基于HIF-VEGF-Notch通路探讨丁苯酞对氧糖剥夺/复氧人脑微血管内皮细胞的保护作用

目的基于HIF-VEGF-Notch通路探讨丁苯酞对氧糖剥夺/复氧人脑微血管内皮细胞的保护作用。方法制备氧糖剥夺/复氧人脑微血管内皮细胞模型,将细胞分为空白组、氧糖剥夺/复氧组、丁苯酞组和丁苯酞+sh-HIF-1α组。CCK-8及EdU染色检测H9c2细胞活力;流式细胞仪和AO/EB染色检测细胞凋亡;Matrigel体外成管试验检测血管生成能力;ELISA检测细胞中炎症因子含量;蛋白质印迹法检测细胞中HIF-1α、VEGF、Notch1蛋白表达。结果和空白组相比,氧糖剥夺/复氧组细胞存活率(51.32±4.68)%、EdU阳性细胞率(12.08±0.75)%、小管形成数目(121.08±10.59)个明显降低,细胞凋亡率(14.92±1.06)%、细胞中IL-1β(30.46±2.51)pg/mL、IL-6(35.96±2.74)pg/mL、TNF-α(24.08±1.95)pg/mL水平、HIF-1α(0.61±0.08)、VEGF(0.72±0.08)、Notch1(0.43±0.05)蛋白表达明显升高(P<0.01);和氧糖剥夺/复氧组相比,丁苯酞组细胞存活率(85.94±7.09)%、EdU阳性细胞率(20.27±2.01)%、小管形成数目(204.15±16.71)个及细胞中HIF-1α(1.15±0.12)、VEGF(0.96±0.10)、Notch1(0.87±0.10)蛋白表达均明显增加,细胞凋亡率(7.40±0.65)%、细胞中IL-1β(10.32±0.87)pg/mL、IL-6(12.81±1.03)pg/mL、TNF-α(10.31±0.89)pg/mL水平明显降低(P<0.0001);和丁苯酞组相比,丁苯酞+sh-HIF-1α组细胞存活率(54.18±5.06)%、EdU阳性细胞率(15.46±0.83)%、小管形成数目(129.26±11.64)个及细胞中HIF-1α(0.53±0.06)、VEGF(0.60±0.06)、Notch1(0.36±0.04)蛋白表达明显降低,细胞凋亡率(12.87±1.01)%、细胞中IL-1β(28.59±2.39)pg/mL、IL-6(32.87±2.31)pg/mL、TNF-α(22.01±1.87)pg/mL水平明显升高(P<0.01)。结论丁苯酞可促进氧糖剥夺/复氧人脑微血管内皮细胞血管生成,从而对损伤的细胞发挥保护作用,其作用机制可能和促进HIF-1α/VEGF/Notch1信号通路激活有关。