。用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunsorbent assay,ELISA)检测血清单磷酸腺苷(adenosinemonophosphate,AMP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平。用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Readion,PCR)检测PINK1 mRNA的相对表达量。用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率。用透射电镜观察心肌细胞线粒体结构。用Western blot检测PINK1、parkin、p62、微管相关蛋白Ⅰ/Ⅱ轻链3(LC3Ⅰ、LC3Ⅱ)蛋白的表达水平。结果假手术组大鼠心肌细胞线粒体膜结构可见,肌小节排列整齐,横纹可见;模型组线粒体水肿,嵴模糊不清,肌浆网终池扩张;淫羊藿苷组线粒体轻度水肿,部分嵴因融合而模糊不清,病变程度较模型组轻;PINK1组线粒体超微结构可见空泡化,双层膜结构融合,肌纤维紊乱,闰盘扭曲,病变严重;PINK1+淫羊藿苷组线粒体超微结构较PINK1组改善。与假手术组比较,模型组LVEF和LVFS降低,LVEED和LVESD增长,ATP和p62降低,ADP、AMP、心肌细胞凋亡率、PINK1、parkin以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高(P<0.05);与模型组比较,淫羊藿苷组LVEF和LVFS升高,LVEED和LVESD缩短,ADP、AMP、心肌细胞凋亡率、PINK1、parkin以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ降低,p62和ATP升高,而PINK1组LVEF和LVFS降低,LVEED和LVESD增长,ATP和p62降低,ADP、AMP、心肌细胞凋亡率、PINK1、parkin以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高(P<0.05);与淫羊藿苷组比较,PINK1+淫羊藿苷组LVEF和LVFS降低,LVEED和LVESD增长,ATP和p62降低,ADP、AMP、心肌细胞凋亡率、PINK1、parkin以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高(P<0.05);与PINK1组比较,PINK1+淫羊藿苷组LVEF和LVFS升高,LVEED和LVESD缩短,ADP、AMP、心肌细胞凋亡率、PINK1、parkin以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ降低,p62和ATP升高(P<0.05)。结论淫羊藿苷通过调控PINK1/parkin信号通路降低心力衰竭大鼠心肌细胞线粒体自噬水平,改善心力衰竭大鼠心功能和心肌能量代谢。