经典名方保阴煎HPLC指纹图谱的建立及多成分含量测定方法研究

目的:建立经典名方保阴煎HPLC指纹图谱及5-羟甲基糠醛、芍药苷、小檗碱、黄芩苷的同时含量测定方法。方法:按照传统制法制备保阴煎基准样品,利用HPLC-UV法建立化学成分指纹图谱,并进行相似度评价及峰归属;选择组方药物药效相关成分5-羟甲基糠醛、芍药苷、小檗碱、黄芩苷建立多成分同时定量方法。结果:保阴煎指纹图谱中确定20个共有峰,15批保阴煎基准样品指纹图谱的相似度均>0.9;多成分同时定量方法中,5-羟甲基糠醛、芍药苷、小檗碱、黄芩苷的线性范围分别为0.34~10.97μg/mL、5.83~186.70μg/mL、2.64~84.60μg/mL、19.76~632.40μg/mL,线性关系良好,加样回收率分别为87.64~102.03%,RSD为2.00%~3.00%,精密度、稳定性、重复性均符合相应要求。结论:建立的保阴煎HPLC指纹图谱及多成分同时定量方法,能够用于保阴煎质量控制。

经典名方当归建中汤HPLC指纹图谱及含量测定方法研究

目的建立经典名方当归建中汤(DJD)HPLC指纹图谱及主要成分含量测定方法。方法按照传统制法制备DJD基准样品,利用HPLC法建立基准样品的指纹图谱,进行相似度评价及色谱峰归属,选择效应关联成分阿魏酸、芍药苷、甘草苷、肉桂酸、桂皮醛作为指标成分,建立基准样品的含量测定方法。结果15批DJD基准样品指纹图谱的相似度均大于0.9,确定了28个共有峰;5个指标成分含量测定方法学考察均符合2020年版《中国药典》规定,DJD基准样品中阿魏酸含量为0.028%~0.034%,芍药苷含量为1.498%~2.143%、甘草苷含量为0.082%~0.318%、肉桂酸含量为0.012%~0.025%、桂皮醛含量为0.002%~0.012%。结论建立的方法准确、稳定、重复性好,为DJD基准样品质量控制及复方制剂的开发提供了参考。

三棱UPLC-UV特征图谱研究

目的:建立三棱化学成分的超高效液相色谱-紫外法(UPLC-UV)特征图谱,并对主要特征峰进行指认。方法:色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,线性梯度洗脱,双波长切换检测,0~12 min为300 nm,12~16 min为240 nm,测定10批三棱药材UPLCUV图,确定共有特征峰并计算相似度,利用对照品及超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q/TOF-MS)对主要特征峰进行指认。结果:采集了10批三棱药材UPLC-UV指纹图谱,确定11个特征峰,相似度均大于0.9,认定了9个特征峰,其中通过对照品指认了咖啡酸、对羟基苯甲酸、对香豆酸,通过质谱解析指认了2个苯丙素乙酰蔗糖酯、3个苯丙素甘油酯及首次在三棱中发现的三棱酮。结论:建立了三棱UPLC-UV特征图谱,能够表征不同结构类型的三棱化学成分,为三棱药材质量控制提供了参考。

经典名方固阴煎基准样品HPLC指纹图谱研究

目的 建立经典名方固阴煎基准样品HPLC指纹图谱,结合多元统计分析对15批固阴煎基准样品进行质量评价,为其基准样品质量控制研究提供参考。方法 采用Waters SymmetryR C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱(0~10 min,0~5%乙腈;10~20 min,5%~10%乙腈;20~33 min,10%~11%乙腈;33~42 min,11%~18%乙腈;42~50 min,18%乙腈;50~80 min,18%~40%乙腈;80~100 min,40%~100%乙腈),体积流量1 mL/min,柱温40℃,检测波长230 nm,进样体积5μL,建立固阴煎基准样品HPLC指纹图谱,并进行方法学考察。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)对15批固阴煎基准样品指纹图谱进行相似度评价,匹配共有峰,并对各共有峰进行归属研究。结合聚类分析、主成分分析(principal component analysis,PCA)与正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)对共有峰结果进行统计学分析,评价不同批次固阴煎基准样品的质量差异,并找寻造成批间质量差异的主要成分及药味来源。结果 固阴煎基准样品HPLC指纹图谱方法学验证良好,15批固阴煎基准样品与对照指纹图谱的相似度均大于0.9。共标定了24个共有峰,经与混合对照品比对,鉴定11个色谱峰,分别为1号峰没食子酸、3号峰5-羟甲基糠醛、6号峰莫诺苷、7号峰绿原酸、9号峰马钱苷、11号峰甘草苷、12号峰金丝桃苷、13号峰毛蕊花糖苷、14号峰3,6′-二芥子酰基蔗糖、22号峰甘草酸、23号峰五味子醇甲。聚类分析和PCA可将15批基准样品分为2类,分析结果可互相印证。OPLS-DA(VIP>1)找到莫诺苷、5-羟甲基糠醛、绿原酸在内的11个差异性色谱峰,分别归属于单味药制远志、炒菟丝子、山茱萸、炙甘草和熟地黄。结论 建立的固阴煎基准样品HPLC指纹图谱专属性强、灵敏度高、分离度好、重复性、稳定性良好,除人参和炒山药以外均有表征,可为其后续制剂开发和质量控制研究提供参考。

熟地黄药效物质基础研究进展

熟地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa新鲜或干燥块根的炮制加工品,具有补血滋阴、益精填髓等功效。熟地黄是中药“滋阴”作用最具代表的药味之一,也被称之为“至阴之药”。熟地黄配伍相关经典方剂被广泛应用于治疗肝肾阴虚导致的各种临床疾病,包括糖尿病相关疾病、神经系统疾病、骨关节炎相关疾病、妇科相关疾病等。基于近年来发表的文献,对熟地黄化学成分、活性成分的药理作用、方剂配伍条件下的药效物质的基础研究进展进行综述,以期为熟地黄的深入研究提供参考。

基于UPLC-Q-TOF-MS^(E)结合多元统计方法的不同产地白芍药材质量评价

目的分析不同产地白芍药材质量差异及特异性化学成分,为白芍的产地判别和质量评价提供依据。方法采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MSE)对不同产地白芍样品全成分分析,应用主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)及聚类分析(cluster analysis,CA)对安徽亳州、四川中江、浙江磐安3个产地共15批次白芍药材进行多元统计分析,根据VIP值>1和t检验(P<0.05)筛选不同产地白芍药材中具有显著差异的化学成分。结果从不同产地白芍药材中共鉴定出44个化学成分,以单萜类、鞣质类、三萜类、黄酮类、挥发油类等成分为主,其中以单萜类成分含量最高。不同产地白芍的化学成分差异明显,共鉴定出16个差异化学成分,其中牡丹皮苷G为安徽亳州产地特有成分,1,2,3,6-四-O-没食子酰-β-D-葡萄糖为浙江磐安产地的特有成分,1-O-β-D-glucopyranosylpaeonisuffrone为四川中江产地特有成分;柠檬酸、1-没食子酸酰葡萄糖、去苯甲酰基芍药苷或异构体、没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、没食子酸甲酯、没食子酰芍药苷或异构体、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、白芍苷R1、牡丹皮苷B为3个产地共有成分,但含量呈现不同的变化规律。结论不同产地白芍质量差异明显,在共有成分基础上,安徽亳州白芍含有特异成分牡丹皮苷G,浙江磐安白芍含有特异成分1,2,3,6-四-O-没食子酰-β-D-葡萄糖,四川中江白芍的特有成分为1-O-β-D-glucopyranosylpaeonisuffrone,可作为产地鉴别的依据,共有成分及差异成分的含量可作为质量评价的依据。

基于UPLC-MS/MS多反应监测的温心方人参皂苷Rb1、肉桂酸、芍药苷及小檗碱同时定性定量分析

目的建立基于超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)多反应监测(MRM)模式的温心方中人参皂苷Rb1、肉桂酸、芍药苷及小檗碱同时定性定量的分析方法,为温心方新药研发提供评价方法。方法采用Waters ACQUITY UPLCTM HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.03%甲酸水溶液,梯度洗脱,利用三重四极杆在MRM扫描模式下检测,以保留时间及相对丰度比(定性离子对/定量离子对)定性,以定量离子对峰面积进行定量研究。结果温心方中4种有效成分均被定性检出且线性关系良好;准确度、精密度、重复性、稳定性良好;回收率为96.24%~104.19%,RSD为1.29%~3.27%。结论该方法简便、准确、快速、灵敏,可用于温心方中4种有效成分的定性定量研究。