2015—2018年黄石市中心医院不同年龄段儿童下呼吸道感染病原菌的分布及耐药性分析

目的探讨和分析黄石市中心医院不同年龄段儿童下呼吸道感染病原菌的分布及耐药性,指导临床合理选择抗菌药物。方法对2015年1月—2018年5月黄石市中心医院儿科住院患者下呼吸道分泌物标本进行细菌培养、非典病原体和病毒检测,并采用纸片扩散法对细菌进行药敏监测。结果共分离出1298株病原菌,其中革兰阳性菌377株,占29.04%,主要为肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌;革兰阴性菌485株,占37.36%,主要为肺炎克雷伯杆菌、流感嗜血杆菌;非典型病原体246株,占18.95%,主要为肺炎支原体;病毒190株,占14.64%。0～3岁组的革兰阳性菌、病毒和非典型病原体分离率显著小于3～7岁组和>7岁组,差异具有统计学意义(P<0.05),而0～3岁组的革兰阴性菌分离率显著大于3～7岁组和>7岁组,差异具有统计学意义(P<0.05)。药敏结果显示肺炎链球菌对氨苄西林舒巴坦、头孢唑林、克林霉素、阿奇霉素的耐药率较高,肺炎克雷伯杆菌对氨苄西林舒巴坦、头孢呋辛、头孢噻肟、氨曲南、妥布霉素等耐药率较高。0～3岁组肺炎链球菌和肺炎克雷伯杆菌等对常见抗菌药物的耐药率大于3～7岁组和>7岁组。结论黄石市中心医院不同年龄的感染率和细菌耐药率存在明显差异,临床应根据不同年龄段患儿病原菌分布特点及耐药趋势,合理选择抗菌药物。

2014—2018年黄石市中心医院耐碳青霉烯类革兰阴性菌的分布及耐药性分析

目的了解黄石市中心医院耐碳青霉烯类革兰阴性菌的分布及耐药性,为感染防控和临床治疗提供依据。方法对2014-2018年黄石市中心医院耐碳青霉烯类革兰阴性菌的标本来源、科室分布、病原菌分布和耐药性进行统计分析。结果2014-2018年,共分离出耐碳青霉烯类革兰阴性菌1 025株,分离率为8.01%,且分离率呈迂回上升趋势;所有标本和临床科室耐碳青霉烯类革兰阴性菌的分离率均呈迂回上升趋势。分离率排名前3位的标本分别为创面分泌物、痰液和脑脊液;分离率排名前3位的临床科室分别为ICU、神经外科和呼吸内科;分离率排名前3位的病原菌分别为鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌;耐碳青霉烯类革兰阴性菌对青霉素类、头孢菌素类和妥布霉素的耐药率在98%以上,亚胺培南和美罗培南耐药率在88%~97%,对阿米卡星耐药率在53%~77%,对复方复方新诺明的耐药率在72%~92%,对替加环素和多黏菌素耐药率为0。结论黄石市中心医院耐碳青霉烯类革兰阴性菌的分离率呈上升趋势,以鲍曼不动杆菌上升最显著。应对耐碳青霉烯类革兰阴性菌的分离趋势和耐药性进行长期动态监测,为临床抗感染治疗提供参考数据。

黄石地区男男同性恋人群中梅毒新发感染状况及影响因素分析

目的：了解黄石地区男男同性恋人群（YMSM）中梅毒的新发感染状况及其影响因素。方法：利用黄石地区疾控中心资料及相关娱乐场所资料收集到850名YMSM对象,对850例研究对象进行梅毒感染的本底调查及问卷调查,并进行12个月的随访,在本底调查后第12个月再次对850例研究对象进行梅毒感染调查并进行相关统计分析。结果：本次调查850例研究对象,第一次回收有效调查问卷841份,第12个月随访结束时有8例研究对象失访,至研究结束共收集到833例研究对象的资料;经过数据筛查,剔除不完整数据,最后取得的完整的788例研究对象的数据。788例研究对象中,年龄1865岁,中位年龄31岁;未婚561人,已婚227人,大专以上文化390人,241人月收入〉5000元,308人主要通过互联网的形式寻找同性恋伴侣,254人通过酒吧等娱乐场所结识性伴侣,其他途径占226人。本底调查时共发现45例研究对象梅毒抗体检测阳性,梅毒感染率为5.35%（45/841）,第12个月再次复查时,出现新发感染患者9例,新发感染率为1.08%（2/833）。多因素分析结果：既往性病史（OR=4.029）、最近一次发生男男性行为是否使用安全套（OR=3.571）、最近一年是否做过梅毒抗体检查（OR=2.553）、第一次发生男男性行为的年龄（OR=2.007）、最近一个月发生男男性行为次数（OR=1.683）、第一次发生性行为年龄（OR=1.338）。结论：根据本次研究显示,YMSM人群感染梅毒的高危因素主要是男男性行为不采取安全措施、既往性病史、近一年未参与性病筛查等因素。对预防YMSM人群梅毒感染应根据危险因素、传播途径有针对性的采取措施,降低这一人群梅毒的感染与传播。

高危型HPVDNA联合TCT检测初筛宫颈癌的检验研究

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)DNA联合新柏氏液基细胞学(TCT)检测初筛宫颈癌的价值研究。方法选取2016年1月至2016年12月前来大冶市人民医院就诊的893例妇女作为研究对象。宫颈病理组织学结果以病理组织学为诊断标准,以CIN I、CIN II、CIN III和浸润癌为病理组织学阳性。取TCT采集的宫颈上皮脱落细胞,一份样本同时进行HPV-DNA检测。观察TCT检测结果与病理组织学结果诊断对照、高危型HPV-DNA检测结果与病理组织学结果诊断对照及TCT联合高危型HPV-DNA与病理组织学检测结果结果。结果 TCT检测结果与病理组织学结果阳性符合率为36.65%;高危型HPV-DNA检测结果与病理组织学结果阳性符合率为37.44%;TCT与高危型HPV-DNA联合检测与病理组织学诊断阳性符合率为89.20%。结论高危型HPVDNA联合TCT检测对初筛宫颈癌具有较高的诊断价值。

女性闭经后萎缩性尿道炎患者血清FSH、LH、PRL检验的临床意义研究

目的:探讨女性闭经后萎缩性尿道炎患者血清促卵泡素(FSH)、黄体生成素(LH)、垂体泌乳素(PRL)等性激素检验的临床方法及规律,为女性闭经后萎缩性尿道炎身心保健提供了理论支持。方法:选取40例闭经患者作为观察组,并选同期健康体检月经正常女性40例作为对照组。对象选取时间为2012年1月至2013年12月。采用放射免疫法分别对两组对象进行血清FSH、LH、PRL、E2、P、T水平检验,进行对照研究。结果:观察组对象血清FSH、LH、PRL检验结果水平均明显高于对照组(P<0.05),E2检测水平低于对照组(P<0.05),P、T检测水平两组无差异(P>0.05)。结论:性激素水平检测可以有效反映女性闭经后萎缩性尿道炎的身体状况,有助于预防相关疾病,可作为临床诊治参考。

长链非编码RNA LUCAT1在上皮性卵巢癌组织中的表达及与患者预后的关系

目的探讨长链非编码RNA LUCAT1在上皮性卵巢癌组织中的表达及与患者预后的关系。方法选取黄石市中心医院2013年4月至2016年4月行手术治疗的125例上皮性卵巢癌患者的癌组织作为研究组,选取在同一医院同期行卵巢囊肿手术切除的47份正常卵巢组织作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测组织中LUCAT1的表达,研究组患者术后随访至2021年4月30日,记录患者死亡情况及5年生存率。结果研究组上皮性卵巢癌组织中LUCAT1相对表达量高于对照组(2.27±0.19 vs.1.01±0.11,t=43.190,P<0.001);LUCAT1在不同组织学分级、国际妇产科联盟(FIGO)分期和淋巴结转移的上皮性卵巢癌组织中相对表达量差异具有统计学意义(P<0.05);低表达组患者平均生存时间(48.85±1.86)个月和5年生存率57.38%,高于高表达组的(30.06±2.59)个月和29.69%,差异具有统计学意义(χ2=19.787,P<0.001);LUCAT1表达量升高是患者生存时间的风险因素(P<0.05)。结论上皮性卵巢癌患者组织中LUCAT1表达量升高,且与组织学分级、FIGO分期和淋巴结转移相关,是影响患者预后的风险因素。

颅内压监测在重症颅脑损伤治疗中的价值

目的探讨颅内压监测指导下治疗方案对重型颅脑损伤的治疗价值。方法回顾性分析2015年3月至2018年3月收治的200例重型颅脑损伤的临床资料。根据治疗方案分为观察组和对照组,各100例。对照组采用常规治疗,观察组采用颅内压监测指导下治疗方案。结果观察组痊愈35例,显效40例,有效15例,无效10例;对照组痊愈16例,显效36例,有效20例,无效28例。观察组治疗有效率(90.0%)明显高于对照组(72.0%;P<0.05)。治疗7 d,观察组甘露醇应用量、甘露醇应用时间、NICU住院时间较对照组均明显减少(P<0.05),GCS评分明显增高(P<0.05)。观察组发生肺部感染21例(21.0%)、脑疝5例(5.0%)、颅内感染6例(6.0%);对照组肺部感染46例(46.0%)、脑疝24例(24.0%)、颅内感染19例(19.0%)。观察组肺部感染、脑疝、颅内感染等发生发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论对重型颅脑损伤,颅内压监测指导下治疗方案有助于将颅内压控制于理想水平,从而改善临床疗效。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子单克隆抗体抑制ApoE^((-/-))小鼠动脉粥样硬化形成的实验研究

目的:探究EMMPRIN单克隆抗体对ApoE缺陷小鼠动脉粥样硬化(As)形成作用机制的实验研究。方法:选取健康的雄性,昆明小鼠10只和ApoE基因缺失ApoE^((-/-))小鼠30只,随机分为四组:空白对照组、EMMPRIN单克隆抗体干预组、ApoE^((-/-))As模型组、ApoE^((-/-))阴性对照组。利用ELASA试剂盒检测As模型动物外周血生化指标,观察EMMPRIN单克隆抗体对模型动物脂质代谢及As斑块的影响。利用RT-qPCR、Western-Blot和免疫组化等方法检测模型动物氧化应激信号通路中血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子2(FGP-2)的表达。结果:EMMPRIN单克隆抗体干预组与ApoE(-/-)阴性As模型组的比较中,在TG、TC、LDL-C等指标中,EMMPRIN单克隆抗体干预组明显低于ApoE(-/-)AS模型组,具有明显的统计学差异(t=4.327, 3.295, 1.773,P<0.05)。EMMPRIN单克隆抗体干预组的HDL-C均高于As模型对照组,具有明显的统计学差异(t=8.438,P<0.05)。②RT-PCR和Western blot结果显示,EMMPRIN单克隆抗体干预组中主动脉VEGF和FGP-2表达量明显低于As模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。③免疫组化显示,EMMPRIN单克隆抗体干预组中主动脉VEGF蛋白表达量与As模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:EMMPRIN单克隆抗体通过抑制内质网应激VEGF蛋白和FGP-2蛋白的表达发挥其抑制As的作用。

CA125、Cyt-c和MGMT基因在卵巢癌患者血清中的表达及临床意义

目的:探讨糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)联合细胞色素C(Cytochromes c,Cyt-c)和O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)在卵巢癌患者血清中的表达情况及临床意义。方法:对53例卵巢癌患者(卵巢癌组)、40例卵巢良性病变患者(卵巢良性病变组)、50例同期体检健康女性(对照组)采用电化学发光法检测血清CA125水平,ELISA法检测Cyt-c水平,甲基化特异PCR法检测MGMT基因启动子甲基化,流式细胞仪检测细胞线粒体膜势能。结果:卵巢癌患者血清中CA125和Cyt-c表达水平明显高于卵巢良性肿瘤组和健康对照组(P<0.05),CA125表达水平在卵巢良性肿瘤组和健康对照组,差异无统计学意义(P>0.05),Cyt-c差异有统计学意义(P<0.05)。MGMT基因启动子在卵巢癌组和卵巢良性肿瘤组中发生甲基化,甲基化率分别为75.3%和21.8%,健康对照组未发生甲基化。结论:联合检测血清CA125、Cyt-c和MGMT基因的表达水平有助于提高早期卵巢癌的诊断效能,对卵巢肿瘤的良恶性鉴别及对预后具有提示作用。

赖氨酸去甲基化酶5C抑制剂CPI-455对ESCC细胞系Eca-109增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的:本研究探讨赖氨酸去甲基化酶5C(lysine demethylase 5C,KDM5C)抑制剂CPI-455对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞系Eca-109增殖、凋亡的影响及其机制。方法:运用MTT法、平板克隆形成实验检测CPI-455对Eca-109细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察CPI-455对Eca-109细胞线粒体内部超微结构的影响;流式细胞仪检测CPI-455诱导Eca-109细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot测定CPI-455对Eca-109细胞中p53、Bax、KDM5C、Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平的影响。结果:MTT法、平板克隆形成实验结果分析显示:CPI-455能够抑制Eca-109细胞的增殖,具有时间、浓度依赖性,差异有统计学意义(P均<0.01);电镜下观察Eca-109细胞内结构显示:CPI-455引起Eca-109细胞中的线粒体固缩,线粒体缩小,结构紧密;流式细胞术和Western blot显示:CPI-455可以上调Eca-109细胞中ROS含量、p53、Bax、Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3的蛋白表达,同时下调KDM5C蛋白表达(P<0.05)。结论:CPI-455具有抑制Eca-109细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用,其作用机制可能与下调KDM5C蛋白的表达有关。

miR-3529-3p通过下调E2F3基因表达抑制卵巢癌SKOV-3细胞增殖的机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-3529-3p抑制卵巢癌SKOV-3细胞增殖的作用机制。方法研究时间为2021年1月至5月。分别转染NCmimic(NC组)和miR-3529-3p mimic(miR-3529-3p组)至卵巢癌SKOV-3细胞。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转染效率。CCK-8法检测每组细胞的光密度值。集落形成实验检测每组细胞的集落形成数。miRNAMap数据库预测miR-3529-3p的靶基因。qRT-PCR和蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测靶基因的表达。采用独立样本t检验。结果miR-3529-3p组和NC组SKOV-3细胞中miR-3529-3p表达分别为(1.01±0.07)和(9.55±1.50),NC组miR-3529-3p表达显著低于miR-3529-3p组(t=5.68,P<0.01)。CCK-8法显示miR-3529-3p过表达抑制SKOV-3细胞增殖(P<0.05)。与NC组相比,miR-3529-3p组集落形成数显著减少(P<0.05)。miR-3529-3p的靶基因可能是E2F转录调节因子3(E2F transcription factor 3,E2F3)。与NC组比较,miR-3529-3p组SKOV-3细胞中E2F3基因表达明显降低(P<0.01)。结论miR-3529-3p可抑制卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,其可能的分子机制是通过靶向抑制E2F3表达实现。

lncRNA SNHG15-210通过上调CDKN1A对宫颈癌SIHA细胞增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG15-210对宫颈癌SIHA细胞增殖的影响及分子机制。方法采用脂质体转染技术分别将pcDNA-NC(NC组)和pcDNA-SNHG15-210(SNHG 15-210组)转染入宫颈癌SIHA细胞。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转染效率。CCK-8法检测SNHG15-210对细胞吸光度的影响。集落形成实验检测SNHG15-210对细胞集落形成的影响。qRT-PCR检测细胞周期蛋白依赖蛋白激酶抑制剂1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)信使RNA(mRNA)的表达水平。Western blot检测CDKN1A蛋白和增殖相关蛋白的表达水平。结果SNHG15-210组和NC组SIHA细胞中SNHG15-210表达分别为(1.14±0.37)和(11.69±2.62),NC组SNHG15-210表达明显少于SNHG15-210组(t=3.99,P<0.01)。SNHG15-210过表达可显著抑制SIHA细胞的增殖(P<0.05)。与NC组相比,SNHG15-210组细胞的集落形成数明显减少(P<0.05)。与NC组相比,SNHG15-210组SIHA细胞中CDKN1A蛋白表达明显增加,Cyclin D1和Cyclin D2蛋白表达明显降低。结论过表达SNHG15-210通过上调CDKN1A基因表达抑制宫颈癌SIHA细胞的增殖,SNHG15-210是宫颈癌潜在的分子靶点。

CO_2激光联合病毒灵治疗尿道尖锐湿疣的临床效果观察

目的:观察CO2激光联合病毒灵治疗尿道尖锐湿疣的临床治疗效果。方法:以2012年4月-2014年2月间我院收治的126例尿道尖锐湿疣患者为研究对象,按抛硬币法将其随机分为激光组54例与联合组72例。激光组患者采用CO2激光疗法;联合组患者采用CO2激光联合病毒灵疗法,对比两组患者治愈率与复发率,分析临床治疗效果。结果:参与本次研究的126例患者均获得较高的治愈率,激光组为96.30%(52例),联合组为95.83%(69例),组间对比不明显,不具备统计学意义,P<0.05;接受治疗后,激光组复发20例,复发率为37.04%,明显高于联合组的8.33%,组间对比具有统计学意义,P<0.05。结论:对尿道尖锐湿疣患者采用CO2激光联合病毒灵方案,治疗效果显著,不仅能保证治愈率、还能有效降低复发率,安全可靠,值得临床推广。

薄芝糖肽联合顺铂对食管鳞状细胞癌细胞增殖凋亡及相关信号通路的影响

目的观察薄芝糖肽(GCGP)注射液联合顺铂对食管鳞状细胞癌细胞的增殖凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法取食管鳞状细胞癌Eca-109细胞株常规培养,分别加入50、100、200 mg/L GCGP溶液及100 ng/mL顺铂作用24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖能力,因100 mg/L GCGP联合顺铂作用48 h时的IC50为44.1%,故选择该浓度和作用时间作为GCGP联合顺铂用药的最佳作用浓度和作用时间。另取Eca-109细胞,随机分为对照组、GCGP组、顺铂组、GCGP+顺铂组,对照组正常培养,GCGP组加入100 mg/L GCGP,顺铂组加入100 g/mL顺铂,GCGP+顺铂组加入100 mg/L GCGP和100 g/mL顺铂。采用细胞克隆技术观察各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting法检测细胞中MAPK/ERK信号通路调控蛋白胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)、妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)、细胞外信号调节激酶(ERK)及PI3K/Akt信号通路调控蛋白尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)、蛋白激酶B(Akt)蛋白的表达水平。结果与对照组比较,GCGP组、顺铂组和GCGP+顺铂组细胞集落形成率均降低,且GCGP+顺铂组细胞集落形成率低于GCGP组和顺铂组(P均<0.01)。与对照组比较,GCGP组、顺铂组、GCGP+顺铂组细胞凋亡率均升高,且GCGP+顺铂组细胞凋亡率显著高于GCGP组和顺铂组(P <0.05或<0.01)。与对照组比较,GCGP组、顺铂组和GCGP+顺铂组PAPP-A、uPA蛋白表达均下降,IGFBP-4、ERK、Akt蛋白表达均升高;与GCGP组和顺铂组比较,GCGP+顺铂组PAPP-A、uPA蛋白表达降低,IGFBP-4、ERK、Akt蛋白表达升高(P均<0.05)。结论 GCGP与顺铂联合用药相对于单独用药能够有效抑制ECA-109细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路激活有关。

阴道镜活检与人乳头瘤病毒检测在宫颈病变诊断中的对比研究

目的:对比研究阴道镜活检与人乳头瘤病毒检测在宫颈病变诊断中的临床价值。方法:选取我院2012年1月至2014年3月接受宫颈病变筛查的2560例已婚妇女为研究对象,对其先行人乳头瘤病毒(HPV)检测,再做阴道镜活检,对比两次检测结果,进行统计学分析,并以病理组织学检测结果作为金标准,判断两种检测方案灵敏度、特异性及准确率。结果:HPV检测阳性343例,阴道镜活检阳性527例,两组比较,差异具备统计学意义(P<0.05);金标准对比显示,HPV检测灵敏度、特异性、准确率,阴道镜活检灵敏度、特异性、准确率,两组比较,差异具备统计学意义(P<0.05)。结论:阴道镜活检与HPV检测均对宫颈病变诊断具有一定的价值,在单独应用的情况下,阴道镜活检具有更好的检出效果,但考虑到保证检测准确率,宜将两者联合应用。结论:阴道镜活检与HPV检测在宫颈病变诊断中均有良好效果,根据具体情况选择合适的检测方式。

脑卒中患者NT-proBNP和Hcy检测的临床分析

目的分析脑卒中患者血清生物标志物氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)和同型半胱氨酸(Hcy)水平检测的临床意义。方法选择2011-03—2013-05来我院诊治的40例脑卒中实验组患者和同期的40例对照组非脑血管患者,分别采集实验组治疗前后、对照组静脉血2mL,检测2组人群血清NT-proBNP和Hcy水平。结果实验组患者的NT-proBNP水平为(410.10±73.50)pg/mL,Hcy水平(19.50±1.10)μmol/L,均较对照组患者的((65.10±45.50)pg/mL、(10.10±5.50)μmol/L)显著高,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组治疗后,其NT-proBNP水平为(140.40±35.40)pg/mL、Hcy水平(13.40±1.20)μmol/L,均较治疗前显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 NT-proBNP和Hcy可作为诊断脑卒中患者患病程度的两项指标,为临床治疗提供了参考依据。

凝血功能指标、血栓前状态与子痫前期发病的关系

目的探究凝血功能指标、血栓前状态与子痫前期发病的关系。方法收集2016年3月至2018年8月黄石市中心医院收治的87例子痫前期患者为研究对象,其中轻度子痫前期组41例,重度子痫前期组46例。另同期选择于我院进行体检的40例正常妊娠晚期孕妇设为正常组。所有研究对象均于入院后抽取清晨空腹静脉血,检测活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)及纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)等凝血功能指标,以及D-二聚体(D-dimer,D-D)、凝血酶-抗凝血酶复合物(thrombin-antithrombin complex,TAT)、血小板颗粒膜蛋白-140(granule membrane protein-140,GMP-140)和血管性假性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)等血栓前状态指标的浓度。结果随着子痫前期病情的进展,APTT、TT、PT均呈逐渐降低的趋势,正常组>轻度子痫前期组>重度子痫前期组,差异有统计学意义(P<0.05);D-D、TAT、GMP-140和VWF浓度均呈逐渐升高的趋势,正常组<轻度子痫前期组<重度子痫前期组,差异有统计学意义(P<0.05);而3组间的FIB浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论子痫前期患者呈高凝、血栓前状态,并且随着病情严重程度的增加,凝血功能及血栓前状态相关指标的变化也更加明显。

微小RNA217靶向人沉默调节蛋白1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-217(miR-217)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响途径。方法采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人正常结肠上皮细胞NCM460和人结直肠癌细胞SW620、RKO、HT-29、HCT116中miR-217表达水平。将miR-217模拟物(mimic)与阴性对照(mimic NC)分别转染于RKO细胞系, 检测miR-217表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)与平板克隆实验检测细胞增殖活力;采用划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;采用RT-qPCR与蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默信息调节因子1(SIRT1) mRNA与蛋白表达水平。两组间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果 miR-217在人结直肠癌细胞系中表达水平降低, 其中RKO细胞系明显低于NCM460细胞系[(0.286±0.022)倍比(1.000±0.090)倍, t=13.360, P<0.01], 差异有统计学意义。RKO细胞系转染miR-217 mimic后, miR-217表达水平高于NC组[(5.276±0.437)倍比(1.000±0.168)倍, t=15.820, P<0.01], 差异有统计学意义。CCK-8实验表明miR-217 mimic组细胞24、48、72 h吸光度值低于NC组[(0.867±0.030)倍比(1.260±0.0222)倍, t=18.440, P<0.01], 差异有统计学意义。平板克隆实验表明miR-217 mimic组细胞集落形成能力低于NC组[(80.570±43.320)倍比(116.600±81.230)倍, t=3.823, P<0.01], 差异有统计学意义。划痕实验及Transwell实验证实miR-217 mimic组细胞迁移及侵袭能力低于NC组[划痕实验:(0.133±0.009)倍比(0.365±0.010)倍, t=29.960, P<0.01;Transwell迁移实验:(157.000±3.000)倍比(248.300±13.580)倍, t=11.380, P<0.01;Transwell侵袭实验:(149.000±7.937)倍比(287.000±5.568)倍, t=24.650, P<0.01], 差异有统计学意义。通过生物信息学分析并筛选出miR-217靶基因人SIRT1, RT-qPCR结果表明miR-217 mimic组细胞中SIRT1 mRNA表达水平低于NC组[(0.682±0.162)倍比(1.000±0.075)倍, t=3.090, P<0.05], 差异有统计学意义。Western blot表明, 转染miR-217 mimic后, 结直肠癌细胞中SIRT1蛋白表达水平发生显著下降。结论 miR-217在人结直肠癌中低表达, 且可能通过SIRT1抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。

转录因子E2F-3靶向FOSB对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究转录因子E2F-3对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法在体外培养人的结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、LOVO和人的结肠正常上皮细胞NCM460,并用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测结肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480、RKO、DLD1、LOVO中E2F-3的转录水平。分别将E2F-3的siRNA-E2F3和siRNA-NC阴性对照转染于细胞系RKO中,设为实验组(si-E2F3)与阴性对照组(NC)。采用平板克隆实验细胞与细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。Transwell迁移和侵袭实验与细胞划痕实验用来检测细胞的迁移及侵袭能力。RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别可以检测E2F-3靶向蛋白FOSB的表达水平。两样本间对比采取t检验,多组间差异采用单因素方差分析。结果miR-210-3p在结直肠癌细胞系中表达均高于人正常结肠上皮细胞,其中以RKO中升高最为明显,相较NC[(2.349±0.095)倍比(1.000±0.013)倍,t=65.82,P<0.01],差异有统计学意义。转染si-E2F3后,敲降组si-E2F3表达水平显著降低[(0.394±0.010)倍比(1.000±0.013)倍,t=66.38,P<0.01],差异有统计学意义。CCK-8实验表明si-E2F3组在不同时间段吸光度值均低于NC组[(0.720±0.110)倍比(1.210±0.015)倍,t=19.65,P<0.01],差异有统计学意义。细胞克隆实验结果显示,si-E2F3组细胞克隆形成能力低于NC组[(171.000±4.000)倍比(317.000±8.000)倍,t=19.75,P<0.01],差异有统计学意义。划痕愈合实验结果表明,si-E2F3组划痕愈合百分比低于NC组[(0.163±0.004)倍比(0.244±0.013)倍,t=9.39,P<0.01],差异有统计学意义。Transwell侵袭实验结果显示,si-E2F3组细胞中穿出的细胞数低于NC组[(53.667±4.667)倍比(161.67±4.333)倍,t=30.89,P<0.01],差异有统计学意义。Transwell迁移实验结果表明:si-E2F3组细胞迁移细胞数低于NC组[(52.333±5.333)倍比(99.333±5.333)倍,t=11.79,P<0.01],差异有统计学意义。通过生物信息学分析筛选出E2F-3靶蛋白FOSB,Western blot结果表明转染了si-E2F3后,结直肠癌细胞中FOSB表达量显著降低。结论E2F-3在人的结直肠癌细胞系中显著高表达,其中以RKO最为显著,并可能通过靶向FOSB促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNA RP11-1212A22.4通过靶向miRNA-483-5p对食管癌细胞株细胞活力和侵袭能力的影响

目的探讨长链非编码RNA RP11-1212A22.4通过靶向miRNA-483-5p(miR-483-5p)对食管癌细胞株细胞活力和侵袭能力的影响。方法采用GEPIA在线数据库分析RP11-1212A22.4在食管癌组织中的表达情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测RP11-1212A22.4在人食管癌细胞株EC9706、KYSE30、TE-13、Eca109和正常食管黏膜上皮细胞株HET-1A中的表达情况。将RP11-1212A22.4相对表达量最低的细胞株EC9706分为RP11-1212A22.4组(转染pcDNA-RP11-1212A22.4质粒)和对照组(转染pcDNA-NC质粒)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析EC9706细胞活力,采用Transwell法检测EC9706细胞侵袭能力。StarBase数据库预测和双荧光素酶报告基因实验验证RP11-1212A22.4和miR-483-5p的靶向关系。qRT-PCR检测两组EC9706细胞中miR-483-5p的相对表达量。蛋白质印迹法检测两组EC9706细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况。结果GEPIA在线数据库中,食管癌组织中RP11-1212A22.4相对表达量较癌旁组织降低,差异有统计学意义(P<0.001)。RP11-1212A22.4在食管癌细胞株EC9706、KYSE30、TE-13、Eca109和正常食管黏膜上皮细胞株HET-1A中的相对表达量分别为0.11±0.08、0.32±0.09、0.72±0.09、0.59±0.13和0.97±0.12,差异有统计学意义(F=40.42,P<0.001)。RP11-1212A22.4组和对照组EC9706细胞中RP11-1212A22.4相对表达量分别为11.9±2.4和1.0±0.3,差异有统计学意义(t=8.89,P<0.001)。接种第2天起,RP11-1212A22.4组EC9706细胞活力较对照组均降低(均P<0.05)。RP11-1212A22.4组侵袭细胞数为(48±12)个,低于对照组的(106±22)个(t=4.63,P<0.001)。StarBase数据库预测和双荧光素酶报告基因实验证实RP11-1212A22.4靶向结合miR-483-5p。RP11-1212A22.4组miR-483-5p相对表达量为0.24±0.11,低于对照组的1.02±0.23(t=5.98,P=0.001)。RP11-1212A22.4组CDK6、MMP-2、CDK4、MMP-9蛋白表达均较对照组降低。结论RP11-1212A22.4在食管癌组织和细胞株中均呈低表达,其通过靶向结合miR-483-5p抑制食管癌细胞的活力和侵袭能力。