代谢组学技术及其在中医药研究中的应用

代谢组学是继基因组学、蛋白组学和转录组学之后出现的一门新兴的"组学",目前已在生命科学领域得到了广泛的应用并展现出良好的前景。代谢组学通过分析外界刺激后生物体内相对分子质量较低的代谢物的全面变化,来认识生物体的生理和病理状态。代谢组学为中药安全性评价,中药复方的物质基础与作用机制研究以及中医证候的认识提供了强有力的技术支持。

小鼠葡聚糖硫酸钠急性溃疡性结肠炎模型的建立和评价

目的：探讨不同浓度葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium,DSS）及不同体重段ICR小鼠对诱导急性UC模型的影响。方法：采用ICR小鼠自由饮用DSS溶液（2%、3%、4%、5%）的方法建立急性UC模型,正常组饮用蒸馏水作为对照。通过疾病活动指数（DAI）和组织学来评价结肠的形态和组织病理学改变。结果：DAI评分随着浓度（2%、3%、4%和5%）的增加而增加,并与小鼠体重相关;死亡率随浓度的增加而升高,随体重增加而降低。结论：DSS模型的临床表现和病理表现与人类UC及其相似,是理想的UC模型。采用ICR小鼠饮用3%DSS（分子量为36000~50000）溶液7 d的方法可建立理想的UC急性模型。

微波萃取技术在提取多糖方面的应用

微波萃取法在中草药中的有效成分提取方面被广泛应用并对多糖的提取分离具有很好的效果,因为它不仅仅有提取作用,也会起到分离的作用,具有显著生物活性的多糖成分具有较好选择性。多糖是中药重要的有效成分,本文对微波萃取法在多糖提取方面的研究进行综述,并总结归纳微波萃取法在提取多糖方面的工艺,为相关的提取多糖研究和实际生产提供了重要的参考。

商陆脂溶性成分的GC-MS分析及其利尿、致泻作用研究

目的:对商陆脂溶性成分进行成分分析,并研究其利尿及致泻作用。方法:采用GC-MS分析商陆的脂溶性成分,采用大鼠代谢笼法及大鼠大肠推进实验研究商陆脂溶性成分的利尿及致泻作用。结果:通过GC-MS,我们鉴定了14个化合物,其中含量较大的组分有邻苯二甲酸二丁酯、棕榈酸甲酯、棕榈酸、亚油酸甲酯及亚油酸等。此外,我们发现商陆脂溶性高,中剂量组具有显著地利尿及致泻作用。结论:商陆脂溶性成分具有显著地利尿及致泻作用,认为商陆脂溶性成分是商陆发挥"通利二便"传统功效的物质基础。

药物共晶(HTHB)_4·(SiW_(12)O_(40))合成、表征及抗肿瘤活性研究

利用溶剂热法探索合成一种未见报道的四氢小檗碱与硅钨酸药物共晶(HTHB)_4·(Si W_(12)O_(40)),通过X-射线单晶衍射、IR、XRPD和TGA等方法确定结构。X-射线单晶衍射数据分析结果表明,该化合物属四方晶系,P4/n空间群,晶胞参数:a=23.7874(15)?,b=17.2595(16)?,c=23.7874(15)?,V=9 766.1(13)?3,F(000)=7 496,Z=4。体外抗肿瘤活性试验结果表明,相同药物浓度下药物共晶(HTHB)_4·(Si W_(12)O_(40))抗肿瘤活性优于四氢小檗碱和硅钨酸抗肿瘤活性。

杜香中黄酮类化学成分的分离与鉴定

目的:研究杜香(Ledum palustre L.)嫩枝中的黄酮类化学成分。方法:通过硅胶、ODS等柱色谱和制备型HPLC对其进行分离,采用1H和13C-NMR谱,结合HRESI-MS质谱数据鉴定化合物结构。结果:分离得到5个黄酮类化合物,分别鉴定为licuraside(1)、芦丁(2)、槲皮素-3-O-β-D-木糖基-(1→2)-β-D-半乳糖苷(3)、金丝桃苷(4)、异鼠李素-3-O-(6-香豆酸酯)-β-D-葡萄糖苷(5)。结论:化合物3和5为首次从杜香属植物中分离得到。

白鲜皮多糖硫酸酯化修饰及抗银屑病作用研究

目的:对白鲜皮精制多糖(DDP-Ⅲ)进行硫酸酯化修饰,并比较其酯化修饰前后的结构特征及抗银屑病作用。方法:采用DEAE-52阴离子交换纤维素柱、Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱等对白鲜皮多糖(DDP)进行分离纯化,得DDP-Ⅲ;用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化后,采用高效液相色谱法测定其单糖组成。用酯化试剂(无水吡啶+氯磺酸)对DDP-Ⅲ进行硫酸酯化修饰,得SDDP-Ⅲ;采用氯化钡-明胶浊度法测定其硫酸根取代度,并通过红外光谱、拉曼光谱、扫描电镜比较修饰前后的结构特征。将雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(雷公藤多苷,20 mg/kg)和DDP-Ⅲ/SDDP-Ⅲ低、中、高剂量组(均分别为56、112、224mg/kg)。除正常组小鼠外敷凡士林外,其余各组小鼠均外敷咪喹莫特乳膏复制银屑病模型。各给药组小鼠灌胃相应药物溶液0.4mL,正常组与模型组小鼠灌胃等体积水,每天1次,连续14 d。末次给药2 h后,采用酶联免疫吸附测定法检测各组小鼠血清白细胞介素17(IL-17)、IL-23含量,采用苏木精-伊红染色法观察其近尾部皮肤鳞片,并记录有颗粒层鳞片数。结果:DDP-Ⅲ由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖组成。SDDP-Ⅲ的硫酸根取代度为0.65。红外光谱、拉曼光谱分析结果显示,除与DDP-Ⅲ有相同的特征吸收峰外,SDDP-Ⅲ分别在1 255、823 cm^(-1)和1 240、815 cm^(-1)处有硫酸根基团的特征吸收峰。扫描电镜分析结果显示,DDP-Ⅲ呈片状,表面光滑、平整,排列紧密;SDDP-Ⅲ呈块状或颗粒状,有孔洞结构,排列疏松。动物实验结果显示,与正常组比较,模型组小鼠皮损表皮明显增厚,颗粒层明显减少,其血清IL-17、IL-23含量均显著升高,有颗粒层鳞片数显著减少(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠上述症状均有不同程度的改善,阳性组、DDP-Ⅲ高剂量组以及SDDP-Ⅲ中、高剂量组小鼠血清IL-17、IL-23含量均显著下降,有颗粒层鳞片数均显著升高,且SDDP-Ⅲ中、高剂量组上述指标均显著优于DDP-Ⅲ同剂量组(P<0.05或P<0.01)。结论:DDP-Ⅲ含有甘露糖等5种单糖成分。DDP-Ⅲ、SDDP-Ⅲ均具有一定的抗银屑病作用,且经硫酸酯化修饰的SDDP-Ⅲ的作用更强;这种作用可能与抑制IL-23/IL-17信号通路有关。

沙棘果多酚提取工艺优化及其抗阿尔茨海默症活性

目的:确定沙棘果多酚(SBP)最佳提取工艺,并探究其醇提取物抗阿尔茨海默症(AD)活性。方法:以单因素实验为基础,星点设计-效应面法(CCD-RSM)优化沙棘果乙醇提取物提取工艺。60只小鼠随机分为空白组、阳性组、模型组及SBP高、中、低剂量组,D-半乳糖联合三氯化铝诱导AD模型。利用Morris水迷宫进行神经行为学检测,酶联免疫吸附测定小鼠脑中乙酰胆碱(Ach)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)及乙酰胆碱酯酶(AchE)含量,HE染色观察脑海马区形态变化。结果:SBP最佳提取工艺为乙醇浓度为71%,超声时间32 min,液料比20∶1 m L/g,SBP提取量是3.0813 mg/g。与模型组比较,SBP高剂量组AD小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.01),探索潜伏期显著延长,探索次数显著减少(P<0.05),Ach含量极显著增加(P<0.01),AchE含量极显著减少(P<0.01),ChAT含量显著增加(P<0.05),小鼠脑海马区形态明显改善。结论:SBP提取工艺优化,实际值与预测值吻合度高,可行性强;SBP能够调节改善学习记忆能力,具有良好的抗AD活性。

基于网络药理学及分子对接技术探讨沙棘治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的:揭示沙棘治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制,为进一步探究沙棘治疗AD的药效物质基础提供理论参考。方法:通过TCMSP、Uniprot、GeneCards等数据库筛选沙棘活性成分、靶点及AD相关靶点基因;采用Cytoscope 3.7.1软件构建化合物-靶点-疾病网络图;通过STRING数据库制作靶点相互作用(PPI)网络,筛选度值较高的沙棘治疗AD的潜在靶点与沙棘活性成分进行分子对接;采用Clue GO插件对沙棘治疗AD的潜在靶点进行GO基因本体(GO)分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。取50只小鼠随机分为空白组、模型组[D-半乳糖120 mg/(kg·d)及AlCl_3溶液20 mg/(mL·d)]、阳性药物组[奥拉西坦260 mg/(kg·d)]、沙棘果油提取物组[1.6 g/(kg·d)]、沙棘多酚提取物组[1.6 g/(kg·d)],每组10只。各组小鼠分别灌胃相应药物的同时灌胃造模剂,空白组灌胃等体积蒸馏水,每天1次,连续给药60 d。通过Morris水迷宫实验测定各组小鼠学习记忆能力,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠海马体组织免疫因子水平,采用苏木素-伊红染色(HE)法观察海马体的病理学变化,对沙棘治疗AD的作用机制进行初步验证。结果:沙棘22个活性成分(槲皮素、山柰酚、异鼠李素、β-胡萝卜素、β-谷固醇等)可能通过调控丝氨酸/苏氨酸激酶编码蛋白(AKT1)、氨基端激酶(JUN)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK1)等147个靶点影响核受体活性、脂多糖介导的信号通路等生物过程及白细胞介素17(IL-17)信号传导途径、肿瘤坏死因子(TNF)信号传导途径等114条代谢通路。分子对接结果显示,沙棘主要活性成分与主要靶点蛋白结合分值均在4.25以上,具有较好的结合活性。药理学实验结果显示,沙棘提取物能够使AD模型小鼠的逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增加,减轻其脑海马体组织损伤,降低其脑海马体组织中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17含量。结论:沙棘的活性成分可调控AD发病重要通路中的多个靶点;动物实验初步验证其可通过抑制炎症因子的表达,来减轻AD模型小鼠海马体损伤,改善小鼠学习记忆能力。

硫酸酯化沙棘叶多糖的制备及其解酒作用

探究硫酸酯化沙棘叶多糖(sulfated seabuckthorn leaf polysaccharide,SSLP)的解酒作用。采用氯磺酸-吡啶法修饰沙棘叶多糖(seabuckthorn leaf polysaccharide,SLP),氯化钡-明胶浊度法及红外光谱法检测其取代情况。瓦勒-霍赫法检测SSLP及SLP对乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase ,ADH)的影响作用。使用酒精建立小鼠醉酒模型,记录小鼠醉酒潜伏时间、持续醉酒时间,测定血清中ADH活性。结果表明,SSLP在1 244.07、808.16 cm-1处有S=O 、C-O-S吸收峰,表明酯化成功,硫酸基取代度为1.63;与模型组比较,SLP和SSLP组小鼠醉酒潜伏期显著延长,持续醉酒时间显著缩短,ADH活性显著增强,且SSLP优于SLP。说明SSLP与SLP均具有较好的解酒作用且SSLP的解酒活性更优,因此可通过衍生化的方式增强SLP的解酒活性。

基于NF-κB信号通路的中药抗溃疡性结肠炎研究进展

溃疡性结肠炎是一种慢性、非特异性肠病,其发病机制尚不明确。目前的治疗以氨基水杨酸、类固醇激素与免疫抑制剂3类药物为主,但是无法有效的防治,不可长期使用。近年来,大量研究以中药复方、单味药或者活性成分为研究对象,以期开发出治疗、预防溃疡性结肠炎的新型药物。就NF-κB信号通路在溃疡性结肠炎中的作用及以NF-κB通路中相关蛋白和酶为靶点的中药抗溃疡性结肠炎的研究进展进行综述。

半仿生提取法在中药提取中的应用

提取是中药制药工程的关键环节,直接影响着药品的质量,提取新技术的发展是中药制造工业技术升级转型的关键,关系着中药现代化的进程。作为一种新兴的提取技术,半仿生提取利用"灰思维方式",根据中药大部分药效成分未知的特点和中药物质基础整体特征,采用模拟口服给药经胃肠道吸收和转运的过程,得到有效成分更高的活性混合物。本文总结了半仿生提取技术在中药提取中的应用,并对近年来出现的新技术(微波、超声波及酶法)辅助半仿生法在中药提取中的应用进行总结,结果表明相对于传统提取技术,半仿生提取技术具有明显的优势,应用前景良好。

利水中药功效发挥与水通道蛋白之间的关系

近年来,水通道蛋白的发现及其研究使人们对"水"代谢的生理及病理过程有了更加深入的了解;并且长期以来,对于"利水中药"的研究缺乏分子层面的靶点,难以进行深入的、定量化的研究;而水通道蛋白的发现成为诠释"利水中药"发挥其功效机制的新的靶分子。通过水通道蛋白,可以理解中药"利水"功效的内在涵义,还可以对"利水"这一作用进行量化研究。目前,众多学者已经运用水通道蛋白研究成果在中医药领域开展了一系列的研究,并且取得了一定的进展。该文通过水通道蛋白这一靶分子来探讨"利水"中药功效的发挥做一综述。

商陆化学成分及药理作用和临床应用研究进展

商陆为《中国药典》收载品种,包括商陆Phytolacca acinosa与垂序商陆P.americana,具有重要的药用价值。商陆的特征性化学成分是三萜皂苷,此外还有黄酮、酚酸、甾醇、多糖等成分。现代药理学研究表明,商陆具有利尿、抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤等作用;临床上多用其治疗乙型肝炎、银屑病、过敏性紫癜等疾病。对商陆的化学成分、药理作用和临床疗效进行了总结,以期为商陆的开发利用及深入研究提供参考。

车前子水煎液对痛风性肾病大鼠的肾保护作用及机制

目的：观察车前子水煎液对痛风性肾病大鼠的药效学指标及对肾组织半胱氨酸蛋白酶-1（cysteine-aspartic acid protease-1,Caspase-1）,Nod样受体蛋白3（Nod-like receptor protein 3,NLRP3）和凋亡相关点样蛋白（fapoptosis-associated specklike protein,ASC）表达的影响,探讨车前子水煎液对痛风性肾病大鼠的肾保护作用和初步机制。方法：60只SD大鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,阳性药组（别嘌醇,50 mg·kg^（-1））,车前子水煎液高、中、低剂量组（1.62,0.81,0.27 g·kg^（-1））,除正常组外,其余各组采用腺嘌呤和酵母联用的方法制作痛风性肾病大鼠模型,给予车前子水煎液,观察肾脏特征;计算肾重指数;检测大鼠血清中尿酸（uric acid,UA）,尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）,肌酐（creatinine,SCr）,丙氨酸氨基转移酶（cereal third transaminase,ALT）,天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase,AST）,碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）;采用光镜观察肾脏病理形态学变化;蛋白免疫印迹法（Western bolt）和免疫组化法（immunohistochemical methods）测定肾组织中NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达量。结果：与模型组比较,别嘌醇组和车前子水煎液各剂量组的肾脏体积减小,别嘌醇组和车前子中剂量组肾重指数降低,车前子高剂量组肾重指数降低明显,别嘌醇组和车前子水煎液各剂量组血清UA,BUN,SCr,ALT,AST,ALP明显降低（P〈0.05,P〈0.01）,肾组织病变程度均有一定减轻,其中车前子高、中剂量组最好,别嘌醇组和车前子水煎液高剂量组中NLRP3,ASC和Caspase-1蛋白的表达明显降低（P〈0.05,P〈0.01）,车前子水煎液中剂量组中NLRP3蛋白的表达降低（P〈0.05）。结论：车前子对痛风性肾病大鼠具有较好肾保护作用,可能与其下调肾组织中NLRP3,ASC和Caspase-1蛋白表达,抑制下游炎性细胞因子释放有关。

车前子、牛膝配伍治疗膜性肾病的网络药理学研究

目的研究车前子、牛膝配伍治疗膜性肾病可能的作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索筛选出车前子、牛膝有效活性成分与作用靶点;利用OMIM、GeneCards数据库搜索膜性肾病的相关靶点;采用R语言对成分靶点和疾病靶点进行映射,将交集靶点上传至在线STRING数据库,构建蛋白相互作用(PPI)网络,采用Cytoscape 3.7.1软件绘制成分-靶点-疾病网络图和PPI网络图;运用分子对接软件对活性成分及关键靶点进行分子对接,验证网络分析结果;利用DAVID数据库进行基因功能GO分析和KEGG通路富集分析。结果去重后共得到27个有效成分,包括槲皮素(Quercetin)、山奈酚(Kaempferol)、小檗碱(Berberine)等;关键靶点12个,涉及转录因子AP-1(JUN)、肿瘤坏死因子(TNF)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、白细胞介素6(IL-6)等;GO功能富集分析得到GO条目106个,KEGG通路富集得到99条信号通路,主要涉及MAPK信号通路、IL-17信号通路、PI3K-Akt信号通路和相关疾病通路等。结论初步揭示了车前子、牛膝配伍治疗膜性肾病具有多成分、多靶点、多途径的特点。通过调控MAPK等信号通路来影响炎性因子的表达及肾小球系膜细胞的增生,达到治疗膜性肾病的作用。

商陆性味演变的本草考证

目的阐明商陆性味的科学内涵,并为正确指导临床实践和科学研究提供理论依据。方法将历代本草著作按时间顺序排列,研究商陆性味历史变迁过程,从而发现商陆性味变化的规律。结果经考证发现商陆的"性"由"平"向"寒";商陆的"味"由"酸","辛"向"苦"转变的过程,并解释商陆存在的各个"性"与"味"标定的依据。结论研究结果可为商陆的性味研究,商陆药材的研制开发,进而为其应用于临床提供重要的参考。

星点设计-效应面法优化白鲜皮多糖硫酸酯化工艺及抗氧化活性

目的利用星点设计-效应面法优化白鲜皮多糖(Dictamnus dasycarpus polysaccharide,DDP)硫酸酯化工艺,考察DDP修饰前后结构特征及抗氧化活性。方法采用氯磺酸-吡啶法,以酯化试剂比例、酯化试剂与多糖溶液比例、反应温度、反应时间为自变量,硫酸根取代度(degree of substitution,DS)为因变量,对自变量各水平进行多元回归拟合,利用效应面法筛选最佳工艺并进行预测分析;采用红外光谱及扫描电镜观察其结构特点。测定硫酸酯化白鲜皮多糖(sulfated polysaccharides from Dictamnus dasycarpus,SDDP)对DPPH、OH·、O2^-·清除能力,考察其抗氧化活性。结果最佳工艺条件为酯化试剂比例1∶4,酯化试剂与多糖溶液比例1∶1,反应温度73℃,反应时间5 h。红外光谱显示SDDP在820 cm^-1和1254 cm^-1附近出现C-O-S和S=O硫酸基特征吸收峰,表明DDP修饰成功;扫描电镜显示SDDP表面粗糙,排列紧密,且块状体积明显小于DDP;DDP和SDDP都有清除DPPH、OH·和O2^-·能力,且SDDP对DPPH、OH·和O2^-·清除率强于DDP。结论星点设计-效应面法优化DDP硫酸酯化工艺方法简便且预测性良好,DDP经硫酸酯化后,抗氧化活性有所提高。