miR-519d-3p靶向HIF-1α抑制高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞功能障碍及血管生成

目的:明确miR-519d-3p对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)功能障碍与血管生成的影响,并阐明其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的调控机制。方法:通过5、30mmol/L葡萄糖分别诱导HRMEC建立正常(NG)和高糖(HG)细胞模型。将HRMEC分为对照组(HG细胞模型转染阴性对照模拟物)、甘露醇组(对照组加入25mmol/L甘露醇)、miR-519d-3p过表达组(HG细胞模型转染miR-519d-3p模拟物)、miR-519d-3p联合HIF-1α过表达组(HG细胞模型共转染miR-519d-3p模拟物和HIF-1α过表达载体)。实时荧光定量PCR法检测各组miR-519d-3p的表达情况。Western blotting法检测各组HIF-1α蛋白的表达情况。荧光素酶报告基因实验检测miR-519d-3p和HIF-1α的结合位点情况。CCK-8法检测各组细胞增殖情况。Hoechst 33342染色法检测各组细胞凋亡情况。ELISA法检测各组细胞外液炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6蛋白的表达情况。小管形成实验检测各组新生毛细血管管腔样结构形成情况。结果:与NG相比,HG细胞模型中miR-519d-3p表达显著减少,而HIF-1α蛋白表达显著增加(均P<0.01)。与对照组比较,miR-519d-3p过表达组中HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.01)。miR-519d-3p中“CGUGAAA”序列可以与HIF-1α3'-非编码区(3'-UTR)中“GCACUUU”序列特异性结合。与对照组比较,miR-519d-3p过表达组细胞24、48、72h吸光度值均显著增加,细胞凋亡率显著减少,细胞外液TNF-α、IL-1β、IL-6浓度均显著减少,新生毛细血管管腔样结构数量显著减少(均P<0.01)。与miR-519d-3p过表达组比较,miR-519d-3p联合HIF-1α过表达组细胞24、48、72h吸光度值均显著减少,细胞凋亡率显著增加,细胞外液TNF-α、IL-1β、IL-6浓度均显著增加,新生毛细血管管腔样结构数量显著增加(均P<0.01)。对照组和甘露醇组中上述各指标比较无差异(均P>0.05)。结论:高糖诱导HRMEC模型中miR-519d-3p表达下调,而HIF-1α蛋白表达上调。HIF-1α是miR-519d-3p的靶基因,miR-519d-3p靶向HIF-1α增加细胞增殖并降低细胞凋亡和炎症反应,从而减轻高糖诱导的HRMEC功能障碍并抑制血管生成。

小切口提上睑肌缝线缩短术联合微创重睑术治疗老年性上睑下垂的疗效观察

目的：探讨更简单、切口小损伤轻、手术时间短、疗效好的老年性上睑下垂的手术治疗方法。方法：于2010年4月-2013年10月对老年性上睑下垂采用小切口提上睑肌缝线缩短法联合微创重睑术治疗老年性上睑下垂，其中男性8例，女性10例，共22眼，年龄55～82岁。结果：术后观察6个月无暴露性角膜炎，术后双上睑缘位于角膜上缘1.0～2.0mm，眼睑闭合不全约2.0mm，双眼睑裂重睑对称，无睑下垂复发病例。结论：老年性上睑下垂是老年人常见性眼病，采用小切口提上睑肌缝线缩短法联合微创重睑术治疗老年性上睑下垂，简化了手术难度，伤口损伤小恢复快，手术时间短，睑成型自然美丽，疗效明显，适合提上睑肌功能良好睑皮肤无过度过剩的老年性上睑下垂的手术治疗。

过表达低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对体外培养人视网膜血管内皮细胞增殖、炎症反应及血管生成的影响

目的检测过表达低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)对体外培养人视网膜血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cell,HREC)增殖、炎症反应及血管生成的影响。方法将体外培养HREC转染人工合成的pEGFP-HIF-1α重组载体,并采用荧光定量PCR检测转染前后HREC中HIF-1α的表达变化。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot分别检测过表达HIF-1α对HREC增殖、炎症反应及血管生成的影响。结果体外转染pEGFP-HIF-1α可显著增加HREC中HIF-1αmRNA和蛋白表达。过表达HIF-1α可显著促进HREC增殖,HREC转染p EGFP-HIF-1α后24 h、48 h及72 h A值分别为:0. 34±0. 04、0. 57±0. 04、0. 83±0. 05,而HREC转染pEGFP-C1后24 h、48 h及72 h A值分别为:0. 26±0. 03、0. 44±0. 04、0. 61±0. 04,两者相比差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。过表达HIF-1α可显著增加HREC中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β及IL-6的蛋白表达水平,TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为(2. 63±0. 57) ng·L^(-1)、(1. 94±0. 41) ng·L^(-1)、(5. 32±0. 83) ng·L^(-1),而转染p EGFP-C1后HREC中TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为(1. 20±0. 34) ng·L^(-1)、(0. 66±0. 27) ng·L^(-1)、(1. 89±0. 60) ng·L^(-1),两者相比差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。过表达HIF-1α可显著增加HREC中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达,转染p EGFP-HIF-1α后细胞VEGF蛋白的表达为6. 72±0. 96,而转染p EGFP-C1后细胞VEGF蛋白的表达为2. 31±0. 47,两者相比差异有统计学意义(P <0. 05)。结论过表达HIF-1α可促进体外培养HREC增殖、炎症反应及血管的生成。

ATP结合盒转运蛋白A1多态性与汉族人群原发性开角型青光眼易感性的关联研究

目的分析ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)基因多态性与原发性开角型青光眼(POAG)易感性的关系。方法选取本院100例POAG患者(实验组)与100例正常健康人(对照组),采集静脉血并提取血液DNA,使用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序检测ABCA1基因rs363717和rs914545位点多态性,并比较不同基因型与POAG患病风险的关系。结果两组中ABCA1基因在rs363717和rs914545位点的基因型分布符合哈迪-温伯格定律。rs363717位点中,两组的基因型频率分布无统计学差异(P>0.05),但等位基因频率分布具有统计学差异(P<0.05)。rs914545位点中,两组的基因型频率及等位基因频率分均有统计学差异(P<0.05)。两组中ABCA1基因多态性单倍型分析发现,CGT单倍型携带者患POAG的风险较大。结论 ABCA1基因多态性与POAG的患病风险存在一定的关联,CGT单倍型携带者患POAG的风险较大,其中rs914545位点基因平衡可能是患病风险增加的主要原因。

汉族人群MMP-9基因单核苷酸多态性与PACG的相关性

目的:探讨基质金属蛋白酶9 (extracellular matrix metalloprotease 9,MMP-9)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与汉族人群原发性闭角型青光眼(primary angle closure glaucoma,PACG)易感性的关联。方法:选取我院2014-01/2016-12收治的200例汉族PACG患者作为PACG组,同时招募200例汉族体检健康者作为正常对照组。常规外周静脉采集,提取全血基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)检测两组受检者MMP-9基因rs2250889、rs2274755及rs2664538位点等位基因及基因型,分析等位基因和基因型频率分布及其与PACG易感性之间的关系。结果:两组受检者年龄、性别、体质量指数、血压等一般资料差异均无统计学意义(P> 0. 05)。MMP-9基因rs2250889、rs2274755及rs2664538位点基因型频率均符合哈迪-温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium)。两组受检者rs2250889和rs2664538位点基因型及等位基因频率分布差异均有统计学意义(P<0. 05),而rs2274755位点基因型及等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0. 05)。rs2250889位点中携带CC基因型人群为PACG的易感人群。同样, rs2664538位点中携带GG基因型人群为PACG的易感人群。结论:汉族人群中,MMP-9基因rs2250889和rs2664538位点多态性与PACG的发病存在一定关联,而rs2274755位点多态性与PACG的易感性无关。

平阳霉素联合角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉55例

目的探讨平阳霉素术前应用联合角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉的疗效。方法对55例(61眼)翼状胬肉患者分别于术前采用平阳霉素8mg,地塞米松5mg,加生理盐水4mL稀释的溶液注射到胬肉颈、体部表面下1～2次,注射后6～10d再进行角膜缘干细胞移植术,术后随访8个月至3a。结果角膜上皮于术后1～2d自移植片向角膜创面生长;3～4d见创面角膜上皮光滑、愈合、完全透明。术后复发2眼,复发率为3.22%,余无其他并发症。结论平阳霉素术前应用联合角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬内疗效显著,能明显降低术后复发率,值得推广。

新斯的明注射液致过敏性休克

1例16岁男性患儿因先天性右眼上睑下垂行新斯的明试验。试验前BP96/60mmHg。给予新斯的明注射液1mg肌内注射。14min后,患者出现胸闷、气促、呼吸困难、四肢抽搐、面色苍白、紫绀、脉搏细弱,BP60/40mmHg。立即给予吸氧、肾上腺素、地塞米松、补液等治疗,35min后症状消失,血压恢复正常。